विशेष वातावरण।

बैक्टीरियोलॉजी में, औद्योगिक उत्पादन के शुष्क पोषक माध्यम का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, जो पानी को छोड़कर, माध्यम के सभी घटकों से युक्त हीड्रोस्कोपिक पाउडर होते हैं। उनकी तैयारी के लिए, सस्ते गैर-खाद्य उत्पादों (मछली का अपशिष्ट, मांस और हड्डी का भोजन, तकनीकी कैसिइन) के ट्राइप्टिक डाइजेस्ट का उपयोग किया जाता है। वे परिवहन के लिए सुविधाजनक हैं, लंबे समय तक संग्रहीत किए जा सकते हैं, प्रयोगशालाओं को मीडिया तैयार करने की विशाल प्रक्रिया से राहत देते हैं, और मीडिया के मानकीकरण के मुद्दे को समाधान के करीब लाते हैं। चिकित्सा उद्योग एंडो, लेविन, प्लॉस्किरेव, बिस्मथ सल्फाइट अगर, पोषक तत्व अगर, बीपी संकेतक के साथ कार्बोहाइड्रेट और अन्य के शुष्क मीडिया का उत्पादन करता है।

ऊष्मातापी

थर्मोस्टैट्स का उपयोग सूक्ष्मजीवों की खेती के लिए किया जाता है।

थर्मोस्टेट एक ऐसा उपकरण है जो एक स्थिर तापमान बनाए रखता है। डिवाइस में एक हीटर, एक कक्ष, दोहरी दीवारें होती हैं जिनके बीच हवा या पानी घूमता है। तापमान को थर्मोस्टेट द्वारा नियंत्रित किया जाता है। अधिकांश सूक्ष्मजीवों के प्रजनन के लिए इष्टतम तापमान 37 डिग्री सेल्सियस है।

गतिविधि 7

विषय: शुद्ध एरोबिक संस्कृति के अलगाव के तरीके। यांत्रिक असंयोजन की विधि द्वारा एरोबिक बैक्टीरिया की एक शुद्ध संस्कृति के अलगाव के चरण

शिक्षण योजना

1. बैक्टीरिया की "शुद्ध संस्कृति" की अवधारणा

2. यांत्रिक पृथक्करण द्वारा शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के तरीके

3. शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के लिए जैविक तरीके

4. बैक्टीरिया की पहचान करने के तरीके

पाठ का उद्देश्य:शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के लिए विभिन्न तरीकों से छात्रों को परिचित कराने के लिए, लूप, स्ट्रोक, चुभन के साथ फसल कैसे करना है यह सिखाने के लिए

प्रदर्शन के लिए दिशानिर्देश

अपने प्राकृतिक आवास में, जीवाणु संघों में पाए जाते हैं। रोगाणुओं के गुणों को निर्धारित करने के लिए, रोग प्रक्रिया के विकास में उनकी भूमिका, सजातीय आबादी (शुद्ध संस्कृतियों) के रूप में बैक्टीरिया का होना आवश्यक है। एक शुद्ध संस्कृति पोषक माध्यम पर उगाई जाने वाली एक ही प्रजाति के जीवाणु व्यक्तियों का संग्रह है।

एरोबिक बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के तरीके

पाश्चर विधि कोच विधि जैविक भौतिक

(ऐतिहासिक है (प्लेट वायरिंग)

अर्थ)

रासायनिक विधि

शुकुकेविच

आधुनिक

एक लूप के साथ बुवाई एक स्पैटुला के साथ बुवाई

(ड्रिगल्स्की विधि)

शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के तरीके:

1. यांत्रिक पृथक्करण के तरीके, अगर की सतह पर परीक्षण सामग्री के क्रमिक रगड़ द्वारा रोगाणुओं के पृथक्करण पर आधारित होते हैं।

क) पाश्चर की विधि - ऐतिहासिक महत्व की है, रोलिंग विधि द्वारा तरल पोषक माध्यम में परीक्षण सामग्री के लगातार कमजोर पड़ने के लिए प्रदान करती है

बी) कोच विधि - प्लेट लेआउट की विधि - मांस-पेप्टोन अगर के साथ परीक्षण सामग्री के अनुक्रमिक कमजोर पड़ने पर आधारित है, इसके बाद पेट्री डिश में पतला सामग्री के साथ टेस्ट ट्यूब डालने के बाद।

ग) ड्रायगल्स्की विधि - जब माइक्रोफ्लोरा के साथ प्रचुर मात्रा में सामग्री बोते हैं, तो एक स्पैटुला के साथ लगातार बुवाई के लिए 2-3 कप का उपयोग करें।

घ) समानांतर स्ट्रोक में एक लूप के साथ बुवाई।

2. जैविक विधियाँ रोगजनकों के जैविक गुणों पर आधारित होती हैं।

a) जैविक - अत्यधिक संवेदनशील जानवरों का संक्रमण, जहां रोगाणु तेजी से गुणा और जमा होते हैं। कुछ मामलों में, यह विधि केवल एक ही है जो आपको एक बीमार व्यक्ति से रोगज़नक़ की संस्कृति को अलग करने की अनुमति देती है (उदाहरण के लिए, टुलारेमिया के साथ), अन्य मामलों में यह अधिक संवेदनशील है (उदाहरण के लिए, सफेद चूहों में न्यूमोकोकस का अलगाव) या गिनी सूअरों में तपेदिक का प्रेरक एजेंट)।

बी) रासायनिक - माइकोबैक्टीरिया के एसिड प्रतिरोध पर आधारित। सामग्री को सहवर्ती वनस्पतियों से मुक्त करने के लिए, यह
एक एसिड समाधान के साथ इलाज किया। केवल ट्यूबरकल बेसिली ही बढ़ेगी, क्योंकि अम्ल-सहिष्णु रोगाणुओं को अम्ल द्वारा मार दिया जाता है।

ग) भौतिक विधि बीजाणुओं के ताप के प्रतिरोध पर आधारित है। बीजाणु बनाने वाले जीवाणुओं की संस्कृतियों को अलग करने के लिए
मिश्रण, सामग्री को 80 डिग्री सेल्सियस पर गरम किया जाता है और पोषक माध्यम पर टीका लगाया जाता है। केवल बीजाणु जीवाणु ही विकसित होंगे, क्योंकि उनके बीजाणु जीवित रहे और वृद्धि दी।

d) शुकेविच की विधि - रेंगने वाले विकास में सक्षम वल्गर प्रोटीस की उच्च गतिशीलता पर आधारित है।

आगर प्लेट तैयार करने की विधि

एमपीए को पानी के स्नान में पिघलाया जाता है, फिर 50-55 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किया जाता है। शीशी की गर्दन को शराब के दीपक की लौ में जला दिया जाता है, पेट्री डिश खोल दी जाती है ताकि शीशियों की गर्दन प्रवेश कर जाए, पकवान के किनारों को छुए बिना, एमपीए के 10-15 मिलीलीटर डालें, ढक्कन बंद करें, डिश को हिलाएं ताकि माध्यम समान रूप से वितरित हो जाए, इसे एक क्षैतिज सतह पर जमने तक छोड़ दें। सुखाने के बाद प्लेट अगर वाली प्लेट को ठंड में स्टोर कर लिया जाता है।

लूप बुवाई

सामग्री की एक बूंद एक बाँझ कूल्ड लूप के साथ ली जाती है, कप के एक किनारे को बाएं हाथ से थोड़ा खोला जाता है, एक लूप अंदर डाला जाता है और एक जगह विपरीत किनारे पर कुछ स्ट्रोक किए जाते हैं, फिर लूप को फाड़ दिया जाता है और सामग्री को 5-6 मिमी के अंतराल के साथ कप के एक किनारे से दूसरे किनारे तक समानांतर स्ट्रोक के साथ टीका लगाया जाता है। बुवाई की शुरुआत में, जब लूप पर बहुत सारे रोगाणु होंगे, तो वे मिश्रित वृद्धि देंगे, लेकिन लूप पर रोगाणुओं के प्रत्येक स्ट्रोक के साथ, कम और कम होगा, और वे एकान्त रहेंगे और अलग-थलग रहेंगे। कालोनियों।

ड्राईगल्स्की विधि के अनुसार बुवाई

इस विधि का उपयोग तब किया जाता है जब सामग्री को बहुतायत से माइक्रोफ्लोरा (मवाद, मल, थूक) के साथ बोया जाता है। ड्रायगल्स्की विधि के अनुसार बुवाई के लिए, एक स्पैटुला और कई कप (3-4) लिए जाते हैं। एक स्पैटुला धातु के तार या कांच के डार्ट से बना एक उपकरण है, जो त्रिकोण या एल-आकार के रूप में मुड़ा हुआ है। सामग्री को पहले कप में एक लूप या पिपेट के साथ पेश किया जाता है और समान रूप से माध्यम की सतह पर एक स्पुतुला के साथ वितरित किया जाता है, उसी स्पुतुला के साथ, इसे जलाने के बिना, सामग्री को दूसरे कप में पोषक माध्यम में रगड़ दिया जाता है, और फिर तीसरे में। इस टीकाकरण के साथ, पहली प्लेट में कंफर्टेबल ग्रोथ होगी, और बाद की प्लेटों में अलग-अलग कॉलोनियां बढ़ेंगी।

यदि, पौधों पर कुछ लक्षणों और सूक्ष्म जांच के परिणामों के आधार पर, यह संदेह है कि रोग का प्रेरक एजेंट एक जीवाणु है, तो अगला कदम इसे अलग करना होना चाहिए।

इस मामले में, यह माना जाता है कि रोगज़नक़ संबंधित जीवों से दूषित है, यानी, एक मिश्रित आबादी है। रोगज़नक़ को एक अलग बढ़ती कॉलोनी के रूप में प्राप्त करने के लिए, ऊतक मैकरेट को माध्यम पर स्ट्रीक किया जाना चाहिए।

स्ट्रोक की बुवाई. बैक्टीरिया युक्त पौधे के ऊतक मैकरेट की एक छोटी मात्रा को कैलक्लाइंड इनोक्यूलेशन लूप के साथ लिया जाता है और हल्के आंदोलनों के साथ, अगर की सतह को नुकसान पहुंचाए बिना, 4-6 स्ट्रोक के साथ तैयार पोषक माध्यम पर लगाया जाता है। लूप को फिर से प्रज्वलित करने के बाद, माध्यम के साथ कप को 90 ° दाईं ओर घुमाया जाता है और फिर दूसरे स्ट्रोक से 4-6 और स्ट्रोक लगाए जाते हैं, सुई को फिर से प्रज्वलित किया जाता है और तीसरा टीका लगाया जाता है। यह प्रारंभिक सामग्री के ऐसे कमजोर पड़ने को प्राप्त करता है, जिसमें बैक्टीरिया, थर्मोस्टैट में 28 डिग्री सेल्सियस पर 48-72 घंटों के लिए ऊष्मायन के बाद, विभिन्न आकृतियों और रंगों की अलग-अलग कॉलोनियां बनाते हैं। फिर कॉलोनियों को आगे के अध्ययन के लिए तिरछी अगर ट्यूबों में स्थानांतरित कर दिया जाता है। एक कॉलोनी को कैलक्लाइंड लूप के साथ लिया जाता है और सांप या ज़िगज़ैग के रूप में सावधानीपूर्वक आंदोलन के साथ पोषक तत्व अगर पर लगाया जाता है।

कोच डालने की विधि. कोच डालने की विधि यह सुनिश्चित करती है कि प्रत्येक कॉलोनी एक जीवाणु कोशिका से बने। प्रारंभिक सामग्री को बाँझ पानी में निलंबित करना और कोच विधि को केवल इस कमजोर पड़ने के साथ लागू करना सबसे अच्छा है। निलंबन की एक छोटी मात्रा को पहले टेस्ट ट्यूब में स्थानांतरित किया जाता है जिसमें पोषक माध्यम को 60 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किया जाता है। फिर ट्यूब की सामग्री को हथेलियों के बीच घुमाकर इनोकुलम के साथ मिलाया जाता है। इसके बाद, दूसरी परखनली लें, इसे बर्नर की आंच पर सावधानी से खोलें और पहले परखनली से बड़े लूप वाले सब्सट्रेट के तीन भागों को उसमें स्थानांतरित करें। टेस्ट ट्यूब की सामग्री, गर्दन और स्टॉपर को फायर करने के बाद, पहले पेट्री डिश में डाली जाती है, कप के ढक्कन को थोड़ा खोलकर टेस्ट ट्यूब की गर्दन को उसके नीचे डालने के लिए पर्याप्त है। डालने के तुरंत बाद, कप को बंद कर दिया जाता है और पोषक माध्यम समान रूप से सावधानीपूर्वक आंदोलनों के साथ वितरित किया जाता है।

दूसरी परखनली की सामग्री को अच्छी तरह मिलाने के बाद, तीसरी परखनली लें और दूसरी परखनली से एक लूप के साथ सब्सट्रेट के छह भागों को उसमें स्थानांतरित करें। परखनली की सामग्री को एक कप में डाला जाता है, और परखनली की सामग्री को मिलाने के बाद एक कप में डाला जाता है। माध्यम वाले कप 28 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टैट में इनक्यूबेट किए जाते हैं, कुछ दिनों के बाद प्रारंभिक सामग्री में निहित बैक्टीरिया कॉलोनियों का निर्माण करते हैं।

सीरियल प्रजनन. यदि, उदाहरण के लिए, मिट्टी से बैक्टीरिया को अलग करना आवश्यक है, तो सीरियल कमजोर पड़ने का उपयोग किया जाता है। बाँझ पोषक माध्यम (15 मिली प्रति डिश) को व्यंजन में डाला जाता है, निलंबन के अंतिम तीन कमजोर पड़ने के 0.1 मिलीलीटर को कठोर अगर पर लगाया जाता है और एक ग्लास स्पैटुला के साथ सतह पर फैलाया जाता है।

बैक्टीरिया को अलग करने के लिए, 9 मिली पानी में 1 ग्राम मिट्टी को निलंबित कर दिया जाता है, अच्छी तरह से हिलाया जाता है, कुछ सेकंड के लिए खड़े होने की अनुमति दी जाती है, और निलंबन से सीरियल कमजोर पड़ने की तैयारी की जाती है। इस विधि से प्रत्येक नमूने में सूक्ष्मजीवों की संख्या निर्धारित की जा सकती है।

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पाश्चर विधि कोच विधि जैविक भौतिक

(ऐतिहासिक है

वैल्यू) वायरिंग) शुकुकेविच केमिकल मेथड

आधुनिक

एक लूप के साथ बुवाई एक स्पैटुला के साथ बुवाई

(ड्रिगल्स्की विधि)

शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के तरीके (योजना 11):

1. यांत्रिक रिलीज के तरीकेअगर की सतह पर परीक्षण सामग्री को लगातार पीसकर रोगाणुओं के पृथक्करण पर आधारित है।

ए) पाश्चर विधि- ऐतिहासिक महत्व का है, रोलिंग विधि द्वारा तरल पोषक माध्यम में परीक्षण सामग्री के अनुक्रमिक कमजोर पड़ने के लिए प्रदान करता है

बी) कोच विधि- प्लेट लेआउट की विधि - मांस-पेप्टोन अगर के साथ परीक्षण सामग्री के अनुक्रमिक कमजोर पड़ने के आधार पर, पेट्री डिश में पतला सामग्री के साथ टेस्ट ट्यूब डालने के बाद

में) ड्राईगल्स्की विधि- जब माइक्रोफ्लोरा के साथ प्रचुर मात्रा में बीज बोते हैं, तो एक स्पैटुला के साथ लगातार बुवाई के लिए 2-3 कप का उपयोग करें।

जी) समानांतर स्ट्रोक के साथ लूप बुवाई.

2. जैविक तरीकेरोगजनकों के जैविक गुणों के आधार पर।

ए) जैविक- अत्यधिक संवेदनशील जानवरों का संक्रमण, जहां रोगाणु तेजी से गुणा करते हैं और जमा होते हैं। कुछ मामलों में, यह विधि केवल एक ही है जो आपको एक बीमार व्यक्ति से रोगज़नक़ की संस्कृति को अलग करने की अनुमति देती है (उदाहरण के लिए, टुलारेमिया के साथ), अन्य मामलों में यह अधिक संवेदनशील है (उदाहरण के लिए, सफेद चूहों में न्यूमोकोकस का अलगाव) या गिनी सूअरों में तपेदिक का प्रेरक एजेंट)।

बी) रासायनिक- माइकोबैक्टीरिया के अम्ल प्रतिरोध पर आधारित। सामग्री को सहवर्ती वनस्पतियों से मुक्त करने के लिए, यह
एक एसिड समाधान के साथ इलाज किया। केवल ट्यूबरकल बेसिली ही बढ़ेगी, क्योंकि अम्ल-सहिष्णु रोगाणुओं को अम्ल द्वारा मार दिया जाता है।

में) भौतिक विधिगर्मी के लिए बीजाणुओं के प्रतिरोध के आधार पर। बीजाणु बनाने वाले जीवाणुओं की संस्कृतियों को अलग करने के लिए
मिश्रण, सामग्री को 80 डिग्री सेल्सियस पर गरम किया जाता है और पोषक माध्यम पर टीका लगाया जाता है। केवल बीजाणु जीवाणु ही विकसित होंगे, क्योंकि उनके बीजाणु जीवित रहे और वृद्धि दी।

जी) शुकुकेविच की विधि- रेंगने वाले विकास में सक्षम वल्गर प्रोटीस की उच्च गतिशीलता के आधार पर।

कॉलोनियों से तिरछी अगर और बीसीएच में स्थानांतरित करने की विधि:

ए) कॉलोनियों से अग्र तिरछा में स्थानांतरण

कप का ढक्कन थोड़ा खोला जाता है, एक व्यक्तिगत कॉलोनी के एक हिस्से को कैलक्लाइंड कूल्ड लूप के साथ हटा दिया जाता है, बाँझ तिरछी अगर के साथ एक टेस्ट ट्यूब खोली जाती है, इसे बाएं हाथ में झुका हुआ स्थिति में रखा जाता है, ताकि सतह की सतह माध्यम देखा जा सकता है। कल्चर के साथ लूप को दीवारों को छुए बिना टेस्ट ट्यूब में स्थानांतरित कर दिया जाता है, पोषक माध्यम पर रगड़ दिया जाता है, टेस्ट ट्यूब के एक छोर से दूसरे छोर तक सतह पर फिसल जाता है, स्ट्रोक को माध्यम के शीर्ष तक बढ़ा दिया जाता है - एक के साथ बुवाई आघात। ट्यूब को बंद कर दिया जाता है और बिना जाने दिए बीज वाले सूक्ष्म जीव के नाम और बुवाई की तारीख पर हस्ताक्षर किए जाते हैं।

बी) कॉलोनी से मांस-पेप्टोन शोरबा में स्थानांतरण

एमपीबी पर बुवाई की तकनीक मूल रूप से वही है जो घने माध्यम पर बुवाई करते समय होती है। बीसीएच पर बुवाई करते समय, उस पर सामग्री के साथ लूप को माध्यम में डुबोया जाता है। यदि सामग्री चिपचिपी है और लूप से नहीं निकाली जाती है, तो इसे बर्तन की दीवार पर रगड़ा जाता है, और फिर एक तरल माध्यम से धोया जाता है। एक बाँझ पाश्चर या स्नातक किए गए पिपेट के साथ एकत्र की गई तरल सामग्री को पोषक माध्यम में डाला जाता है।

स्वतंत्र कार्य के परिणामस्वरूप, छात्र को पता होना चाहिए:

1. सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृति को अलग करने के तरीके

2. सूक्ष्मजीवों की खेती के तरीके

करने में सक्षम हो:

1. महामारी विरोधी शासन और सुरक्षा सावधानियों के नियमों का पालन करने का कौशल

2. सामग्री कीटाणुरहित करें, हाथों का इलाज करें

3. बैक्टीरियल कॉलोनियों से तैयार करें तैयारी

4. माइक्रोस्कोप कॉलोनियों

5. ग्राम दाग सूक्ष्मजीव

गतिविधि 8

विषय। शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के तरीके (जारी)।बैक्टीरिया की एंजाइमेटिक गतिविधि और इसके अध्ययन के तरीके।

बैक्टीरिया को शुद्ध संस्कृतियों के रूप में अलग करने के लिए अपेक्षाकृत कुछ तरीकों को जाना जाता है। यह आमतौर पर स्ट्रीक-इनोक्यूलेशन विधि का उपयोग करके ठोस विकास मीडिया पर अलग-अलग कोशिकाओं को अलग करके या प्लेटों में तरल संस्कृति की एक छोटी मात्रा डालकर किया जाता है ( कमजोर पड़ने की विधि) हालांकि, एक अलग कॉलोनी प्राप्त करना हमेशा संस्कृति की शुद्धता की गारंटी नहीं देता है, क्योंकि उपनिवेश न केवल व्यक्तिगत कोशिकाओं से, बल्कि उनके समूहों से भी विकसित हो सकते हैं। यदि सूक्ष्मजीव बलगम बनाते हैं, तो विदेशी रूप अक्सर इससे जुड़ जाते हैं। सफाई के लिए, गैर-चयनात्मक माध्यम (एमपीए) का उपयोग करना बेहतर होता है क्योंकि संदूषक उस पर बेहतर तरीके से बढ़ते हैं और उनका पता लगाना आसान होता है।

एक ठोस पोषक माध्यम पर पृथक कालोनियों को प्राप्त करना या तो एक स्पैटुला के साथ सूक्ष्मजीवों के निलंबन को छानकर प्राप्त किया जाता है ( कोच विधि), या बैक्टीरियोलॉजिकल लूप की मदद से ( दुर्बल करने वाली स्ट्रोक विधि) माइक्रोबियल कोशिकाओं के यांत्रिक पृथक्करण के परिणामस्वरूप, उनमें से प्रत्येक एक माइक्रोबियल प्रजातियों की एक पृथक कॉलोनी को जन्म दे सकता है।

स्पैटुला से छानना (कोच विधि)निम्नलिखित क्रम में उत्पादित:

1) संवर्धन संस्कृति की एक बूंद को पोषक माध्यम की सतह पर कप नंबर 1 में एक बाँझ पिपेट के साथ लगाया जाता है और एक बाँझ रंग के साथ वितरित किया जाता है;

2) स्पैटुला को बाहर निकाल लिया जाता है, कप को जल्दी से बंद कर दिया जाता है और स्पैटुला को बिना स्टरलाइज़ किए कप नंबर 2 में स्थानांतरित कर दिया जाता है। माध्यम की पूरी सतह पर संस्कृति के वितरण का अनुकरण करें, इसकी सतह को उसी रंग के साथ स्पर्श करें जो पहले नमूना वितरित करने के लिए उपयोग किया गया था;

3) कप नंबर 3 में ठीक वैसी ही क्रियाएं की जाती हैं, जिसके बाद स्पैटुला को निष्फल कर दिया जाता है;

4) सीडेड कप को थर्मोस्टेट में रखा जाता है और इष्टतम तापमान पर इनक्यूबेट किया जाता है।

एक निश्चित समय के बाद, कप को थर्मोस्टेट से हटा दिया जाता है और सूक्ष्मजीवों की वृद्धि का अध्ययन किया जाता है। आमतौर पर, डिश नंबर 1 में बैक्टीरिया की निरंतर वृद्धि देखी जाती है, बाद के व्यंजनों में कॉलोनियों का उल्लेख किया जाता है।

लूप छलनी (घटते स्ट्रोक विधि)पेट्री डिश में एक अगर माध्यम की सतह पर एक संवर्धन संस्कृति से एक बैक्टीरियोलॉजिकल लूप का टीकाकरण शामिल है। पहले चरण में, अगर माध्यम पर समानांतर स्ट्रोक की एक श्रृंखला के साथ संस्कृति के साथ एक लूप लगाया जाता है (चित्र 4.2, लेकिन) लूप को निष्फल किया जाता है, अगर माध्यम के असिंचित भाग पर ठंडा किया जाता है और स्ट्रोक की एक श्रृंखला पहले के लंबवत दिशा में खींची जाती है (चित्र 4.2, बी) फिर लूप को फिर से निष्फल किया जाता है, ठंडा किया जाता है और दिशा में स्ट्रोक लगाए जाते हैं पर(चित्र 4.2), और अगली नसबंदी के बाद - दिशा में जी(चित्र 4.2)। कपों को थर्मोस्टेट में रखा जाता है और एक निश्चित समय के बाद परिणामों को ध्यान में रखा जाता है। आमतौर पर स्ट्रोक पर लेकिनऔर बीबड़ी संख्या में कॉलोनियां बढ़ती हैं (कभी-कभी निरंतर वृद्धि), जबकि स्ट्रोक पर परऔर जीपृथक कालोनियों का निर्माण होता है।

चित्र 4.2 - पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए स्ट्रोक के साथ जीवाणुओं को छानने की योजना

ठोस मीडिया में सीरियल कमजोर पड़ना- प्लेट इनोक्यूलेशन की सबसे सरल विधि, जिसमें यह तथ्य शामिल है कि नमूने को स्टेराइल मेल्टेड और कूल्ड अगर के साथ टेस्ट ट्यूब में डालने के बाद, माध्यम को मिलाया जाता है, पेट्री डिश में डाला जाता है और जमने दिया जाता है। अच्छी तरह से पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए, लगातार दस गुना कमजोर पड़ने की एक श्रृंखला तैयार की जाती है और 1 मिलीलीटर नमूने तुरंत पकवान में जोड़े जाते हैं, 15-20 मिलीलीटर पिघला हुआ अगर माध्यम जोड़ा जाता है और पकवान को हिलाकर मिलाया जाता है। कभी-कभी अलग-अलग कॉलोनियों को आगर में डुबोया जाता है और इसे केवल यंत्रवत् हटाया जा सकता है। यह भी बुरा है कि बैक्टीरिया कुछ समय के लिए पिघले हुए अगर के तापमान पर माध्यम में होते हैं।

एक शुद्ध संस्कृति एक ही प्रजाति से संबंधित सूक्ष्मजीवों का एक संग्रह है। प्रयोगशाला निदान तकनीकों के कार्यान्वयन में इस सामग्री को प्राप्त करना अनुसंधान का एक आवश्यक क्षण है। बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के लिए, रक्त से स्मीयर, थूक, मल का उपयोग किया जाता है, शुद्ध, साथ ही साथ अन्य जैविक सामग्री की जांच की जाती है। प्राकृतिक परिस्थितियों में (हवा, पानी, मिट्टी में), खाद्य उत्पाद, लाशों (मानव, पशु) में विभिन्न प्रकार के सूक्ष्मजीवों के संघ होते हैं।

रोगाणुओं के गुणों के विस्तृत अध्ययन के लिए शुद्ध संस्कृति का पृथक्करण महत्वपूर्ण है: रूपात्मक, सांस्कृतिक, जैव रासायनिक और एंटीजेनिक भी। इन शोध विधियों के परिणामों के आधार पर, यह स्थापित करना संभव है कि रोगज़नक़ एक निश्चित प्रकार और प्रकार से संबंधित है, दूसरे शब्दों में, इसकी पहचान करने के लिए।

जीवाणुओं के जैविक पृथक्करण के सिद्धांतों का अर्थ है कि सबसे इष्टतम अनुसंधान विधियों को चुनने के लिए रोगाणुओं की महत्वपूर्ण गतिविधि की विशेषताओं को ध्यान में रखना। चयनित विधियों को कुछ मापदंडों में रोगज़नक़ से मेल खाना चाहिए।

1. सांस का प्रकार। बैक्टीरिया के बीच, एरोबिक और एनारोबिक प्रतिनिधियों के समूह प्रतिष्ठित हैं। अवायवीय रोगाणुओं को प्राप्त करने के लिए, शोध सामग्री को गर्म किया जाता है। अगला चरण अवायवीय परिस्थितियों में सूक्ष्म जीवों की खेती है। एरोबिक और एनारोबिक बैक्टीरिया प्राप्त करने के तरीके अलग-अलग हैं।
2. स्पोरुलेशन। कुछ जीवाणुओं की स्पोरुलेट करने की क्षमता सूक्ष्मजीवों की सुरक्षा और सुरक्षा सुनिश्चित करती है।
3. क्षार और अम्ल के आक्रामक प्रभावों के लिए बैक्टीरिया का प्रतिरोध। इन पदार्थों के लिए कुछ प्रकार के जीवाणुओं का प्रतिरोध क्षार या अम्ल के घोल का उपयोग करके अन्य जीवाणुओं के मिश्रण से परीक्षण सामग्री की अधिकतम शुद्धि सुनिश्चित करता है।
4. जीवाणु जीवों की गतिशीलता। गतिशील सूक्ष्मजीवों की एक शुद्ध संस्कृति को अलग करने के लिए, घनीभूत की एक बूंद में रोगाणुओं की संस्कृतियों को अलग करने के तरीकों का उपयोग किया जाता है।
5. एंटीबायोटिक दवाओं, कुछ रसायनों और अन्य रोगाणुरोधी एजेंटों के लिए सूक्ष्मजीवों की संवेदनशीलता। कुछ रोगजनकों के लिए, चयनात्मक (विशिष्ट) पोषक माध्यम का उपयोग करके संस्कृति अलगाव के तरीकों को सबसे अधिक पसंद किया जाता है।
6. एंटीबायोटिक्स। अतिरिक्त सूक्ष्मजीवों से सामग्री को शुद्ध करें।
7. बरकरार त्वचा में प्रवेश करने के लिए बैक्टीरिया की क्षमता। यह संपत्ति कुछ किस्मों में निहित है जिनमें आक्रामकता कारक हैं।
8. संक्रामक मूल के कुछ रोगों के लिए जानवरों की संवेदनशीलता।

रोगज़नक़ आकलन के तरीके

जीवाणु कोशिकाओं की शुद्ध संस्कृतियों को प्राप्त करने के लिए कई विधियों का उपयोग किया जाता है। उनमें से प्रत्येक का उपयोग एक विशेष स्थिति में किया जाता है और रोगज़नक़ की कॉलोनियों को प्राप्त करने के लिए लगातार स्पष्ट कदम होते हैं। सबसे लोकप्रिय पर विचार करें।

पाश्चर तकनीक

यह जीवाणु वृद्धि माध्यम (तरल स्थिरता) में शुद्ध संस्कृतियों का तरल की मात्रा प्रति 1 सेल की एकाग्रता के लिए कमजोर पड़ने वाला है। चयन की यह विधि महान ऐतिहासिक महत्व की है।

कोच की तकनीक

इसे "प्लेट स्प्रेड" तकनीक के रूप में भी जाना जाता है। यह अगर (48-50 डिग्री सेल्सियस के तापमान के साथ पिघली हुई अवस्था में) में अनुसंधान के लिए सामग्री का कमजोर पड़ना है। अगला, परिणामस्वरूप रचना को पेट्री डिश में डाला जाता है, जहां इसे जमना चाहिए।

फसलें आमतौर पर पिछले 3-4 तनुकरणों से की जाती हैं, क्योंकि वहां पहले से ही कुछ बैक्टीरिया होते हैं। इस प्रकार, पोषक माध्यम पर रोगाणुओं के विकास के दौरान, सूक्ष्मजीवों की पृथक उपनिवेश दिखाई देते हैं, जो एक मातृ कोशिका से पैदा होते हैं। फिर, एक पृथक कॉलोनी को आगर की गहराई से चुना जा सकता है और एक ताजा पोषक माध्यम में स्थानांतरित किया जा सकता है। अगला कदम रोगज़नक़ की पहचान और अलगाव है।

शुकेविच की तकनीक

इसका उपयोग तब किया जाता है जब प्रोटीस एरोबेस या "रेंगने" वृद्धि की विशेषता वाले किसी अन्य रोगाणुओं की शुद्ध संस्कृति को अलग करना आवश्यक होता है। अगर तिरछा के आधार पर संघनित पानी में संस्कृतियों को रोपित करें।

एक शुद्ध संस्कृति को अलग करने की इस पद्धति के साथ, मोबाइल सेलुलर जीव (प्रोटियस) अग्र तिरछा के शीर्ष तक बढ़ जाते हैं, और स्थिर रूप सीडिंग माध्यम पर अपना स्थान नहीं बदलते हैं। अंकुरित संस्कृति के ऊपरी किनारों को उपसंस्कृति करके, एक शुद्ध जीवाणु संस्कृति प्राप्त की जा सकती है।

ड्रायगल्स्की की तकनीक

एक परखनली में शोरबा या खारा के साथ संस्कृतियों को पतला करके जैविक सामग्री के अध्ययन में ड्रायगल्स्की विधि का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

अगला कदम: एक स्टेराइल ग्लास स्पैटुला का उपयोग करके, परिणामी घोल की एक बूंद को पहले कप में पोषक माध्यम की सतह पर समान रूप से वितरित किया जाता है। फिर, चमचे को आग पर जलाए बिना, वे दूसरी और तीसरी कटोरी पर समान बुवाई करते हैं। ड्रायगल्स्की पद्धति का सार यह है कि संस्कृतियों की प्रत्येक बाद की बुवाई के साथ, बैक्टीरिया (एरोबेस) की सांद्रता कम और कम होती जाती है। तीसरी प्लेट पर, उन्हें अलग-अलग वितरित किया जाता है, प्रत्येक जीवाणु कोशिका क्लोनल कोशिकाओं (एक पृथक कॉलोनी के रूप में) को जन्म देती है। रोगजनकों के संचय के लिए उन्हें तिरछी अगर पर उपसंस्कृत किया जाता है।

वेनबर्ग तकनीक

कुछ कठिनाइयाँ अवायवीय रोगजनकों की शुद्ध संस्कृतियों के अलगाव के कारण होती हैं यदि सूक्ष्मजीव ऑक्सीजन अणुओं के संपर्क में नहीं मरते हैं। तकनीक का सार अवायवीय रोगाणुओं (सामग्री की संरचना में) को थोड़ा ठंडा (45-50 डिग्री सेल्सियस) पिघला हुआ पोषक माध्यम (एग्रोस्ड) में निकालना है। 6-10 तनुकरण खर्च करें। फिर अगला चरण आता है: टेस्ट ट्यूब में रचना को जल्दी से ठंडा करना और इसकी सतह को पेट्रोलियम जेली और पैराफिन तेल के मिश्रण से भरना आवश्यक है, जो हवा को घुसने से रोकता है और अवायवीय स्थितियों के विकास को बढ़ावा देता है।

अनुकूल बुवाई से दूसरे दिन पृथक कालोनियां अंकुरित हो जाती हैं, जिन्हें बर्नर से गर्म करके ट्यूब से निकाला जा सकता है। आगे की परीक्षा के लिए कटे हुए अगर कॉलम से संस्कृतियों को लूप किया जाता है। परिणामी कालोनियों को एक तरल पोषक माध्यम में रखा जाता है, जिस पर अवायवीय रोगजनकों की कॉलोनी को अलग करने के चरण पूरे किए जा सकते हैं।

हंगेट तकनीक

इसका उपयोग अक्सर उच्च ऑक्सीजन संवेदनशीलता वाले एरोबिक रोगाणुओं को अलग करने के लिए किया जाता है। एरोबस की संस्कृति के इस तरह के अलगाव को अंजाम देने में, टेस्ट ट्यूबों को घुमाने की तकनीक का उपयोग किया जाता है।

एरोबिक बैक्टीरिया के टीकाकरण के तरीकों में उन्हें पिघला हुआ अगर माध्यम पर प्रजनन करना शामिल है। एक परखनली में एक अक्रिय गैस की उपस्थिति एरोबिक बैक्टीरिया के पृथक स्तंभों को इस तरह से विकसित करना संभव बनाती है कि एरोबिक्स की पृथक संस्कृतियों को 2-3 दिनों के लिए नग्न आंखों से भी स्पष्ट रूप से देखा जा सकता है।

माइक्रोमैनिपुलेटर

यह एक माइक्रोमैनिपुलेटर का उपयोग करके व्यक्तिगत जीवाणु कोशिकाओं को अलग करने की एक तकनीक है। माइक्रोमैनिपुलेटर एक विशेष उपकरण है जो एक निलंबन से एक सेल को पकड़ सकता है, साथ ही एक टेस्ट ट्यूब में एक संस्कृति को बोने की संभावना प्रदान करता है।

रोगज़नक़ की आगे की पहचान रोगज़नक़ (एरोबेस और एनारोबेस) के सभी सूचीबद्ध गुणों के साथ-साथ विभिन्न पदार्थों के साथ उनकी बातचीत की विशेषताओं को ध्यान में रखते हुए की जाती है।