Para sa panahon mula Enero 9 hanggang Oktubre 10, 2014. Ang Kagawaran ng Beterinaryo at Sanitary Expertise ng Federal State Budgetary Institution "Tula MVL" ay nakatanggap - 302 mga sample ng tubig, na isinagawa - 693 pag-aaral, kung saan, para sa mga tagapagpahiwatig ng Design Bureau, TKB-458 na pag-aaral.

Ano ang mga tagapagpahiwatig na ito, at bakit eksaktong binibigyang pansin ang mga ito kapag sinusuri ang inuming tubig?

Tubig - ang pangunahing bahagi ng anumang organismo, ay gumaganap ng isang malaking papel sa buhay nito. Ito ay isang tirahan para sa iba't ibang mga microorganism, kabilang ang mga pathogens. Ang pagtuklas ng pathogen ay ang pinakatumpak na tagapagpahiwatig ng polusyon sa tubig. Kasama sa mga mikroorganismo na ito ang bakterya ng Escherichia coli group - E. coli (bacteria ng Escherichia coli group, na tinatawag ding colimorphic at coliform bacteria) - isang pangkat ng bakterya ng pamilya Enterobacteriaceae, kondisyon na nakikilala sa pamamagitan ng morphological at kultural na mga katangian, na ginagamit ng sanitary microbiology bilang isang marker ng fecal contamination. Sa mga coliform bacteria, ang pagkakaroon ng karaniwan at thermotolerant coliform bacteria (TCB, TKB) sa inuming tubig ay madalas na tinutukoy, na nagpapahiwatig ng hindi magandang kalidad ng supply ng tubig at posibleng fecal contamination ng pinagmumulan ng tubig, na lumilikha ng potensyal na banta sa pag-unlad at pagkalat. ng mga sakit sa bituka.

Sa mga sistema ng supply ng tubig na may inihandang tubig, hindi dapat makita ang coliform bacteria (SanPiN). Ang pagkakaroon ng mga coliform na organismo ay nagpapahiwatig ng hindi sapat na paglilinis ng tubig, ang pangalawang polusyon nito, at ang pagkakaroon ng mga sustansya sa tubig. Ang aksidenteng pagpasok ng mga coliform organism sa system ay pinapayagan, ngunit hindi hihigit sa 5% ng mga sample na kinuha sa buong taon. Kung ang TKB, OKB) ay nakita sa isang sample ng inuming tubig, ang mga ito ay agad na tinutukoy sa paulit-ulit na mga sample.

TKB (thermotolerant coliform bacteria). Ito ay isang pangkat ng mga coliform na organismo na may kakayahang mag-ferment ng lactose sa 44-45°C. Mabilis silang natukoy, samakatuwid, nagsisilbi sila upang suriin ang pagiging epektibo ng paglilinis ng tubig mula sa fecal bacteria.

OKB (Common Coliform Bacteria) - Kasama sa grupong OKB ang isang medyo malaking bilang ng genera ng pamilyang Enterobacteriacea, na ang mga kinatawan ay may kakayahang mag-ferment ng lactose: Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Pantoea, Rahnella, atbp. Kabilang sa mga microorganism na ito ay mayroon ding isang malaking bilang ng mga free-living saprophytes, samakatuwid, ang TKB indicator ay isang mahalagang teknolohikal (indicator) indicator.

Alinsunod dito, kung ang mga bakteryang ito ay matatagpuan sa inuming tubig, nangangahulugan ito na may posibilidad ng polusyon ng tubig sa pamamagitan ng dumi sa alkantarilya.

Ang mga resulta ng pagtukoy ng mga tagapagpahiwatig ng OKB, TKB ay ipinakita bilang CFU / 100 ml; coliform bacteria ay hindi dapat makita sa 100 ML ng inuming tubig sa isang tatlong-tiklop na pag-aaral ng normalized na dami.

Magkagayunman, ang anumang tumaas na nilalaman ng bakterya sa tubig ay isang tanda ng babala, at kapag lumitaw ito, may kailangang gawin sa tubig.

Upang magsagawa ng microbiological studies ng inuming tubig, maaari kang makipag-ugnayan sa Tula MVL Federal State Budgetary Institution.

Paraan ng titration

Ang pamamaraan ay batay sa akumulasyon ng bakterya pagkatapos ng inoculation ng ilang mga volume ng tubig sa likidong nutrient media, na sinusundan ng muling pagbabakuna sa isang differential dense medium na may lactose at pagkakakilanlan ng mga kolonya sa pamamagitan ng mga cultural at biochemical tests. Sa pag-aaral ng inuming tubig sa pamamagitan ng isang paraan ng husay, tatlong volume ng 100 cm3 ang nahasik. Sa pag-aaral ng tubig na may layunin | quantitative determination ng OKB at TKB (paulit-ulit na pagsusuri), 1.10 at 100 cm3, ayon sa pagkakabanggit, ay inoculated - tatlong volume ng bawat serye.

Ang mga inoculation ng 10 at 100 cm3 ng tubig ay isinasagawa, ayon sa pagkakabanggit, sa 1 at 10 cm3 ng medium ng akumulasyon - puro LPS na walang tagapagpahiwatig. Ang paghahasik ng 1 cm3 ng sample ay isinasagawa sa 10 cm3 ng LPS ng karaniwang konsentrasyon. Ang mga inoculation ay incubated sa temperatura na 37 °C sa loob ng 48 oras. Pagkatapos ng 24 na oras, isang paunang pagtatasa ng mga inoculations sa accumulation medium ay isinasagawa. Mula sa mga lalagyan, kung saan ang pagkakaroon ng paglago (turbidity) at ang pagbuo ng gas ay nabanggit, ang materyal ay nahasik na may bacteriological loop sa mga sektor ng Endo medium upang makakuha ng mga nakahiwalay na kolonya. Ang mga lalagyan na walang nakikitang senyales ng paglaki at pagbuo ng gas ay iniiwan sa thermostat nang hanggang 48 oras at tinitingnang muli para sa panghuling pagsusuri.

Ang mga resulta ng mga pananim na walang mga palatandaan ng paglago ay itinuturing na negatibo, at hindi sila napapailalim sa karagdagang pag-aaral. Mula sa mga lalagyan kung saan napansin ang labo, ang pagtatanim ay ginagawa sa mga sektor ng Endo medium. Ang mga inoculation sa Endo medium ay incubated sa temperatura na 37 ° C sa loob ng 18-20 na oras. Kung lumalabas ang labo, ang gas ay nabuo sa accumulation medium at ang mga kolonya ay lumalaki sa Endo medium, tipikal para sa lactose-positive bacteria: dark red o red, na may o walang metal na kinang, matambok na may pulang sentro at isang imprint sa nutrient medium, ay nagbibigay ng positibong konklusyon tungkol sa pagkakaroon ng OKB sa isang ibinigay na dami ng sample.

Ang pagkakaroon ng OKB ay dapat kumpirmahin sa mga sumusunod na kaso:

ü tanging labo ang napansin sa medium ng akumulasyon;

ü Ang pagiging kabilang sa mga lactose-positive colonies ay kaduda-dudang.

Upang kumpirmahin ang presensya ng OKB, gawin ang mga sumusunod na hakbang:

1. suriin kung may imprint sa Endo medium pagkatapos alisin ang kahina-hinalang kolonya na may loop;

2. magsagawa ng oxidase test;

3. tseke na kabilang sa Gram group;

4. kumpirmahin ang kakayahan sa pagbuo ng gas sa pamamagitan ng pagbabakuna ng 1-2 isolated colonies ng lahat ng uri mula sa bawat sektor sa confirmation medium (LPS na may indicator) na sinusundan ng incubation ng inoculations sa temperatura na 37 °C sa loob ng 24-48 oras.

Sa kawalan ng mga nakahiwalay na kolonya, ang pagsasala sa daluyan ng Endo ay isinasagawa sa pamamagitan ng mga kumbensyonal na pamamaraan. Ang negatibong opinyon ay ibinibigay kung:

ü walang mga palatandaan ng paglaki sa kapaligiran ng akumulasyon;

ü walang paglago sa mga sektor ng kapaligiran ng Endo;

ü ang mga kolonya na hindi karaniwan para sa coliform bacteria (transparent, may tulis-tulis ang mga gilid, malabo) ay lumaki sa mga sektor ng Endo medium;

ü lahat ng mga kolonya ay oxidase-positive;

lahat ng mga kolonya ay gramo positibo;

ü sa confirmatory test sa LPS medium na may indicator, hindi naobserbahan ang pagbuo ng gas.

Upang matukoy ang TCB, makipagtulungan sa mga sektor ng Endo medium kung saan lumaki ang mga tipikal na lactose + colonies. Dalawa o tatlong nakahiwalay na kolonya ng bawat uri mula sa bawat sektor ay inoculated sa mga test tube na may alinman sa lactose accumulation media, na incubated sa temperatura na 44 ° C para sa isang araw. Sa pagbuo ng gas sa isang lactose accumulation medium, ang paglaki ng lactose-positive bacteria sa isang Endo medium, at ang pagtuklas ng kakayahang mag-ferment ng lactose sa acid at gas sa pagkumpirma ng lactose media sa temperatura na 44 ° C sa loob ng 24 na oras , isang positibong konklusyon ang ginawa tungkol sa pagkakaroon ng TKB sa dami ng tubig na ito. Sa isang qualitative na pag-aaral (kapag sinusuri ang tatlong volume na 100 cm3 bawat isa, kapag ang OKB at TKB ay nakita, kahit man lang sa isa sa tatlong volume, ang sumusunod na entry ay ginawa: "Ang OKB at TBC ay natagpuan sa 100 cm3."

Sa pag-aaral sa pamamagitan ng quantitative method, ang NVCh, OKB at TKB ay tinutukoy ayon sa mga espesyal na talahanayan. Kung ang mga resulta ng pag-aaral para sa pagkakaroon ng OKB at TKB sa lahat ng volume na sinuri ay negatibo, isang konklusyon ay inilabas: "Walang OKB at TKB ang natagpuan sa 100 cm3."

8.1. Pagpapasiya ng kabuuang bilang ng mga microorganism na bumubuo ng mga kolonya sa nutrient agar

8.1.1. Kahulugan ng konsepto ng isang tagapagpahiwatig

Tinutukoy ng pamamaraan sa inuming tubig ang kabuuang bilang ng mesophilic aerobic at facultative anaerobic microorganisms (FMC) na may kakayahang bumuo ng mga kolonya sa nutrient agar sa temperatura na 37 °C sa loob ng 24 na oras, na makikita sa 2-tiklop na pagtaas.

8.1.2. Nagsasagawa ng pagsusuri

Mula sa bawat sample, hindi bababa sa dalawang volume ng 1 ml ang inoculated.

Pagkatapos ng masusing paghahalo, ang mga sample ng tubig ay idinagdag ng 1 ml sa mga sterile Petri dish, bahagyang binubuksan ang mga takip. Pagkatapos magdagdag ng tubig, (8-12) ml (bawat isang tasa na may diameter na 90-100 mm) ng tunaw at pinalamig hanggang (45-49) ° C nutrient agar ay ibinuhos sa bawat tasa pagkatapos ng apoy sa gilid ng pinggan sa na nilalaman nito. Pagkatapos ay mabilis na paghaluin ang mga nilalaman ng mga tasa, pantay na ipinamahagi sa buong ilalim, pag-iwas sa pagbuo ng mga bula ng hangin, pagkuha ng agar sa mga gilid at takip ng tasa. Ang pamamaraang ito ay isinasagawa sa isang pahalang na ibabaw, kung saan ang mga plato ay naiwan hanggang sa tumigas ang agar.

Ang molten agar para sa panahon ng pagsusuri ay inilalagay sa isang paliguan ng tubig o isang thermostat na nagpapanatili ng temperatura na (45-49) °C.

Pagkatapos mag-solidify ang agar, ang mga plato na may mga kultura ay inilalagay nang nakabaligtad sa isang termostat at inilublob sa temperatura na (37 ± 1)°C sa loob ng (24 ± 2) na oras.

8.1.3. Kahit na mga resulta

Ang lahat ng mga kolonya na lumaki sa plato, na sinusunod sa 2-fold magnification, ay binibilang. Isinasaalang-alang lamang ang mga pagkaing iyon kung saan hindi hihigit sa 300 mga hiwalay na kolonya ang lumaki.

Ang bilang ng mga kolonya sa parehong mga plato ay summed up at hinati sa dalawa. Ang resulta ay ipinahayag bilang ang bilang ng mga colony forming units (CFU) sa 1 ml ng sample ng tubig sa pagsubok.

Kung hindi posible ang pagbibilang sa isa sa 2 plato, ibibigay ang resulta batay sa bilang ng mga kolonya sa isang plato. Kung ang dalawang plato ay nagpapakita ng nagkakalat na paglaki ng kolonya na hindi sumasaklaw sa buong ibabaw ng plato, o higit sa 300 kolonya ang lumaki at hindi na mauulit ang pagsusuri, bilangin ang sektor ng ulam at pagkatapos ay kalkulahin muli ang buong ibabaw. Sa mga kasong ito, ang protocol ay nagsasaad ng "bilang ng CFU / ml - humigit-kumulang".

Kung hindi posible ang colony count sa plates, itala ang "continuous growth" sa protocol.

8.2. Pagpapasiya ng karaniwan at thermotolerant coliform bacteria sa pamamagitan ng pagsasala ng lamad (pangunahing pamamaraan)

8.2.1. Kahulugan ng konsepto ng isang tagapagpahiwatig

Ang karaniwang coliform bacteria (CBC) ay gram-negative, oxidase-negative, spore-free rods na may kakayahang tumubo sa differential lactose media, fermenting lactose to acid, aldehyde at gas sa temperatura na (37 ± 1) ° C para sa (24- 48) h .

Ang Thermotolerant coliform bacteria (TCB) ay kabilang sa mga karaniwang coliform bacteria, mayroong lahat ng kanilang mga katangian at, bilang karagdagan, ay nakakapag-ferment ng lactose sa acid, aldehyde at gas sa temperatura na (44 ± 0.5) °C sa loob ng 24 na oras.

8.2.2. Prinsipyo ng pamamaraan

Ang pamamaraan ay batay sa pag-filter ng isang nakatakdang dami ng tubig sa pamamagitan ng mga filter ng lamad, paglaki ng mga pananim sa isang differential nutrient medium na may lactose at kasunod na pagkakakilanlan ng mga kolonya sa pamamagitan ng mga kultural at biochemical na katangian.

8.2.3. Nagsasagawa ng pagsusuri

8.2.3.1. Pagkakasunod-sunod ng pananaliksik

Sa pag-aaral ng inuming tubig, 3 volume ng 100 ml ang sinusuri.

Kung ang mga matatag na negatibong resulta ay nakuha, 300 ML ng tubig ay maaaring i-filter sa pamamagitan ng isang filter.

Kapag nag-filter ng tubig na hindi kilalang kalidad, ipinapayong dagdagan ang bilang ng mga na-filter na volume upang makakuha ng mga nakahiwalay na kolonya sa filter (halimbawa, 10, 40, 100, 150 ml ng tubig).

Ang sinusukat na dami ng tubig ay sinasala sa pamamagitan ng mga filter ng lamad bilang pagsunod sa mga kinakailangan na itinakda sa talata 7.

Ang mga filter ay inilalagay sa Endo medium na inihanda ayon sa talata 5.4. Ang mga tasa na may mga filter ay inilalagay sa isang thermostat na nakabaligtad at ini-incubate sa temperatura na (37 ± 1) °C sa loob ng (24 ± 2) na oras.

Kung walang paglaki sa mga filter o ang mga kolonya ay may lamad, espongy, inaamag, transparent, hindi malinaw, nagbibigay sila ng negatibong sagot: ang kawalan ng OKB at TKB sa 100 ML ng tubig sa pagsubok. Ang pagsusuri ay nakumpleto pagkatapos ng 24 na oras.

Kung ang paglaki ng mga hiwalay na tipikal na lactose-positive colonies ay makikita sa mga filter: madilim na pula, pula na mayroon o walang metal na kinang, o iba pang katulad na uri ng mga kolonya na may imprint sa likod ng filter, bilangin ang bilang ng mga kolonya ng bawat uri hiwalay at magpatuloy upang kumpirmahin ang kanilang pag-aari sa OKB at TKB.

Upang kumpirmahin ang presensya ng OKB, suriin ang:

Lahat ng kolonya kung wala pang 5 kolonya ang lumaki sa mga filter;

Hindi bababa sa 3-4 na kolonya ng bawat uri.

Upang kumpirmahin ang pagkakaroon ng TKB, lahat ng tipikal na kolonya ay sinusuri, ngunit hindi hihigit sa 10.

Ang bawat napiling hiwalay na kolonya ay sinusuri para sa:

Ang pagkakaroon ng aktibidad ng oxidase;

Gram affiliation (microscopy ng isang Gram-stained preparation o Gregersen test);

Pagbuburo ng lactose sa acid at gas.

8.2.3.2. Pag-set up ng oxidase test

Ang isang strip ng filter na papel ay inilalagay sa isang malinis na Petri dish at binasa ng 2-3 patak ng oxidase test reagent ayon sa talata 5.7. Ang mga natapos na sistema ng papel ay binasa ng distilled water. Ang bahagi ng nakahiwalay na kolonya na may isang glass folder o isang platinum loop (nichrome metal loop ay maaaring magbigay ng maling positibong reaksyon) ay nakaguhit sa inihandang filter na papel. Ang reaksyon ay itinuturing na positibo kung ang isang violet-brown (seksyon 5.7.1 opsyon 1) o asul (seksyon 5.7.2 opsyon 2 at NIB oxidase) na paglamlam ng stroke ay lilitaw sa loob ng 1 min. Sa isang negatibong reaksyon, ang kulay sa lugar ng aplikasyon ng kultura ay hindi nagbabago. Sa isang positibong resulta, ang kolonya na ito ay hindi kasama sa karagdagang pananaliksik.

Kung, kapag sinusuri ang mga kolonya na nabahiran ng madilim na pula, ang isang hindi sapat na malinaw na resulta ay nakuha, ito ay kinakailangan upang ilipat ang kultura mula sa Endo medium sa nutrient agar. Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog, ang pagsubok ay paulit-ulit.

8.2.3.3. Pagpapasiya ng pagiging kabilang sa Gram

Ang isang smear ay kinuha mula sa oxidase-negative colony, Gram-stained, at microscopically na sinusuri.

Sa isang glass slide defatted na may alkohol, 1 drop ng distilled water ay inilapat sa isang loop, isang maliit na halaga ng kultura mula sa nasuri na kolonya ay idinagdag at kumalat sa ibabaw ng salamin. Ang smear ay pinatuyo sa temperatura ng silid at naayos ng tatlong beses sa pamamagitan ng apoy ng burner. Ang isang strip ng filter na papel ay inilapat sa paghahanda at isang carbolic solution ng violet gentian ay ibinuhos dito para sa (0.5-1) min, ang papel ay tinanggal, ang solusyon ng Lugol ay ibinuhos para sa (0.5-1) min, ang Lugol's solution ay pinatuyo. at ang baso ay hinuhugasan sa ethyl alcohol sa loob ng (0.5-1) minuto, hanggang sa tumigil sa pag-alis ang tina. Pagkatapos ang baso ay lubusan na hinugasan ng tubig at nabahiran ng (1-2) min gamit ang Ziel's fuchsin, diluted 1:10 na may distilled water. Pagkatapos hugasan at patuyuin ang paghahanda, ang smear ay sinusuri nang mikroskopiko.

Ang paghahanda ng mga reagents para sa Gram staining ay inilarawan sa Seksyon 5.9.

Gram-negative microorganisms ay pink, Gram-positive ay blue. Ang coliform bacteria ay gram-negative rods.

Ang Gram stain ay maaaring mapalitan ng Gregersen test, na hindi nangangailangan ng paggamit ng optika.

Pagsubok ni Gregersen: sa isang patak ng isang 3% na may tubig na solusyon ng KOH sa isang glass slide, isang bacterial mass na kinuha mula sa isang solid medium ay emulsified. Pagkatapos ng ilang segundo ng pagpapakilos sa loop, ang suspensyon ay nagiging mucilaginous at mauhog na mga thread na umaabot sa likod ng loop, na nagpapahiwatig na ang pagsubok na kultura o kolonya ay kabilang sa isang gramo-negatibong species. Sa bakterya na positibo sa gramo, ang mga mucous thread ay hindi nabuo - ang reaksyon ay negatibo.

8.2.3.4. Pagpapasiya ng lactose fermentation

Ang natitirang bahagi ng oxidase-negative gram-negative na isolated colony ay ibinuhos nang magkatulad sa dalawang test tube na may lactose medium (p. 5.6):

Upang kumpirmahin ang pagkakaroon ng OKB, ang kultura ay incubated sa temperatura na (37 ± 1) °C sa loob ng 48 oras;

Upang kumpirmahin ang pagkakaroon ng TKB, ang inoculation ay isinasagawa sa isang medium na preheated sa temperatura na (43-44) °C at incubated sa temperatura na (44 ± 0.5) °C sa loob ng 24 na oras.

Ang pangunahing accounting para sa pagbuo ng acid at gas sa pagkumpirma ng semi-liquid media at NIB (seksyon 5.6) ay posible pagkatapos ng (4-6) oras. Kung ang acid at gas ay nakita, isang positibong sagot ang ibibigay. Sa kawalan ng acid at gas o sa pagkakaroon ng acid lamang, ang mga tubo na may mga kultura para sa huling bilang ng TKB ay natitira hanggang 24 na oras. Ang mga tubo na may mga pananim upang kumpirmahin ang pagkakaroon ng TTB pagkatapos tingnan pagkatapos ng 24 na oras at makatanggap ng negatibong resulta ay natitira para sa huling pagbilang hanggang 48 oras.

Kung maliit ang sukat ng kolonya na susuriin, i-subculture ito sa nutrient agar slant at, pagkatapos ng incubation sa loob ng (18-24) na oras, gawin ang lahat ng kinakailangang confirmatory test.

8.2.3.5. Magsagawa ng mga confirmatory test sa colony overlay o tuloy-tuloy na paglaki

Kung ang mga kolonya o tuluy-tuloy na paglaki ay naobserbahan sa bahagi o lahat ng ibabaw ng filter, ang isang oxidase test ay isinasagawa sa pamamagitan ng paglalagay ng membrane filter sa isang bilog ng filter na papel na mas malaki ang diameter kaysa sa filter, na maraming moistened sa reagent, o sa isang NIB. oxidase disc na binasa ng distilled water. Kapag lumitaw ang mga unang palatandaan ng isang reaksyon, ngunit hindi hihigit sa 5 minuto, ang filter ng lamad ay ililipat pabalik sa Endo medium. Matapos ang isang malinaw na pagpapakita ng reaksyon, ang resulta ay tinutukoy. Kung lumilitaw ang isang violet-brown o asul na kulay (depende sa reagent na ginamit), ang oxidase test ay itinuturing na positibo.

Kung ang lahat ng mga kolonya sa mga filter ay oxidase-positive, hindi sila isinasaalang-alang at nagbibigay ng tugon tungkol sa kawalan ng OKB at TKB at kumpletuhin ang pagsusuri.

Sa kaso ng negatibong reaksyon ng oxidase, ang pagsasala ay isinasagawa hanggang sa makuha ang mga hiwalay na kolonya at ang kanilang pagmamay-ari sa OKB at TKB ay nakumpirma ayon sa mga talata 8.2.3.3-8.2.3.4 (pagsusuri ng husay).

8.2.4. Accounting para sa mga resulta

8.2.4.1. Ang mga gram-negative na kolonya ay binibilang bilang mga TBC para sa isang negatibong oxidase test at lactose fermentation sa 37°C upang makagawa ng acid at gas.

Ang mga gram-negative na kolonya ay binibilang bilang TKB sa isang negatibong oxidase test at lactose fermentation sa 44°C na may acid at gas production.

8.2.4.2. Sa kawalan ng karaniwan at thermotolerant coliform bacteria sa lahat ng mga filter, ang resulta ay naitala bilang "walang CFU ng TCB sa 100 ml" at "walang CFU ng TCB sa 100 ml".

8.2.4.3. Sa kaso ng pagkakakilanlan ng lahat ng lumaking kahina-hinalang kolonya, ang bilang ng mga yunit na bumubuo ng kolonya ng TKB at TKB ay binibilang sa lahat ng mga filter at ang resulta ng pagsusuri ng CFU ay ipinahayag sa 100 ml ng tubig.

Ang pagkalkula ay isinasagawa ayon sa pormula:

Ang X ay ang bilang ng mga kolonya sa 100 ml;

ang na-filter na dami ng tubig sa pamamagitan ng mga filter kung saan itinatago ang account;

a ay ang kabuuang bilang ng mga kolonya na binibilang sa mga filter na ito.

1. Kapag naghahasik ng 3 filter ng 100 ml, dalawang kolonya ang lumaki sa 100 ml, walang paglaki sa iba pang dalawang filter. Ang bilang ng kabuuang o thermotolerant coliform ay magiging:

CFU OKB (TKB) sa 100 ml

2. Kapag naghahasik ng 10, 40, 100 at 150 ml sa mga filter na may na-filter na dami ng 40 ml, 4 na nakahiwalay na kolonya ang lumago, na may na-filter na dami ng 100-3 OKB. Ang mga filter na may mga volume na 10 ml at 150 ml ay tinutubuan at hindi napapailalim sa accounting. Ang kabuuang bilang ng mga kolonya ng OKB (TKB) sa mga filter na iyon kung saan nakuha ang mga hiwalay na kolonya ay ibinubuod at muling kinakalkula para sa dami ng 100 ml.

CFU sa 100 ml

8.2.4.4. Kung, sa panahon ng isang piling pagsusuri ng mga kolonya ng parehong uri, hindi pantay na mga resulta ang nakuha, kung gayon ang mga bilang ng OKB o TKB sa mga kolonya ng ganitong uri ay kinakalkula ayon sa pormula:

, saan

Ang X ay ang bilang ng mga kumpirmadong bakterya ng parehong uri;

a ay ang kabuuang bilang ng mga kolonya ng ganitong uri;

- bilang ng mga nasubok;

c ay ang bilang ng mga kolonya na may positibong resulta.

Ang mga resulta ng accounting para sa bawat uri ng mga kolonya ay summed up at pagkatapos ay kinakalkula ayon sa mga clause 8.2.4.3-8.2.4.4.

8.2.4.5. Ang huling resulta ay ibinigay: ang bilang ng CFU TCB sa 100 ml, kung saan ang bilang ng CFU TCB sa 100 ml.

Maaaring maglabas ng isang indikatibong resulta sa pamamagitan ng pagtuklas ng mga tipikal na kolonya ng coliform sa medium ng Endo, na nabuo ng gram-negative oxidase-negative bacteria. Ang huling sagot ay nakumpirma ng mga resulta ng lactose fermentation.

8.2.4.6. Kapag nagpapatong ng mga kolonya o tuluy-tuloy na paglaki sa lahat ng mga filter (sugnay 8.2.3.5), sa kaso ng kumpirmasyon ng pag-aari sa OKB at TKB, isang resulta ng husay na "natukoy ang OKB sa 100 ml" ay ibinibigay.

Kung ang lahat ng mga kolonya sa filter ay oxidase-positive o ang kanilang pag-aari sa OKB at TKB ay hindi nakumpirma, ang pagsusuri ay nakumpleto, ang protocol ay nagsasabing "filters bury".

Sa parehong mga kaso, ang pagsusuri ay paulit-ulit.

8.3. Pagpapasiya ng karaniwan at thermotolethal coliform bacteria sa pamamagitan ng paraan ng titration

8.3.1. Kahulugan ng konsepto ng isang tagapagpahiwatig

Kahulugan ng konsepto ng mga tagapagpahiwatig ng OKB at TKB ayon sa sugnay 8.2.1.

8.3.2. Lugar ng aplikasyon

Maaaring gamitin ang paraan ng titration:

Sa kawalan ng mga materyales at kagamitan na kinakailangan upang maisagawa ang pagsusuri sa pamamagitan ng pagsasala ng lamad;

Kapag sinusuri ang tubig na may mataas na nilalaman ng mga nasuspinde na solido;

Sa kaso ng pamamayani ng dayuhang microflora sa tubig, na pumipigil sa produksyon ng mga nakahiwalay na kolonya ng karaniwang coliform bacteria sa mga filter.

8.3.3. Prinsipyo ng pamamaraan

Ang pamamaraan ay batay sa akumulasyon ng bakterya pagkatapos ng inoculation ng isang nakapirming dami ng tubig sa isang likidong nutrient medium, na sinusundan ng muling paglalagay sa isang differential dense nutrient medium na may lactose at pagkakakilanlan ng mga kolonya sa pamamagitan ng mga kultural at biochemical na pagsubok.

8.3.4. Nagsasagawa ng pagsusuri

Sa pag-aaral ng inuming tubig husay na pamamaraan(kasalukuyang sanitary at epidemiological supervision, production control) inoculate 3 volume ng 100 ml.

Kapag nag-aaral ng tubig para sa layunin quantification OKB at TKB, kapag muling nasuri, inoculate: 3 volume ng 100 ml, 3 volume ng 10 ml, 3 volume ng 1 ml.

Ang bawat volume ng pansubok na tubig ay inoculated sa isang lactose-peptone medium na inihanda ayon sa clause 5.5. Ang inoculation ng 100 ml at 10 ml ng tubig ay isinasagawa sa 10 at 1 ml ng puro lactose-peptone medium, ang inoculation ng 1 ml ng sample ay isinasagawa sa 10 ml ng medium ng normal na konsentrasyon.

Ang mga pananim ay incubated sa (37 ± 1) °C sa loob ng 48 oras. Hindi mas maaga kaysa sa 24 na oras. pagpapapisa ng itlog, isang paunang pagtatasa ng mga pananim ay isinasagawa. Mula sa mga lalagyan, kung saan ang pagkakaroon ng paglaki (turbidity) at ang pagbuo ng gas ay nabanggit, ang isang bacteriological loop ay inoculated sa mga sektor ng Endo medium (seksyon 5.4.1) upang makakuha ng mga nakahiwalay na kolonya.

Ang mga lalagyan na walang paglaki at pagbuo ng gas ay iniiwan sa isang termostat at sa wakas ay susuriin pagkatapos ng 48 oras. Ang mga pananim na walang palatandaan ng paglaki ay itinuturing na negatibo at hindi sila napapailalim sa karagdagang pananaliksik. Mula sa mga lalagyan kung saan napapansin ang labo at pagbuo ng gas o labo lamang, ang pagtatanim ay ginagawa sa mga sektor ng Endo medium.

Ang mga inoculation sa Endo medium ay ini-incubate sa temperatura na (37 ± 1) °C sa loob ng (18-20) na oras.

Sa pagbuo ng labo at gas sa medium ng akumulasyon at paglaki sa Endo medium ng mga kolonya na tipikal ng lactose-positive bacteria: madilim na pula o pula, mayroon o walang metal na kinang, matambok na may pulang sentro at isang imprint sa nutrient. medium, nagbibigay sila ng positibong tugon sa pagkakaroon ng mga karaniwang coliform. bacteria sa isang binigay na dami ng sample.

Ang pagkakaroon ng OKB ay kailangang kumpirmahin:

Kung mapapansin lamang ang labo sa medium ng akumulasyon;

Kung nabibilang sa lactose-positive colonies ay pinagdududahan ng mananaliksik. Sa mga kasong ito:

Tingnan kung may imprint sa medium ng Endo pagkatapos mag-loop ng kahina-hinalang kolonya;

Isagawa ang oxidase test ayon sa sugnay 8.2.3.2;

Kumpirmahin na kabilang sa Gram ayon sa sugnay 8.2.3.3;

Ang kakayahan sa pagbuo ng gas ay nakumpirma sa pamamagitan ng inoculation ng nakahiwalay na 1-2 colonies ng bawat uri mula sa bawat sektor sa medium na may lactose ayon sa clause 5.6, na sinusundan ng incubation ng inoculations sa temperatura na (37 ± 1) ° C para sa ( 24-48) na oras.

Sa kawalan ng mga nakahiwalay na kolonya, ang sieving ay isinasagawa sa Endo medium sa pamamagitan ng maginoo na bacteriological na pamamaraan.

Ang isang negatibong sagot ay ibinibigay kung:

Walang mga palatandaan ng paglago sa kapaligiran ng akumulasyon;

Walang paglago sa mga sektor ng kapaligiran ng Endo;

Ang mga kolonya na hindi katangian ng coliform bacteria (transparent na may tulis-tulis na mga gilid, malabo, atbp.) ay lumago sa mga sektor ng Endo medium;

Lahat ng mga kolonya ay positibo sa oxidase;

Lahat ng mga kolonya ay Gram-positive;

Kung ang pagbuo ng gas ay hindi nabanggit sa confirmatory test sa medium na may carbohydrate.

Para sa pagtukoy thermotolerant coliform bacteria makipagtulungan sa mga sektor ng Endo medium kung saan lumaki ang mga tipikal na lactose-positive colonies. Paghahasik ng 2-3 nakahiwalay na kolonya ng bawat uri mula sa bawat sektor sa mga test tube na may alinman sa lactose media na inihanda ayon sa talata 5.6.

Bago ang paghahasik, ang daluyan ay pinainit sa isang paliguan ng tubig o sa isang termostat sa 44 °C. Kaagad pagkatapos ng inoculation, ang mga tubo ay inilalagay sa isang thermostat at incubated sa isang temperatura na (44 ± 0.5) °C sa loob ng 24 na oras. Pinapayagan na tingnan ang mga inoculation pagkatapos ng (4-6) na oras.

Sa pagbuo ng gas sa accumulation medium, ang paglaki ng lactose-positive bacteria sa Endo medium, at ang pagtuklas ng kakayahan ng mga bacteria na ito na mag-ferment ng lactose sa acid at gas sa loob ng 24 na oras sa temperatura na 44 ° C, sila magbigay ng positibong tugon sa pagkakaroon ng sample ng tubig ng TKB sa volume na ito. Sa lahat ng iba pang mga kaso, nagbibigay sila ng negatibong sagot.

Pinahihintulutan na pabilisin ang pagpapalabas ng isang tugon sa pagkakaroon ng TKB sa inoculate 1 ml mula sa mga volume ng medium ng akumulasyon, kung saan ang labo at pagbuo ng gas ay nabanggit sa isang test tube na may lactose-peptone medium na may float ayon sa sugnay 5.6 at pinainit sa temperatura na 44 ° C. Ang mga pananim ay pinananatili sa isang thermostat sa temperatura na (44 ± 0.5) ° C sa loob ng 24 na oras. Kung may nakitang acid at gas, nagbibigay sila ng positibong sagot.

8.3.5. Accounting para sa mga resulta

Sa pag-aaral ng 3 volume ng 100 ml, ang mga resulta ay sinusuri nang husay at kung ang OKB at TKB ay nakita sa hindi bababa sa isa sa 3 volume, ang isang entry ay ginawa sa protocol na "matatagpuan sa 100 ml".

Sa pag-aaral ng quantitative method, ang most probable number (MPN) ng OKB at TKB ay tinutukoy ayon sa Table. 1.1 mga aplikasyon 1.

Ang resulta ay iniulat nang walang agwat ng kumpiyansa.

Sa kaso ng isang negatibong tugon sa pagkakaroon ng TKB at TKB sa lahat ng mga volume na sinisiyasat, ang isang konklusyon ay inisyu sa protocol na "hindi matatagpuan sa 100 ml".

8.4. Pagpapasiya ng mga spores ng sulfite-reducing clostridia

8.4.1. Kahulugan ng konsepto ng isang tagapagpahiwatig

Ang sulfite-reducing clostridia ay mga anaerobic rod-shaped na microorganism na bumubuo ng spore na nagpapababa ng sodium sulfite sa iron-sulfite agar sa temperatura na (44 ± 1) ° C sa loob ng (16-18) na oras.

8.4.2. Prinsipyo ng pamamaraan

Ang pamamaraan ay batay sa lumalagong mga pananim sa iron sulfite agar sa ilalim ng mga kondisyon na malapit sa anaerobic at pagbibilang ng bilang ng mga itim na kolonya.

8.4.3. Nagsasagawa ng pagsusuri

8.4.3.1. Ang isang 20 ml na sample ng tubig ay pinainit sa isang paliguan ng tubig sa mga test tube sa temperatura na (75 ± 5)°C sa loob ng 15 minuto upang hindi maisama ang mga vegetative form.

Sa pag-aaral ng chlorinated na tubig, ang pag-init ng sample ay maaaring tanggalin.

Mula sa bawat sample ng inuming tubig, 20 ML ay nilinang o sinasala. Kung kinakailangan, pumili ng mga volume upang hindi hihigit sa 10-15 mga kolonya ang lumalaki sa mga pananim (sa mga filter). Sa kasong ito, ginagabayan sila ng mga resulta ng mga nakaraang pag-aaral.

Ang pagsasala ng tubig ay isinasagawa alinsunod sa mga kinakailangan na itinakda sa talata 7.

8.4.3.2. Pagpapasiya sa pamamagitan ng pagsasala sa mga tubo ng pagsubok

Bago ang pagbabakuna, ang mga tubo na may iron sulfite agar na inihanda ayon sa 5.8 ay natutunaw sa isang paliguan ng tubig (huwag pakuluan!). Sa panahon ng paghahasik, ang medium ay pinananatiling pinainit hanggang (70-80) °C sa isang paliguan ng tubig.

Matapos i-filter ang itinakdang dami ng tubig, ang filter ng lamad ay kinuha gamit ang flambéed tweezers sa pamamagitan ng dalawang magkasalungat na gilid at baluktot sa anyo ng isang tubo ay inilalagay sa isang test tube na may mainit na agar. Ang gilid ng filter na may naayos na bakterya ay nakaharap sa loob. Sa kasong ito, ang filter ay itinuwid at matatagpuan sa kahabaan ng dingding ng test tube.

Kaagad pagkatapos ng inoculation, ang tubo na may agar at filter upang lumikha ng anaerobic na kondisyon ay mabilis na pinalamig sa pamamagitan ng paglalagay sa isang lalagyan ng malamig na tubig. Magtanim ng mga pananim sa (44 ± I) °C sa loob ng (16-18) oras.

8.4.3.3. Pagpapasiya sa pamamagitan ng pagsasala sa mga pagkaing Petri

Ang mga petri dish na may diameter na (55-60) mm ay puno ng manipis na layer ng iron-sulfite agar. Pagkatapos ng pagsasala, ilagay ang filter na may ibabaw ng filter pababa sa solidified nutrient medium upang walang mga bula ng hangin sa ilalim ng filter. Pagkatapos ay ibuhos ang molten iron sulfite agar hanggang sa tuktok ng pinggan upang ang takip ay magkasya nang mahigpit sa daluyan upang lumikha ng anaerobic na kondisyon. Magtanim ng mga pananim sa (44 ± 1) ° C sa loob ng (16 - 1 8) oras.

8.4.3.4. Pagpapasiya sa pamamagitan ng direktang pagtatanim

Ang mga iron sulfite agar vial at sample ng tubig ay inihanda tulad ng inilarawan sa 8.4.3.1.

Idagdag sa mga sterile test tubes:

10 ml sa 2 test tubes (hindi bababa sa 30 ml sa volume) o

5 ml sa 4 na test tube (15 ml bawat isa).

Ang mga pananim ay ibinubuhos ng mainit na iron-sulfite agar sa dami na lumampas sa dami ng tubig ng 2 beses. Ibuhos ang daluyan sa kahabaan ng dingding ng test tube, iwasan ang pagbuo ng mga bula ng hangin. Pagkatapos nito, ang tubo ay mabilis na pinalamig sa pamamagitan ng paglalagay nito sa isang lalagyan ng malamig na tubig upang lumikha ng anaerobic na kondisyon. Ang mga inoculation ay incubated sa (44 ± 1) °C para sa (16-18) na oras.

8.4.4. Accounting para sa mga resulta

Tanging ang mga pananim kung saan nakuha ang mga hiwalay na kolonya ang napapailalim sa quantitative accounting. Ang mga itim na kolonya ay binibilang, lumaki kapwa sa mga filter at sa kapal ng nutrient medium.

Ang resulta ng pagsusuri ay ipinahayag bilang ang bilang ng mga colony-forming units (CFU) ng mga spores ng sulfite-reducing clostridia sa 20 ml ng tubig.

Kung walang paglaki ng mga itim na kolonya sa lahat ng mga filter, ang sagot ay "hindi matatagpuan sa 20 ML ng tubig".

Kung imposibleng mabilang ang mga kolonya dahil sa magkakaugnay na paglaki, ang resulta ay tinasa bilang husay, ang mga tala ng protocol ay "matatagpuan sa 20 ml". Kung kinakailangan, upang makakuha ng isang quantitative na resulta, ang pagsusuri ay paulit-ulit.

8.5. Kahulugan ng coliphages

8.5.1. Kahulugan ng konsepto ng isang tagapagpahiwatig

Ang mga coliphage ay mga bacterial virus na may kakayahang mag-lysing ng E. coli at bumubuo sa temperatura na (37 ± 1)°C pagkatapos ng (18 ± 2) h bacterial lawn lysis zones (plaques) sa nutrient agar.

8.5.2. Paraan ng titration para sa pagtukoy ng mga coliphage

8.5.2.1. Prinsipyo ng pamamaraan

Ang pagpapasiya ng coliphages sa inuming tubig ay binubuo sa paunang akumulasyon ng coliphages sa enrichment medium sa kultura ng E. coli at ang kasunod na pagkilala sa mga zone ng lysis (enlightenment) ng E. coli lawn sa nutrient agar.

8.5.2.2. Lugar ng aplikasyon

Ang pamamaraan ay inilaan para sa kasalukuyang pagsubaybay sa kalidad ng inuming tubig.

8.5.2.3. Paghahanda ng pagsubok na kultura E. coli K12 StrR.

Sa lahat ng mga yugto ng pag-aaral, ang isang bacterial suspension na inihanda tulad ng sumusunod ay ginagamit: ang kultura ng E. coli ay inoculated sa isang test tube na may slanted nutrient agar na may streptomycin (seksyon 5.3.5). Pagkatapos ng (18 ± 2) oras ng pagpapapisa ng itlog sa temperatura na (37 ± 1) ° C, hugasan ang bacteria mula sa joint na may 5 ml ng sterile saline (0.85% NaCl solution) at, ayon sa turbidity standard, maghanda ng suspensyon. ng E. coli sa isang konsentrasyon ng 109 bacterial cells sa 1 ml.

Pinapayagan na gumamit ng 4 na oras na broth culture ng E. coli na nakuha sa pamamagitan ng paglaki sa isang thermostat sa temperatura na 37°C. Ang konsentrasyon ng 109 E. coli bacterial cells ay nakapaloob sa 2 ml.

8.5.2.4. Pagsasagawa ng pagsusuri ng husay

10 ml ng isang 10-tiklop na nutrient na sabaw (inihanda ayon sa sugnay 5.2.2) at 1 ml ng isang inihandang paghuhugas ng isang pagsubok na kultura o 2 ml ng isang 4 na oras na kultura ng sabaw (sugnay 8.5.2.3) ay idinagdag sa isang 100 ml sample ng tubig na pinag-aaralan.

Para sa pagkontrol sa kultura, ang 0.1 ml ng E. coli wash (o 0.2 ml ng 4-hour broth culture) ay inilalagay sa isang Petri dish at natatakpan ng nutrient agar.

Ang sample ng tubig na pansubok (100 ml) at ang Petri dish na may kontrol ng E. coli ay inilalagay sa isang termostat at ini-incubate sa temperatura na (37 ± 1) °C sa loob ng (18 ± 2) na oras.

Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog, 10 ml ng sample ng tubig na pansubok ay ibinuhos sa isang test tube at idinagdag ang 1 ml ng chloroform.

Ang test tube ay sarado na may sterile na goma o silicone stopper, inalog nang malakas upang pantay na ipamahagi ang chloroform sa dami ng sample, at iwanan sa temperatura ng silid nang hindi bababa sa 15 minuto hanggang sa ganap na namuo ang chloroform.

Sa pre-melted at cooled sa (45-49) °C Nutrient agar, idagdag ang inihandang washout ng E. coli bacteria (clause 8.5.2.3) sa rate na 1.0 ml ng washout (o 2 ml ng 4 na oras na sabaw. kultura) bawat 100 ML ng agar.

Ilipat ang 1 ml ng sample na ginagamot sa chloroform (nang hindi hinahawakan ang chloroform) sa isang sterile Petri dish na may pipette mula sa isang test tube at punuin ito ng pinaghalong natunaw at pinalamig sa (45-49) ° C nutrient agar na may dami ng (12-15) ml, pati na rin ang isang karagdagang Petrid dish para sa pagkontrol ng E. coli culture at malumanay na iling upang pantay na paghaluin ang tubig at mga sample ng agar. Para sa kumpletong solidification, ang mga tasa ay naiwan sa mesa sa temperatura ng silid sa loob ng 10 minuto. Pagkatapos ng solidification, ang mga tasa ay ibabalik at inilagay sa isang thermostat para sa (18 ± 2) oras sa 37 °C.

Kapag nagsasagawa ng isang serye ng mga sample, isang pangkalahatang kontrol ang inilalagay para sa buong serye.

Accounting para sa mga resulta

Tingnan ang mga pananim na isinasagawa sa ipinadalang liwanag.

Ang sample ay itinuturing na positibo sa pagkakaroon ng kumpletong lysis, paglilinaw ng ilang mga plake, isang plaka sa ulam na may sample ng tubig sa kawalan ng mga lysis zone sa control dish.

Ang mga tala ng protocol ng pagsusuri: ang mga coliphage ay natagpuan o hindi natagpuan sa 100 ML ng tubig (mga resulta ng husay).

Kung mayroong mga lysis zone sa kontrol ng kultura, ang resulta ay itinuturing na hindi wasto.

8.5.2.5. Pagsasagawa ng Quantitative Analysis

Ibuhos ang inimbestigahang sample ng tubig sa halagang 100 ml sa 6 na volume: 1 bote ng 50 ml at 5 test tube na 10 ml. Sa 50 ml ng sample, magdagdag ng 5 ml ng sampung beses na nutrient broth (ayon sa 5.2.2) at 0.5 ml ng isang hugasan (o 1 ml ng 4-hour broth culture) ng E. coli bacteria (clause 8.5.2.3) . Sa bawat 10 ml ng sample, magdagdag ng 1 ml ng sampung beses na nutrient broth at 0.1 ml ng isang wash (o 0.2 ml ng 4-hour broth culture) ng E. coli bacteria.

Para sa pagkontrol sa kultura, ang OD ml ng bacteria wash (o 0.2 ml ng 4-hour broth culture) ng E. coli ay inilalagay sa isang Petri dish at nilagyan ng nutrient agar.

Ang mga pananim ay incubated sa temperatura na (37 ± 1) °C sa loob ng 18 ± 2 oras.

Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog, ibuhos ang 10 ml mula sa dami ng 50 ml sa isang test tube. Magdagdag ng 1 ml ng chloroform sa lahat ng 6 na volume ng pagsubok. Isara ang mga test tube na may sterile na goma o silicone stopper, kalugin nang malakas upang pantay-pantay na ipamahagi ang chloroform sa dami ng sample, at mag-iwan sa temperatura ng kuwarto nang hindi bababa sa 15 minuto upang mamuo ang chloroform.

Sa dati nang natunaw at pinalamig sa (45-49) °C nutrient agar, idagdag ang inihandang paghuhugas ng E. coli bacteria (seksyon 8.5.2.3) sa rate na 1.0 ml ng paghuhugas (o 2 ml ng 4 na oras na sabaw. kultura) bawat 100 ML ng agar . Ibuhos ang inihandang timpla sa mga Petri dish: 1 tasa para makontrol ang kultura ng E. coli para sa lysogenicity at isang tasa para sa bawat sample ng tubig na pinag-aaralan. Sa sabay-sabay na pagsusuri ng ilang sample ng tubig, isang kontrol ng E. coli culture ang inilalagay.

Matapos ang agarang solidifies, ang mga pagkaing inilaan para sa inoculation ng mga sample ay nahahati sa 6 na sektor, na may label alinsunod sa mga volume na pinag-aaralan. Gamit ang isang Pasteur pipette (micropipette o bacteriological loop na may longitudinal stroke), maglagay ng 1 patak ng supernatant liquid (walang chloroform) sa bawat sektor mula sa kaukulang test tube.

Matapos matuyo ang mga patak, ilagay ang mga tasa na may mga sample ng pagsubok at ang control cup sa isang thermostat sa (37 ± 1) °C sa loob ng (18 ± 2) na oras.

Accounting para sa mga resulta

Ang mga resulta ay tinitingnan sa ipinadalang liwanag.

Ang accounting ay isinasagawa sa pamamagitan ng pagkakaroon ng mga zone ng paliwanag (lysis) sa mga sektor ng E. coli lawn.

Kapag gumagamit ng drip seeding method na may pipette, ang isang lysis zone ay nabuo sa anyo ng isang bilugan na lugar o indibidwal na mga plake. Kapag naghahasik ng isang longitudinal stroke na may bacteriological loop, ang lysis ay nabanggit kasama ang stroke.

Ang sample ay itinuturing na positibo kung mayroong isang lysis zone sa hindi bababa sa isang sektor sa kawalan ng mga lysis zone sa control plate.

Isinasagawa ang pagtatasa ayon sa talahanayan ng most probable number (MPN) ng mga plaque-forming units (PFU) (Talahanayan 1.2). Ang protocol ng pagsusuri ay nagpapahiwatig ng pinaka-malamang na bilang ng mga coliphage sa 100 ml ng tubig at ang hanay ng mga posibleng pagbabago: LF PFU (mas mababang limitasyon - itaas na limitasyon) ng mga coliphage sa 100 ml. Ang resulta ay semi-quantitative.

Kung mayroong mga zone ng lysis sa control dish, ang resulta ay itinuturing na hindi wasto.

8.5.3. Direktang paraan para sa pagtukoy ng mga coliphage

.isa. Prinsipyo ng pamamaraan

Ang pagpapasiya ng mga coliphage sa inuming tubig ay binubuo sa pag-aaral ng isang normalized na dami ng tubig (100 ml) sa pamamagitan ng direktang inoculation at kasunod na pagpaparehistro ng mga lysis zone (plaques) sa E. coli lawn sa Petri dishes na may nutrient agar.

8.5.3.2. Domain

Ang direktang paraan ng paghihiwalay ng mga coliphage mula sa tubig ay isinasagawa nang kahanay sa paraan ng titration sa mga pag-aaral ayon sa mga indikasyon ng epidemya.

8.5.3.3. Pagsasagawa ng pagsusuri

Sa nutrient agar ng double concentration (p. 5.3.2), natunaw at pinalamig sa (45-49) ° C, idagdag ang E. coli wash (p. 8.5.2.3) sa rate na 2.0 ml ng wash (o 4 ml ng 4- oras na kultura ng sabaw) para sa bawat 100 ML ng agar, ihalo. Ibuhos ang inimbestigahang 100 ml ng tubig sa 20 ml na malalaking test tube, init sa (35-44) °C at kaagad (hindi hihigit sa 5 minuto pagkatapos maabot ang kinakailangang temperatura) ibuhos sa 5 Petri dishes at agad na magdagdag ng 20 ml sa bawat ulam. mga paghahalo ng agar na may E. coli culture.

Upang makontrol ang E. coli culture, magdagdag ng 20 ML ng sterile tap water, na pinainit sa (35-44) ° C, sa isang Petri dish, ibuhos ang 20 ML ng inihandang E. coli agar at ihalo nang malumanay.

Pukawin ang mga nilalaman ng mga tasa nang malumanay at umalis sa temperatura ng silid hanggang sa tumigas. Ilagay ang mga plato na may nakapirming agar na nakabaligtad sa isang thermostat at i-incubate sa temperatura na (37 ± 1) °C sa loob ng (18 ± 2) oras.

Accounting para sa mga resulta

Ang pagtingin sa mga pananim ay isinasagawa sa ipinadalang liwanag.

Ang accounting para sa mga resulta ay isinasagawa sa pamamagitan ng pagbibilang at pagbubuod ng mga plake na lumago sa 5 Petri dish. Ang mga resulta ay ipinahayag sa plaque forming units (PFU) bawat 100 ml ng sample ng tubig. Dapat ay walang mga plake sa control dish.

Kadalasan, ang mga lysis zone ay mukhang mga transparent na spot laban sa background ng nutrient agar test culture lawn sa anyo ng mga bilog na nakahiwalay na mga plake (mula 1 hanggang 5-7) mm ang lapad na may malinaw na tinukoy o nabura na mga hangganan.

Sa mataas na konsentrasyon ng phage, ang ibang pattern ng lysis ay sinusunod.

Ang pagsasanib ng mga negatibong kolonya ay nagbibigay ng isang "openwork" na damuhan ng E. coli, ang paglaki ng mga solong kolonya ng E. coli laban sa background ng tuluy-tuloy na lysis, o isang kumpletong kakulangan ng paglaki sa ulam.

Sa direktang inoculation, posible ang lysis, na natatakpan ng inhomogeneously solidified agar, pati na rin sarado ng kasamang microflora. Ang mga droplet ng condensate at inhomogeneously set agar mula sa direktang inoculation ay maaaring humantong sa pagbuo ng mga artefact sa E. coli lawn na biswal na kahawig ng lysis.

Ang paunang accounting ng mga resulta ay maaaring isagawa pagkatapos ng (5-6) oras ng pagpapapisa ng itlog. Sa yugtong ito, sa pagkakaroon ng mga malinaw na zone ng lysis, maaaring mailabas ang isang paunang sagot tungkol sa pagkakaroon ng mga coliphage sa tubig.

Ang panghuling dami ng rekord ng direktang inoculation ay isinasagawa pagkatapos ng (18 ± 2) oras. Ang mga resulta ay ipinahayag bilang ang bilang ng mga yunit na bumubuo ng plaka (PFU) bawat 100 ml ng sample ng tubig.

Kung ang confluent plaque growth ay nabanggit at ang pagbibilang ay mahirap, kung gayon ang isang husay na resulta ay maaaring mailabas ayon sa direktang seeding: "matatagpuan sa 100 ML ng tubig".

Kung ang isang negatibong resulta ay nakuha kapag nagtatrabaho sa direktang pamamaraan, ang huling sagot ay ibibigay ayon sa mga resulta ng pamamaraan ng titradion.

Kung mayroong mga zone ng lysis sa control dish, ang resulta ng pag-aaral ay itinuturing na hindi wasto.

8.5.4. Pagse-set up ng mga kontrol

8.5.4.1. Negatibong kontrol

Kinukumpirma ng negatibong kontrol ang kawalan ng kontaminasyon ng phage ng nutrient media, glassware sa laboratoryo, kagamitan sa mga yugto ng paghahanda at pagsusuri, at pinapayagan ka ring suriin ang kakayahan ng kultura ng pagsubok E . coli upang magbigay ng pare-parehong damuhan.

Ang negatibong kontrol ay ang pag-aaral ng sterile tap water, na isinasagawa katulad ng nasuri na sample ng tubig. Kaya, kapag sinusuri ang tubig sa pamamagitan ng paraan ng titration, 10 ML ng sterile tap water ay idinagdag sa isang karagdagang test tube. Kapag sinusuri ang tubig sa pamamagitan ng direktang pagbabakuna, 20 ML ng sterile tap water ay idinagdag sa karagdagang ikaanim na Petri dish.

Ang mga karagdagang pananim ay sinusuri para sa mga coliphage sa parehong paraan tulad ng mga pangunahing sample.

Kapag nagsusuri ng isang serye ng mga sample, maaaring mayroong isang negatibong kontrol para sa bawat uri ng pagsusuri: titration at direktang. Sa kasong ito, ang negatibong kontrol ay itinanghal pagkatapos iproseso ang lahat ng mga sample ng seryeng ito.

Kung ang mga plaque ng coliphage ay matatagpuan sa mga negatibong control plate, ang mga resulta ng pag-aaral ng buong serye ng mga sample ng tubig ay hindi wasto.

Kinakailangang suriin ang sterility ng mga kagamitan sa laboratoryo, kagamitan, nutrient media, at ulitin ang control inoculation para sa kadalisayan ng E. coli K12 F + StrR test strain.

Ang dalas ng negatibong kontrol - 1 oras bawat araw.

8.5.4.2. Paraan para sa pagkumpirma ng likas na katangian ng phage ng lysis

Sa mga nagdududa na kaso, kapag nagtatrabaho sa parehong titration at direktang pamamaraan, kinakailangan na magsagawa ng control inoculation upang kumpirmahin ang likas na katangian ng phage ng lysis.

Para sa layuning ito, ang isang bacteriological loop ay ginagamit upang alisin ang isang seksyon ng agar na kahina-hinala ng coliphages, ilagay ito sa 5 ml ng nutrient sabaw, kung saan ang isang drop ng E. coli test culture ay idinagdag at incubated sa 37 ° C para sa (16). -18) oras Ang resultang kultura ay ginagamot ng chloroform at sinusuri kung may phage. Ang pagtatanim ay isinasagawa gamit ang isang loop o pipette sa mga sektor ng nutrient agar sa parehong paraan tulad ng inilarawan sa talata 8.5.2.5. Ang lisis sa alinman sa mga sektor ay itinuturing na kumpirmasyon ng pagkakaroon ng phage.

Mga komento sa mesa. Ang pagtatantya ng dami ng OKB at TKB sa 100 cm 3 ng tubig, hindi bababa sa tatlong volume ng tubig (100 cm 3 bawat isa) ay dapat suriin. Kapag sinusuri ang OKB at MCH, hindi pinapayagan ang paglampas sa pamantayan sa 95% ng mga sample na kinuha sa loob ng taon. Ang mga coliphage ay tinutukoy lamang sa mga sistema ng supply ng tubig mula sa mga pinagmumulan sa ibabaw bago ibigay ang tubig sa network ng pamamahagi, ang parehong naaangkop sa pagkakaroon ng mga Giardia cyst. Ang nilalaman ng mga spores ng sulfite-reducing clostridia ay tinutukoy lamang kapag sinusuri ang pagiging epektibo ng teknolohiya sa paggamot ng tubig. Sa kaso ng pagtuklas ng TKB, OKB, coliphages, o hindi bababa sa isa sa mga ipinahiwatig na tagapagpahiwatig, isang paulit-ulit na emergency na pag-aaral ng tubig ay isinasagawa muli para sa TKB, OKB at coliphages. Sa kahanay, ang tubig ay nasubok para sa mga chlorides, ammonium nitrogen, nitrates at nitrite. Kung higit sa dalawang TKB bawat 100 cm 3 at / o TKB at / o mga coliphage ang nakita sa muling kinuhang sample, pagkatapos ay isinasagawa ang isang pag-aaral para sa mga pathogen bacteria ng bituka na grupo at / o mga enterovirus. Ang parehong pag-aaral para sa pathogenic enterobacteria at enteroviruses ay isinasagawa ayon sa epidemiological indications sa pamamagitan ng desisyon ng mga teritoryal na sentro ng Rospotrebnadzor.

Thermotolerant coliform bacteria (TCB) ay bahagi ng OKB at mayroong lahat ng kanilang mga katangian, ngunit, hindi katulad nila, nagagawa nilang mag-ferment ng lactose sa acid, aldehyde at gas sa temperatura na +44 ° C sa loob ng 24 na oras. Kaya, ang TKB ay naiiba sa OKB sa kakayahang i-ferment ang lactose sa acid at gas sa mas mataas na temperatura.

Ang mga indicator na tutukuyin, ang bilang at dalas ng mga pag-aaral ay depende sa uri ng pinagmumulan ng supply ng tubig, ang laki ng populasyon na binibigyan ng tubig mula sa sistema ng supply ng tubig na ito. Ang mga datos na ito ay ibinigay sa SanPiN 2.1.4.1074–01. Sa mga alituntunin para sa sanitary at microbiological analysis ng inuming tubig ( MUK 4.2.1018-01 ng Ministry of Health ng Russian Federation) ang mga pamamaraan ng sanitary at microbiological na kontrol sa kalidad ng inuming tubig ay kinokontrol.

Kabuuang bilang ng mga mikroorganismo- ito ang kabuuang bilang ng mga mesophilic (na may temperatura na pinakamainam na +37 °C) aerobic at facultative anaerobic microorganisms (MAFanM) na nakikita na may dalawang beses na pagtaas, na maaaring bumuo ng mga kolonya sa nutrient agar sa temperatura na +37 °C para sa 24 na oras. Upang makilala ang indicator na ito sa 1 ml ng tubig ay idinagdag sa isang sterile Petri dish at puno ng natunaw (temperatura na hindi mas mataas kaysa sa +50 ° C) meat-peptone agar, at isang araw mamaya ang bilang ng mga lumaki na kolonya ay binibilang. .

PAGPAPAHALAGA NG OKB AT TKB SA PAMAMARAAN NG MGA MEMBRANE FILTER

Ang pamamaraan ay batay sa pagsala ng ilang partikular na dami ng tubig sa pamamagitan ng mga filter ng lamad. Para sa mga layuning ito, ginagamit ang mga filter na may diameter ng pore na 0.45 microns at sukat na 35 o 47 mm ang lapad (mga domestic filter na "Vladipor" MFAS-S-1, MFAS-S-2, MFAS-MA (No. 4- 6) o dayuhan - ISO 9000 o EN 29000). Ang mga filter ng lamad ay inihanda para sa pagsusuri alinsunod sa mga tagubilin ng tagagawa.

PAGPAPAHALAGA NG OKB AT TKB SA PAMAMARAAN NG TITRATING

Ang pamamaraan ay batay sa akumulasyon ng bakterya pagkatapos ng inoculation ng ilang mga volume ng tubig sa likidong nutrient media, na sinusundan ng muling pagbabakuna sa isang differential dense medium na may lactose at pagkakakilanlan ng mga kolonya sa pamamagitan ng mga cultural at biochemical tests. Sa pag-aaral ng inuming tubig sa pamamagitan ng isang paraan ng husay (kasalukuyang sanitary at epidemiological na pangangasiwa), tatlong volume ng 100 cm 3 ang nahasik. Sa pag-aaral ng tubig upang ma-quantify ang OKB at TKB (re-analysis), 100, 10 at 1 cm 3 ay inoculated, ayon sa pagkakabanggit - tatlong volume ng bawat serye.

SANITARY-MICROBIOLOGICAL NA PAG-AARAL NG LUPA

Ang lupa ay nagbibigay ng kanlungan para sa iba't ibang micro-organisms. Kaya, ang bilang ng mga bakterya lamang sa lupa ay umabot sa 10 bilyong mga selula bawat 1 g. Ang mga mikroorganismo ay nakikilahok sa pagbuo ng lupa at paglilinis sa sarili ng lupa, sa sirkulasyon ng nitrogen, carbon, at iba pang mga elemento sa kalikasan. Bilang karagdagan sa bakterya, fungi, protozoa at lichens, na isang symbiosis ng fungi na may cyanobacteria, ay naninirahan dito. Mayroong medyo kaunting mga microorganism sa ibabaw ng lupa dahil sa mga nakakapinsalang epekto ng UV rays, pagpapatuyo at iba pang mga kadahilanan. Ang arable layer ng lupa na 10-15 cm ang kapal ay naglalaman ng pinakamalaking bilang ng mga microorganism. Habang lumalalim ang lalim, bumababa ang bilang ng mga mikroorganismo hanggang sa mawala sila sa lalim na 3-4 m.Ang komposisyon ng microflora ng lupa ay depende sa uri at kondisyon nito, komposisyon ng mga halaman, temperatura, halumigmig, atbp. Karamihan sa mga mikroorganismo sa lupa ay maaaring bumuo sa neutral na pH, mataas na relatibong halumigmig, at temperatura mula 25 hanggang 45 °C.

Ang mga spore-forming rod ay naninirahan sa lupa bacillus at Closlridium. Non-pathogenic bacilli (Vas. megaterium, Vas. subtilis at iba pa.). kasama ng Pseudomonas, Proteus at ilang iba pang bacteria, ang mga ito ay nagpapa-ammon, na bumubuo ng isang pangkat ng mga putrefactive bacteria na nagmi-mineralize ng mga organikong sangkap. Ang mga pathogen spore-forming rods (causative agents ng anthrax, botulism, tetanus, gas gangrene) ay kayang magpatuloy ng mahabang panahon, at ang ilan ay dumami pa sa lupa ( Clostridiumbotulinum). Ang lupa ay isang tirahan din para sa nitrogen-fixing bacteria na sumisipsip ng molecular nitrogen. (Azotobacter, Azomonas, Mycobacterium at iba pa.). Ginagamit ang nitrogen-fixing varieties ng cyanobacteria, o blue-green algae, upang mapabuti ang fertility ng mga palayan.

Mga miyembro ng pamilya ng bituka bacteria (fam. Enterobacteriaceae) - Ang E. coli, mga sanhi ng typhoid fever, salmonellosis at dysentery, kapag nasa lupa na may dumi, ay namamatay. Sa malinis na lupa, bihira ang Escherichia coli at Proteus; Ang pagtuklas ng bakterya ng pangkat ng Escherichia coli (coliform bacteria) sa makabuluhang dami ay isang tagapagpahiwatig ng kontaminasyon ng lupa sa mga dumi ng tao at hayop at nagpapahiwatig ng sanitary at epidemiological unfavorability nito dahil sa posibilidad ng paghahatid ng mga pathogens ng mga impeksyon sa bituka. Ang bilang ng protozoa sa lupa ay mula 500 hanggang 500,000 bawat 1 g ng lupa. Ang pagpapakain sa bakterya at mga organikong nalalabi, ang protozoa ay nagdudulot ng mga pagbabago sa komposisyon ng organikong bagay sa lupa. Mayroon ding maraming fungi sa lupa, ang mga lason na kung saan, na naipon sa pagkain ng tao, ay nagdudulot ng pagkalasing - mycotoxicosis at aflatoxicosis.

Ang mga resulta ng pananaliksik sa lupa ay isinasaalang-alang kapag tinutukoy at hinuhulaan ang antas ng kanilang panganib sa kalusugan at ang mga kondisyon ng pamumuhay ng populasyon sa mga pamayanan (ayon sa epidemiological indications), ang pag-iwas sa mga nakakahawang at hindi nakakahawang sakit (preventive sanitary supervision) , ang kasalukuyang sanitary control ng mga bagay na direkta o hindi direktang nakakaapekto sa kapaligiran.

Kapag nagsasagawa ng kasalukuyang sanitary na pangangasiwa ng estado ng lupa, ang mga ito ay limitado sa isang maikling sanitary at microbiological analysis na nagpapahiwatig ng pagkakaroon at antas ng fecal contamination. Ang mga tagapagpahiwatig na kasama sa pangkat na ito ay nagpapakilala rin sa mga proseso ng paglilinis sa sarili ng lupa mula sa mga organikong pollutant at enterobacteria. Ang isang kumpletong sanitary at microbiological analysis ng lupa ay isinasagawa sa anyo ng preventive sanitary supervision. Ang epekto ng mga chemical pollutants sa biogeocenosis ay kinabibilangan ng pag-aaral ng kanilang bactericidal action sa microbiota ng lupa, bilang isang resulta: isang pagbabago sa komunidad ng mga microorganism sa lupa, ang enzymatic na aktibidad ng lupa. Ayon sa mga indikasyon ng epidemya, ang isang indikasyon ng pathogenic microbiota ay isinasagawa.

Sa laboratoryo, ang isang average na sample ay inihanda mula sa 5 puntos na mga sample ng lupa na kinuha mula sa isang site, lubusan na hinalo at kinuskos sa isang sterile porcelain cup na may rubber pestle sa loob ng 5 minuto. Ang mga dayuhang dumi (mga ugat ng halaman, bato, chips) ay tinanggal sa pamamagitan ng pagsala sa lupa sa pamamagitan ng isang salaan, na paunang pinunasan ng cotton swab na binasa ng 96% ethyl alcohol. Ang mga sample ay kinuha mula sa average na sample (mula 1 hanggang 50-55 g, depende sa listahan ng mga tinutukoy na indicator) at isang 1:10 suspension ay inihanda sa sterile tap water (10 g ng lupa bawat 90 cm 3 ng tubig). Para sa desorption ng mga microorganism mula sa ibabaw ng mga particle ng lupa, ang inihandang suspensyon ng lupa ay inalog ng 3 min sa isang mechanical disperser mixer. Pagkatapos i-settle ang suspension sa loob ng 30 s, ang sunud-sunod na 10-fold dilution ng lupa ay inihahanda sa isang konsentrasyon na 10 -4 -10 -5 g/cm 3 .

Ang pagsusuri ng mga resulta ng sanitary at microbiological na pag-aaral ng mga lupa ay isinasagawa sa pamamagitan ng paghahambing ng data na nakuha sa mga eksperimentong at kontrol na mga plot ng mga lupa ng parehong komposisyon na matatagpuan sa malapit na teritoryo. Ang mga scheme para sa pagtatasa ng sanitary state ng lupa batay sa indibidwal na sanitary at microbiological na pamantayan ay ipinakita sa MU No. 14446–76(Talahanayan 2).

Talahanayan 2

	Titer (g)			Index ng mga thermophilic microorganism (bilang ng mga cell/g)
	BGKP	Nitrifying bacteria	Clostridia
			0.01 at mas mataas
polluted
Sobrang polluted	0.009 at mas mababa	0.0009 at mas mababa	0.00009 at mas mababa

AT MU 2.1.7.730–99 "Kalinisan na pagtatasa ng kalidad ng lupa sa mga populated na lugar" isang pamamaraan para sa pagtatasa ng panganib ng epidemya ng mga lupa sa mga lugar na may populasyon. Sa dokumentong ito, upang masuri ang intensity ng biological load sa lupa, ang mga tagapagpahiwatig tulad ng CGB at ang enterococcus index ay ginagamit, at upang masuri ang panganib ng epidemya ng lupa, ginagamit ang pathogenic enterobacteria at enteroviruses.

PAG-AARAL NG MICROBIAL OBSEMINATION NG AIR ENVIRONMENT

Ang mga mikroorganismo ay pumapasok sa hangin mula sa lupa, tubig, gayundin mula sa ibabaw ng katawan, mula sa respiratory tract at may mga patak ng laway ng tao at hayop. Ang coccoid at hugis baras na bakterya, bacilli, clostridia, actinomycetes, fungi at mga virus ay matatagpuan dito. Ang hangin ay itinuturing na isang kadahilanan sa paghahatid ng mga impeksyon sa paghinga, kung saan ang pathogen ay ipinapadala sa pamamagitan ng airborne droplets o airborne dust. Ang sikat ng araw at iba pang mga kadahilanan ay nakakatulong sa pagkamatay ng microflora ng hangin. Upang mabawasan ang kontaminasyon ng microbial sa hangin, ang basa na paglilinis ng mga lugar ay isinasagawa kasama ng bentilasyon at paglilinis (pagsala) ng papasok na hangin. Ang pagdidisimpekta ng aerosol at paggamot ng mga lugar na may mga lampara ng ultraviolet radiation ay ginagamit din (halimbawa, sa mga microbiological laboratories at operating unit).

Maraming mga microorganism ang nakapaloob sa hangin ng panloob na lugar, ang kontaminasyon ng microbial na kung saan ay depende sa mga kondisyon ng paglilinis ng mga lugar, ang antas ng pag-iilaw, ang bilang ng mga tao sa silid, ang dalas ng bentilasyon, atbp. Ang isang mas malaking bilang ng mga microorganism ay naroroon sa hangin ng malalaking lungsod, isang mas maliit na bilang - sa hangin ng mga rural na lugar. Lalo na kakaunti ang mga mikroorganismo sa hangin sa mga kagubatan, bundok at dagat.

Ang microbiological na pagsusuri ng hangin ay nagbibigay para sa pagpapasiya ng kabuuang nilalaman ng mga microorganism, pati na rin ang staphylococci sa 1 m 3 ng hangin. Sa ilang mga kaso, ang hangin ay sinusuri para sa gram-negative na bacteria, molds at yeast-like fungi. Ayon sa mga indikasyon ng epidemya, ang spectrum ng mga pathogen na nakita sa hangin ay maaaring mapalawak.

Ang mga sample ng hangin ay kinuha sa pamamagitan ng aspirasyon gamit ang Krotov apparatus.

Ang paggamit ng paraan ng Koch sedimentation ay lubos na katanggap-tanggap. Ang mga sumusunod na lugar ng mga pasilidad sa pangangalagang pangkalusugan ay napapailalim sa pag-aaral - mga operating block, dressing at treatment room, aseptic ward (mga kahon), ward ng departamento ng anesthesiology at resuscitation, ward at corridors ng mga medikal na departamento, lugar ng mga parmasya, isterilisasyon at obstetric - mga departamento ng ginekologiko at mga istasyon (mga departamento) ng pagsasalin ng dugo.

Ang pag-aaral ng hangin sa pamamagitan ng pamamaraang Koch ay ginagamit sa napakabihirang mga kaso para sa isang tinatayang pagtatasa ng antas ng polusyon sa hangin ng microbial. Upang matukoy ang kabuuang bilang ng mga microorganism sa hangin ng mga operating room, bago simulan ang trabaho, buksan ang mga plato na may nutrient agar at itakda ang mga ito nang humigit-kumulang sa taas ng operating table - isang plato sa gitna at apat sa mga sulok ng silid (" paraan ng sobre") sa loob ng 10 minuto, at para makita ang Staphylococcus aureus ( ang mga tasa na may yolk-salt agar (YSA) ay ginagamit - sa loob ng 40 minuto Ang mga pananim ay incubated sa isang thermostat sa +37 ° C at isang araw sa temperatura ng silid, pagkatapos ay ang numero ng mga kolonya ay binibilang. 2 ibabaw ng nutrient medium, sa 5 minuto ng pagkakalantad, ang ganoong dami ng bakterya ay idineposito na nasa 10 litro ng hangin (1000 litro ang nilalaman sa 1 m 3). Kasabay nito, higit pa higit sa 5 kolonya ng mga mikroorganismo ang hindi dapat tumubo sa mga nutrient agar plate, at ang Staphylococcus aureus ay hindi dapat magpakita.

SANITARY AT MICROBIOLOGICAL CONTROL NG MGA PAGKAIN

Ang mga produktong pagkain ay maaaring mahawahan ng iba't ibang microorganism, na humahantong sa kanilang pagkasira, pag-unlad ng pagkalason sa pagkain at pagkalasing, pati na rin ang mga impeksyon tulad ng anthrax, brucellosis, tuberculosis, atbp. Ang mga sakit ng isang hayop, mga pinsala o masamang kondisyon ng pagpapanatili nito ay nakakatulong sa paglabag sa mga proteksiyon na hadlang ng katawan at ang pagsasalin (paglipat) ng mga mikroorganismo sa karaniwang mga sterile na tisyu at organo (intravital seeding). Bilang resulta, ang mga tisyu ng kinatay na hayop ay nahawahan ng protozoa, clostridia at iba pang mikrobyo; tinamaan ng mastitis sa gatas ng staphylococci at streptococci. Posible rin ang pangalawang kontaminasyon ng mga produktong pagkain na may mga mikroorganismo. Sa kasong ito, ang mga bagay sa kapaligiran (lupa, tubig, transportasyon, atbp.) gayundin ang mga taong may sakit at mga carrier ng bakterya ay ang pinagmumulan ng polusyon. Sa mababang temperatura ng imbakan ng mga karne at mga produkto ng karne, kahit na sa frozen na karne, ang mga mikrobyo na may kakayahang magparami sa ilalim ng mga kondisyong psychrophilic (pseudomonas, proteus, aspergillus, penicillium, atbp.) ay maaaring mangibabaw. Ang mga mikrobyo na naninirahan sa karne ay nagiging sanhi ng pag-mucilage nito; nabubuo nito ang mga proseso ng fermentation at pagkabulok na dulot ng Clostridium, Proteus, Pseudomonas at fungi.

Ang mga pananim ng cereal, mga mani sa mga kondisyon ng mataas na kahalumigmigan ay maaaring kontaminado ng fungi (aspergillus, penicillium, fusarium, atbp.), Na nagiging sanhi ng pag-unlad ng mycotoxicoses ng pagkain.

Ang mga pagkaing karne (halaya, mga salad ng karne, mga pagkaing tinadtad na karne) ay maaaring maging sanhi ng mga sakit na nauugnay sa salmonella, shigella, diarrheagenic Escherichia coli, Proteus, enterotoxigenic strains ng staphylococci, enterococci, na dumami sa kanila, Closlridium perfringens at Bacillus Cereus.

Ang gatas at mga produkto ng pagawaan ng gatas ay maaaring maging transmission factor para sa brucellosis, tuberculosis, at shigellosis. Posible rin ang pagbuo ng pagkalason sa pagkain bilang resulta ng pagpaparami sa mga produkto ng pagawaan ng gatas ng salmonella, shigella at staphylococci. Ang mga itlog, egg powder at melange sa endogenous primary Salmonella infection ng mga itlog, lalo na ang mga itlog ng pato, ay ang sanhi ng salmonellosis.

Ang mga produkto ng isda at isda ay mas malamang na kontaminado ng bakterya Closlridium botulinum at Vibrio parahaemolylicus- mga ahente ng sanhi ng pagkalasing sa pagkain at mga toxicoinfections. Ang mga sakit na ito ay sinusunod din kapag kumakain ng mga produktong isda na kontaminado ng malaking halaga ng salmonella, proteus, Bacillus cereus, Closlridium perfringens.

Ang mga gulay at prutas ay maaaring makontaminado at may binhi na may diarrheagenic Escherichia coli, Shigella, Proteus, enteropathogenic strains ng staphylococci. Ang mga salted cucumber ay maaaring maging sanhi ng toxicoinfection na dulot ng Vibrio parahaemolyticus.

Ang lahat ng mga resulta ng microbiological analysis ng mga produktong pagkain ay maaaring makuha nang hindi mas maaga kaysa sa 48-72 na oras, i.e. kapag naibenta na ang produkto. Samakatuwid, ang kontrol sa mga tagapagpahiwatig na ito ay may likas na retrospective at nagsisilbi sa mga layunin ng isang sanitary at hygienic na pagtatasa ng isang negosyo na gumagawa o nagbebenta ng mga produktong pagkain.

Ang pagtuklas ng isang mas mataas na pangkalahatang kontaminasyon ng microbial, coliform bacteria, ay nagmumungkahi ng isang paglabag sa temperatura ng rehimen sa panahon ng paghahanda at / o pag-iimbak ng tapos na produkto. Ang pagtuklas ng mga pathogenic microorganism ay itinuturing na isang indicator ng epidemiological problema ng canteen, trade enterprise.

Ang pagrarasyon ng mga microbiological indicator ng kaligtasan ng pagkain ay isinasagawa para sa karamihan ng mga grupo ng mga microorganism ayon sa isang alternatibong prinsipyo, i.e. ang masa ng produkto ay na-normalize, kung saan ang mga bakterya ng pangkat ng Escherichia coli, karamihan sa mga kondisyon na pathogenic microorganism, pati na rin ang mga pathogenic microorganism, incl. salmonella at Listeria monocytogenes. Sa ibang mga kaso, ang pamantayan ay sumasalamin sa bilang ng mga yunit na bumubuo ng kolonya sa 1 g (cm 3) ng produkto (CFU / g, cm 3).

Sa mga produkto ng mass consumption, kung saan sa mga talahanayan SanPiN 2.3.2.1078-01. Mga kinakailangan sa kalinisan para sa kaligtasan at nutritional value ng mga produktong pagkain walang microbiological standards, pathogenic microorganisms, incl. hindi pinapayagan ang salmonella sa 25 g ng produkto.

Ang sanitary at bacteriological control ay dapat na napapailalim sa mga bagay ng paghahanda at pagbebenta ng mga produktong pagkain.

Ang data ng sanitary at microbiological na pag-aaral ay nagbibigay-daan sa layunin na masuri ang sanitary at hygienic na kondisyon ng mga napagmasdan na bagay, kilalanin ang mga paglabag sa sanitary regime at agad na magsagawa ng mga naka-target na hakbang upang maalis ang mga ito.

Mayroong ilang mga paraan ng pag-sample mula sa iba't ibang kagamitan at imbentaryo para sa microbiological na pananaliksik: mga pamamaraan ng pamunas, mga kopya, pagpuno ng agar. Sa mga ito, ang paraan ng paghuhugas ng tampon ay kadalasang ginagamit.

Ang sanitary at microbiological control ay batay sa pagtuklas ng mga bakterya sa mga paghuhugas ng pangkat ng Escherichia coli (BGKP) - mga tagapagpahiwatig ng fecal contamination ng mga bagay na pinag-aaralan. Ang mga pag-aaral sa staphylococcus aureus, pathogenic bacteria ng pamilya ng bituka, ang pagpapasiya ng kabuuang kontaminasyon ng microbial ay isinasagawa ayon sa mga indikasyon. Halimbawa, ang pagkuha ng mga pamunas upang makita ang staphylococci ay kinakailangan kapag sinusuri ang mga tindahan ng confectionery, mga dairy kitchen at mga yunit ng pagkain ng mga institusyong medikal.

Mga bagay ng sanitary at microbiological control:

∨ paghuhugas mula sa mga kamay at oberol ng mga manggagawa sa pagkain (tubig);

∨ kagamitan, imbentaryo, kagamitan at iba pang bagay;

∨ mga handa na pagkain, culinary at nabubulok na mga produkto;

∨ hilaw na materyales at semi-tapos na mga produkto sa kurso ng teknolohikal na proseso (ayon sa epidemiological indications);

∨ inuming tubig mula sa sentralisado at lalo na sa desentralisadong pinagmumulan ng suplay ng tubig.

Ang mga paghuhugas ng kamay mula sa mga kamay ng mga tauhan na kasangkot sa pagproseso ng mga hilaw na produkto ay kinokolekta bago magsimula ang trabaho. Ang mga pamunas ay inihahatid sa bacteriological laboratory sa loob ng 2 oras. Maaari silang maimbak at dalhin nang hindi hihigit sa 6 na oras sa temperatura na +1–10 °C.

Sa laboratoryo, ang mga pamunas ay inoculated sa Kessler media na may lactose o KODA, habang ang isang pamunas ay ibinababa sa test tube na may medium at ang natitirang washing liquid ay inililipat. Ang mga kultura sa Kessler at KODA media ay na-incubate sa 37°C.

Pagkatapos ng 18–24 na oras, ang lahat ng mga test tube na may medium ng Kessler ay inoculated sa mga sektor ng mga tasa na may Endo medium; mula sa KODA medium, ang inoculation ay isinasagawa lamang kung ang kulay ng medium ay nagbabago (mula sa orihinal na purple hanggang dilaw o berde) o nagiging maulap . Ang mga inoculation sa Endo medium ay pinalaki sa 37 °C sa loob ng 18–24 na oras.

Ang mga smear ay inihanda mula sa mga kolonya na katangian ng BGKP, nabahiran ayon sa Gram, sa mikroskopiko, kung kinakailangan, ang mga ito ay nakikilala din ayon sa karaniwang tinatanggap na mga pagsusuri para sa bakterya ng Escherichia coli group. Kapag sinusuri ang mga resulta ng isang sanitary at microbiological na pagsusuri, nagpapatuloy sila mula sa mga pamantayan na sa mga pamunas na kinuha mula sa mga pasilidad ng pagkain, ang BGKP ay dapat wala. Ang pagtuklas ng BGKP sa mga pamunas mula sa mga ibabaw ng malinis, na inihanda para sa mga item sa trabaho, imbentaryo, kagamitan, mga kamay at sanitary na damit ng mga tauhan ay nagpapahiwatig ng isang paglabag sa sanitary regime. Sa kaso ng paulit-ulit na pagtuklas ng CGB sa isang makabuluhang porsyento ng mga pamunas, inirerekomenda na subukan ang mga pamunas para sa pagkakaroon ng pathogenic enterobacteria. Kasabay nito, ang pamunas at flushing fluid ay inoculated sa enrichment media - selenite broth o magnesium medium (posibleng gumamit ng Muller at Kaufman media). Ang karagdagang pananaliksik ay isinasagawa ayon sa karaniwang tinatanggap na pamamaraan.

PAG-AARAL NG GATAS AT DAIRY PRODUCTS

MICROFLORA NG DAIRY PRODUCTS

Ang gatas ay isang napaka-kanais-nais na nutrient medium para sa pagbuo ng maraming microorganism. Pagkatapos kumain ng mga nahawaang gatas at mga produkto ng pagawaan ng gatas, mga impeksiyon tulad ng typhoid fever, dysentery, cholera, escherichiosis, brucellosis, tuberculosis, scarlet fever, tonsilitis, Q fever, sakit sa paa at bibig, tick-borne encephalitis, salmonella toxic infections, staphylococcal enterotoxin poisoning, atbp.

May mga tiyak at hindi tiyak na microflora ng gatas at mga produkto ng pagawaan ng gatas.

Upang tiyak na microflora ng gatas at mga produkto ng pagawaan ng gatas isama ang microbes - pathogens ng lactic acid, alkohol at propionic acid fermentation. Ang mga microbiological na proseso dahil sa mahahalagang aktibidad ng mga microorganism na ito ay sumasailalim sa paghahanda ng mga produktong fermented milk (cottage cheese, kefir, curdled milk, acidophilus, atbp.).

Ang lactic acid fermentation bacteria ay isinasaalang-alang normal na microflora ng gatas at mga produkto ng pagawaan ng gatas . Ang pangunahing papel sa pag-aasim ng gatas at mga produkto ng pagawaan ng gatas ay nilalaro ng lactic streptococci. S. lactis, S. cremaris at iba pa. Mga hindi gaanong aktibong lahi ng lactic acid streptococci ( S. citrovorus, S. lactis subsp. diacetylactis) ay gumagawa ng mga volatile acid at aromatics at samakatuwid ay malawakang ginagamit sa paggawa ng mga keso. Kasama rin sa pangkat ng lactic acid bacteria ang mga lactic acid sticks: Lactobacterium bulgaricum, Lactobacterium casei, Lactobacterium acidophilus atbp.

Ang pangunahing sanhi ng mga ahente ng alkohol na pagbuburo sa gatas at mga produkto ng pagawaan ng gatas ay lebadura ( Saccharomyces lactis at iba pa.).

Nonspecific microflora ng gatas binubuo ng putrefactive bacteria Proteus), aerobic at anaerobic bacilli ( B. subtilis, B. megatherium, C. putrificum) at marami pang iba

Ang microbial contamination ng gatas ay nagsisimula na sa udder. Sa proseso ng paggatas, ang karagdagang seeding nito ay nangyayari mula sa ibabaw ng balat ng udder, mula sa mga kamay, mula sa sisidlan, kung saan ito pumapasok mula sa hangin ng silid. Ang intensity ng karagdagang seeding na ito sa pangkalahatan ay nakasalalay sa kung paano sinusunod ang mga pangunahing kondisyon ng sanitary at hygienic kapag kumukuha ng gatas. Ang hindi magandang kondisyon ng pag-iimbak ng gatas ay maaari ding mag-ambag sa karagdagang paglaki ng microflora dito.

bactericidal phase. Ang sariwang gatas na gatas, bagama't naglalaman na ito ng daan-daang microbes bawat 1 cm 3 (pangunahin na staphylococci at streptococci), ay may mga katangian ng bactericidal dahil sa pagkakaroon ng mga normal na antibodies dito. Samakatuwid, sa ilang panahon, ang pag-unlad ng bakterya sa gatas ay naantala. Ang panahong ito ay tinatawag na bactericidal phase. Ang tagal ng bactericidal phase ay mula 2-36 na oras, depende sa physiological na katangian ng hayop (sa unang bahagi ng panahon ng paggagatas, ang aktibidad ng bactericidal ng gatas ay mas mataas).

Ang pag-iimbak ng gatas sa isang mataas na temperatura (30–37 °C) ay lubhang nagpapaikli sa tagal ng bactericidal phase. Ang parehong epekto ay ibinibigay ng masinsinang karagdagang kontaminasyon ng gatas na may mga mikrobyo.

Matapos matapos ang bactericidal phase, nagsisimula ang pagbuo ng microflora. Ang komposisyon ng mga species nito ay nagbabago sa paglipas ng panahon sa ilalim ng impluwensya ng mga pagbabago sa mga biochemical na katangian ng kapaligiran at bilang isang resulta ng antagonistic at symbiotic na relasyon sa pagitan ng microbial species.

Phase ng mixed microflora. Ito ay tumatagal ng mga 12 oras. Sa panahong ito, ang pamamayani ng anumang mga grupo ng mga species ng microbes ay hindi pa nangyayari, dahil ang kasaganaan ng nutrient substrate at spatial na mga posibilidad ay nagpapahintulot sa maraming uri ng mga microorganism na malayang bumuo.

Phase ng lactic acid streptococci. Sa yugtong ito, nangingibabaw ang mga mikroorganismo ng pinangalanang pangkat ( S. lactis, S. termofilus, S. cremoris at iba pa.). Ang lactose ay masinsinang binago ng mga ito sa lactic acid, ang reaksyon ay nagbabago sa acid side. Ang akumulasyon ng lactic acid ay humahantong, sa hinaharap, sa pagkamatay ng lactic acid streptococci at ang kanilang pagpapalit ng mas maraming acid-resistant na lactic acid bacteria. Nangyayari ito pagkatapos ng 48 oras, na minarkahan ang simula ng ikatlong yugto.

Phase ng lactic acid sticks. Sa loob nito, ang nangingibabaw na posisyon ay nakuha ng mga hugis ng baras na anyo ng lactic acid bacteria. ( L. lactis, L. crusei, L. bulgaricum at iba pa.). Ang resultang acid reaction ng kapaligiran ay humahantong sa pagsugpo sa paglaki at unti-unting pagkamatay ng iba pang uri ng bacteria.

Sa pagtatapos ng ikatlong yugto, ang karagdagang mga pagkakataon para sa pagbuo ng lactic acid microflora ay naubos, at ang mga fungi ay dumating upang palitan ang mga ito, kung saan ang lactic acid ay nagsisilbing isang nutrient substrate.

Yugto ng fungal microflora. Sa panahong ito, ang mga hulma at lebadura ay nabubuo, ang mahalagang aktibidad nito ay humahantong sa pagkawala ng nutritional value nito ng produkto. Ang mga yeast ay pangunahing kinakatawan ng mga species ng genus Torula, ang ilang mga species ng Saccharomycetes ay hindi gaanong nakikita.

Sa mga nakitang amag: amag ng gatas ( Oidium lactis), na sumasaklaw sa ibabaw ng curdled milk at sour cream sa anyo ng fluff, pati na rin ang Aspergillus, Penicillium at Mucoraceae.

Ang pagkilos ng fungal flora ay humahantong sa neutralisasyon ng kapaligiran, at ginagawa itong muli na angkop para sa bakterya. Dumating ang pagbuo ng putrefactive bacteria, na nagiging sanhi ng proteolysis ng casein, at, sa wakas, isang grupo ng anaerobic spore-forming butyric bacteria.

Ang aktibidad ng pagbabago ng microflora ay humihinto lamang sa simula ng kumpletong mineralization ng lahat ng mga organikong sangkap ng gatas.

Sa ilalim ng ilang mga kundisyon, ang proseso ng pagbabago ng microbial biocenoses ay maaaring lumihis mula sa pamamaraan sa itaas. Kaya, ang bakterya ng lactic acid ay maaaring mapigilan mula sa simula ng mga mikrobyo ng pangkat ng Escherichia coli, kung ang huli ay naroroon sa maraming bilang. Ang mga yeast ay maaaring makagawa ng mga kapansin-pansing konsentrasyon ng alkohol, na kung saan ay ang kaso sa mga produkto tulad ng kefir (0.2–0.6%) at lalo na ang koumiss (0.9–2.5%). Ang pagkakaroon ng alkohol ay lumilikha ng mga kondisyon para sa kasunod na pag-unlad ng acetic acid bacteria na nagbuburo ng alkohol sa acetic acid. Ang pagkakaroon ng mga antibiotic at iba pang mga sangkap na pumipigil at neutralisahin ang microflora sa gatas ay maaari ring makapagpabagal ng mga proseso ng lactic acid.

Ang mga kinakailangan sa kalinisan para sa kalidad ng tubig para sa inumin at mga pangangailangan sa tahanan ay batay sa prinsipyo na naglalagay ng pagtuon sa kalidad ng tubig, kung saan nakasalalay ang kalusugan ng tao at mga kondisyon ng pamumuhay. Alinsunod sa modernong sanitary legislation, ang inuming tubig ay dapat na ligtas sa mga tuntunin ng epidemya at radiation, hindi nakakapinsala sa komposisyon ng kemikal at may paborableng mga katangian ng organoleptic.

Ang kaligtasan ng inuming tubig sa isang epidemya na kahulugan ay tinutukoy ng pagsunod nito sa mga pamantayan para sa mga microbiological indicator. Ang microbiological na komposisyon ng inuming tubig ay ang pangunahing tagapagpahiwatig ng kalidad at pagiging angkop nito para sa pagkonsumo. Isinasaalang-alang nito ang parehong bacterial at viral contamination.

Ang kaligtasan ng epidemiological ng inuming tubig sa SanPiN ay tinasa ng ilang mga indicator. Ang isang malaking papel sa kanila ay itinalaga sa mga thermotolerant na coliform bilang mga tunay na tagapagpahiwatig ng polusyon sa dumi at kabuuang mga coliform.

Ang mga karaniwang coliform bacteria (CBC) ay gram-negative, oxidase-negative, non-spore-forming rods na maaaring tumubo sa differential lactose media, fermenting lactose to acid at gas sa temperatura na +37 sa loob ng 24-48 na oras.

Ang Thermotolerant coliform bacteria (TCB) ay bahagi ng OKB at mayroon ang lahat ng kanilang mga katangian, ngunit hindi katulad nila, nagagawa nilang mag-ferment ng lactose sa acid, aldehyde at gas sa temperatura na +44 sa loob ng 24 na oras. Kaya, ang TKB ay naiiba sa OKB sa kakayahang mag-ferment ng lactose sa acid at gas sa mas mataas na temperatura. Ang Thermotolerant at kabuuang coliform ay dapat na wala sa 100 ML ng inuming tubig (sa alinman sa mga sample na may tatlong beses na pag-uulit ng pagsusuri).

Sa network ng pamamahagi ng malalaking sentralisadong sistema ng supply ng tubig na inumin (na may bilang ng mga sample na pinag-aralan ng hindi bababa sa 100 bawat taon), 5% ng mga hindi karaniwang sample para sa mga karaniwang coliform ay pinapayagan, ngunit hindi sa dalawang magkasunod na sample na kinuha sa isang punto.

Ang kabuuang bilang ng mga microorganism (kabuuang microbial number - TMC) ay natutukoy sa pamamagitan ng paglaki sa meat-peptone agar sa isang incubation temperature na 37. Ang indicator na ito ay ginagamit upang makilala ang kahusayan ng pagdalisay ng inuming tubig, dapat itong isaalang-alang kapag sinusubaybayan ang kalidad ng tubig sa dynamics. Ang isang matalim na paglihis ng TMF kahit na sa loob ng mga limitasyon ng karaniwang halaga (ngunit hindi hihigit sa 50 sa 1 ml) ay nagsisilbing senyales ng isang paglabag sa teknolohiya ng paggamot ng tubig. Ang paglaki ng TMP sa tubig ng network ng pamamahagi ay maaaring magpahiwatig ng hindi kanais-nais na kondisyon ng sanitary, na nag-aambag sa pagpaparami ng mga microorganism dahil sa akumulasyon ng mga organikong sangkap o pagtagas, na nangangailangan ng pagsipsip ng kontaminadong tubig sa lupa.

Ang mga aerobic saprophyte ay bumubuo lamang ng isang bahagi ng kabuuang bilang ng mga mikrobyo sa tubig, ngunit ang mga ito ay isang mahalagang tagapagpahiwatig ng sanitary ng kalidad ng tubig, dahil mayroong direktang kaugnayan sa pagitan ng antas ng polusyon ng mga organikong sangkap at ang bilang ng microbial. Bilang karagdagan, pinaniniwalaan na mas mataas ang kabuuang bilang ng microbial, mas malamang ang pagkakaroon ng mga pathogenic microorganism sa tubig. Ang microbial number sa tubig sa gripo ay hindi dapat lumampas sa 100.

Ang kaligtasan ng inuming tubig sa isang epidemic na kahulugan ay tinutukoy ng pagsunod nito sa mga pamantayan para sa mga microbiological indicator (Talahanayan 1).

Talahanayan 1. Microbiological indicator ng inuming tubig

Ang konsepto ng sanitary indicative microorganisms

Ang mga pangunahing kinakailangan para sa sanitary-indicative microorganisms: 1. dapat silang magkaroon ng isang karaniwang natural na tirahan na may mga pathogenic microorganism at mailabas sa panlabas na kapaligiran sa malalaking dami; 2. Sa panlabas na tirahan, ang mga sanitary-indicative na microorganism ay dapat na pantay-pantay na ipinamahagi hangga't maaari at mas lumalaban kaysa sa mga pathogenic. Dapat silang manatili sa tubig nang mas matagal, halos hindi dumarami, mas lumalaban sa iba't ibang salungat na salik, dapat silang magpakita ng mas kaunting pagkakaiba-iba sa mga katangian at katangian; 3. Ang mga pamamaraan para sa pagtukoy ng sanitary indicative microorganism ay dapat na simple at may sapat na antas ng pagiging maaasahan.

Mula sa pananaw ng sanitary microbiology, ang pagtatasa ng kalidad ng tubig ay isinasagawa upang matukoy ang sanitary at epidemiological na panganib o kaligtasan nito. Para sa kalusugan ng tao. Ang tubig ay gumaganap ng isang mahalagang papel sa paghahatid ng mga pathogens ng maraming mga impeksyon, pangunahin ang mga bituka.

Ang direktang dami ng pagpapasiya ng lahat ng mga impeksyon para sa kontrol sa kalidad ng tubig ay hindi magagawa dahil sa pagkakaiba-iba ng kanilang mga uri at ang pagiging kumplikado ng pagsusuri.

Ang pagsusuri ng isang sample ng tubig lamang para sa posibleng pagkakaroon ng mga pathogens ng typhoid fever, paratyphoid A, paratyphoid B, dysentery, infectious jaundice, water fever at tularemia dito ay ganap na mai-load ang buong staff ng kahit isang malaking bacteriological laboratory. Bilang karagdagan, ang sagot sa kasong ito ay ibibigay lamang pagkatapos ng 2-3 linggo, i.e. kapag nainom na ng populasyon ang pinag-aralan na tubig sa mahabang panahon.

Dahil sa halatang kawalan ng isang detalyadong kahulugan ng kaligtasan ng tubig, sa pagtatapos ng ika-19 na siglo, ang mga pagtatangka ay ginawa upang palitan ang paghahanap para sa lahat ng mga pathogenic microbes ng tubig na may isang microbe, kahit na hindi pathogenic, ngunit patuloy na naroroon. sa dumi ng tao. Kung gayon maaari itong isaalang-alang na kung ang tubig na pinag-aaralan ay talagang kontaminado ng dumi, maaari itong maging mapanganib para sa pag-inom, dahil ang parehong may sakit at bacillus carrier ay matatagpuan sa malusog na populasyon. Ang paghahanap para sa mga naturang bacteriological indicator ng fecal contamination ay naging matagumpay. Lumalabas na tatlo sa mga sumusunod na mikrobyo ang palaging nasa dumi ng tao: 1) Escherichia coli; 2) enterococci; 3) anaerobic spore-forming bacteria, higit sa lahat Bac. perfingens.

Kaya, nangingibabaw ang E. coli sa domestic wastewater. Ngunit ito ay hindi lamang tungkol sa nilalaman. Ang pangunahing halaga ng isang bacterial indicator ng fecal contamination ay nakasalalay sa katotohanan na ang rate ng pagkamatay ng karamihan sa mga pathogenic microbes. Kung matugunan lamang ang kundisyong ito, ang isang mikrobyo na patuloy na naroroon sa dumi ng tao ay magiging isang tagapagpahiwatig ng kontaminasyon ng dumi.

Kung lalapit tayo sa mga natuklasang permanenteng naninirahan sa bituka mula sa puntong ito, makikita natin ang mga sumusunod: mga mikrobyo ng grupong Bac. ang mga perfingen ay nananatili sa tubig nang mas mahaba kaysa sa mga pathogenic microbes; enterococci, sa kabaligtaran, mamatay nang mas maaga; para sa Escherichia coli, ang oras ng pag-iingat nito sa tubig ay humigit-kumulang tumutugma sa oras ng kaligtasan ng mga pathogenic microbes.

Samakatuwid, ang pangunahing sanitary-bacteriological indicator ng tubig ay Escherichia coli. Sa Russia lamang, ang tanging bansa sa mundo, ang kalidad ng tubig ay kinokontrol ng bacterium ng Escherichia coli group (BGKP index). Kasama sa pangkat na ito ang lahat ng mga kinatawan ng grupo ng mga bituka na bakterya at mga oportunistikong kinatawan.

Alinsunod sa GOST 2874-73 at GOST 18963-73, ang bacteria ng Escherichia coli group (ECG) ay kinabibilangan ng gram-negative, non-spore-forming bacilli na nagbuburo ng lactose o glucose sa acid at gas sa 37o sa loob ng 24 na oras at hindi may aktibidad na oxidase. Kasama sa mga CGB ang mga kinatawan ng iba't ibang genera - Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, ngunit lahat sila ay inilabas sa kapaligiran mula sa mga bituka ng mga tao at hayop. Kaugnay nito, ang kanilang pagtuklas sa kapaligiran ay dapat isaalang-alang bilang isang tagapagpahiwatig ng kontaminasyon ng fecal.

Sa genera na kasama sa BGKP, ang genus Escherichia ang may pinakamaraming sanitary at indicative na halaga. Ang pagkakaroon ng lahat ng bakteryang ito sa kapaligiran ay itinuturing na sariwang kontaminasyon ng dumi.

Escherichia - ay isa sa background species ng bituka ng tao at hayop. Ang genus Escherichia, kabilang ang uri ng species E. coli, ay isang tagapagpahiwatig ng sariwang kontaminasyon ng fecal, isang posibleng sanhi ng mga nakakalason na impeksyon. Ang mga kinatawan ng genus sa tubig ay itinuturing bilang thermotolerant coliform bacteria.

Citrobacter - nakatira sa wastewater, lupa at iba pang mga bagay sa kapaligiran, pati na rin sa mga dumi ng malusog at AII na mga pasyente. Nabibilang sila sa grupo ng mga oportunistikong bakterya. (Microbiological dictionary-reference book, 1999)

Ang mga disadvantages ng citrobacter bilang SPMO ay kinabibilangan ng mga sumusunod:

1. isang kasaganaan ng mga analogue sa panlabas na kapaligiran.

2. pagkakaiba-iba sa panlabas na kapaligiran.

3. hindi sapat na panlaban sa masamang epekto.

4. ang kakayahang magparami sa tubig.

5. malabo na tagapagpahiwatig kahit na para sa pagkakaroon ng salmonella.

Ang mga kamakailang pag-aaral ay nagsiwalat ng kawalan ng direktang ugnayan sa pagitan ng pagkakaroon ng pathogenic bacteria at mga indicator sa tubig. Sa mga rehiyon na may matinding anthropogenic pressure sa mga katawan ng tubig, ang pagbawas sa nilalaman ng indicator microorganisms ay nabanggit na may pagbabago sa kanilang biological at cultural properties laban sa background ng quantitative predominance ng potensyal na pathogenic at pathogenic bacteria.

Enterobacter - nakatira sa mga bituka ng mga tao at iba pang mga hayop, ay matatagpuan sa lupa, tubig, mga produkto ng pagkain, tawag para sa bituka, urogenital, respiratory, purulent-namumula sakit ng tao.

Klebsiella - nabubuhay sa tubig, lupa, pagkain, sa bituka at respiratory tract ng mga tao, mammal, ibon.

Noong 1910 Ang Enterococci (Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium) ay iminungkahi para sa papel ng SPMO.

Ang Enterococci ay isang genus ng facultative anaerobic asporogenic chemoorganotrophic Gram+ bacteria. Ang mga cell ay polymorphic. Malawak na ipinamamahagi sa kalikasan. Ang mga ito ay isa sa mga background species ng mga bituka ng mga tao, mammal, ibon. Kadalasang matatagpuan sa flora ng balat ng perineum at genital tract, mga lukab ng ilong, pharynx, ilong. Matagal na mabuhay sa lupa, mga produktong pagkain.

Mga Benepisyo ng Enterococcus bilang SPMO:

1. ay patuloy na nasa bituka ng tao at patuloy na inilalabas sa panlabas na kapaligiran. Kasabay nito, ang Enterococcus faecalis ay pangunahing naninirahan sa bituka ng tao, kaya ang pagtuklas nito ay nagpapahiwatig ng kontaminasyon sa mga dumi ng tao. Sa mas mababang lawak, ang Enterococcus faecium ay nangyayari sa mga tao. Ang huli ay pangunahing matatagpuan sa mga bituka ng mga hayop, bagaman ang Enterococcus faecalis ay medyo bihira din.

2. ay hindi maaaring magparami sa panlabas na kapaligiran, Enterococcus faecium higit sa lahat reproduces, ngunit ito ay may mas kaunting epidemiological kahalagahan.

3. hindi nagbabago ang mga katangian nito sa panlabas na kapaligiran.

4. ay walang analogues sa panlabas na kapaligiran.

5. lumalaban sa masamang impluwensya sa kapaligiran. Ang Enterococcus ay 4 na beses na mas lumalaban sa chlorine kaysa sa Escherichia coli. Ito ang kanyang pangunahing merito. Dahil sa katangiang ito, ginagamit ang enterococcus upang suriin ang kalidad ng chlorination ng tubig, pati na rin ang isang tagapagpahiwatig ng kalidad ng pagdidisimpekta. Lumalaban sa temperatura na 60 ° C, na nagpapahintulot na magamit ito bilang isang tagapagpahiwatig ng kalidad ng pasteurization. lumalaban sa karaniwang mga konsentrasyon ng asin na 6.5-17%. Lumalaban sa pH sa hanay ng 3-12.

6. Ang mataas na pumipili na media ay binuo para sa indikasyon ng enterococci. Ang survival rate ng Enterococcus sa tubig ay lumalapit sa pathogenic Enterobacteria. Ang Enterococcus ay nararapat ang pangalawang sanitary-indicative test pagkatapos ng E. coli sa pag-aaral ng inuming tubig.

Sa kasalukuyan, ang enterococcometry ay ginawang legal sa internasyonal na pamantayan ng tubig bilang isang tagapagpahiwatig ng sariwang kontaminasyon ng fecal. Kapag ang hindi tipikal na Escherichia coli ay matatagpuan sa tubig, ang pagkakaroon ng enterococci ay nagiging pangunahing tagapagpahiwatig ng sariwang fecal contamination. Sa kasamaang palad, sa SanPiN 2.1.4.1074-01 para sa inuming tubig, hindi ibinigay ang kahulugan ng enterococcus.

Ang pangkat ng Proteus ay itinuturing na salarin ng mga proseso ng putrefactive sa kalikasan, at samakatuwid, bilang mga tagapagpahiwatig ng pagkakaroon ng mga organikong sangkap sa tubig ng mga reservoir. Nalalapat ito pangunahin sa isang species - Pr. vulgaris; ang pangalawang species - Pr.mirabilis - ay isang naninirahan sa mga bituka ng mga tao at hayop. Ang pagkakaibang ekolohikal na ito ay naging posible upang hatulan ang kalikasan ng polusyon sa tubig at ang antas ng kaligtasan ng epidemya nito. Ang Pr.vulgaris ay maaaring maging tagapagpahiwatig ng polusyon sa fecal, Pr.vulgaris - isang tagapagpahiwatig ng pagtaas sa konsentrasyon ng organikong bagay sa pangkalahatan. Ang mga kahinaan ng tagapagpahiwatig na ito ay ang pasulput-sulpot na presensya ng Pr.mirabilis sa bituka ng tao at ang kakayahan ng parehong species na magparami nang masinsinan sa tubig. Wala ring paraan ng pananaliksik na magbibigay-daan sa pagkakaiba-iba na isinasaalang-alang ang parehong mga species kapag sila ay sabay-sabay na naroroon sa sample ng pagsubok. Ang iminungkahing pamamaraan ay hindi tumutupad sa gawaing ito.

Ipinakita na ngayon na ang bakterya ng genus Proteus ay matatagpuan sa 98% ng mga kaso sa mga pagtatago ng mga bituka ng mga tao at hayop, kung saan 82% ng mga kaso ay Pr.mirabilis. Ang pagtuklas ng proteus sa tubig ay nagpapahiwatig ng kontaminasyon ng bagay na may mga nabubulok na substrate at nagpapahiwatig ng matinding problema sa kalusugan. Ang proteometry ay opisyal na kinikilala sa USA.

Ang pagkilala sa mga spores ng sulfide-reducing clostridia ay isinasagawa sa mga tubo ng tubig mula sa mga pinagmumulan sa ibabaw upang masuri ang pagiging epektibo ng teknolohikal na paggamot ng tubig. Ang mga spores ng sulfide-reducing bacteria ay hindi dapat naroroon sa 20 ml ng inuming tubig pagkatapos makumpleto ang paggamot sa tubig.

Bilang indicator ng viral contamination ng inuming tubig, ang SanPiN ay kinabibilangan ng mga coliphage, na pinakamalapit sa mga bituka na virus sa kanilang biyolohikal na pinagmulan, laki, katangian, at paglaban sa mga salik sa kapaligiran. Ang mga coliphage ay hindi dapat makita sa 100 ML ng ginagamot na inuming tubig.