Paraan ng bitag para sa pagtukoy ng aktibidad ng antioxidant. Paraan para sa pagtukoy ng kabuuang aktibidad ng antioxidant

Ang imbensyon ay nauugnay sa industriya ng pagkain at maaaring magamit upang matukoy ang kabuuang aktibidad ng antioxidant. Ang pamamaraan ay isinasagawa bilang mga sumusunod: ang analyte ay nakikipag-ugnayan sa reagent 0.006 M Fe(III) - 0.01 M o-phenanthroline. Ang ascorbic acid (AA) ay nakikipag-ugnayan sa parehong reagent, na idinagdag sa isang ratio na 1:100. Pagkatapos ay incubated para sa hindi bababa sa 90 minuto at photometered sa 510±20 nm. Pagkatapos nito, ang pag-asa ng halaga ng analytical signal sa halaga ng sangkap ay itinatag at ang halaga ng kabuuang AOA ay kinakalkula. Ang ipinakita na pamamaraan ay nagbibigay-daan sa mas kaunting oras-ubos at mas maaasahang pagpapasiya ng kabuuang aktibidad ng antioxidant ng mga materyales ng halaman at mga produktong pagkain batay dito. 2 w.p. f-ly, 1 sakit, 5 tab.

Ang imbensyon ay nauugnay sa analytical chemistry at maaaring gamitin sa pagtukoy ng kabuuang antioxidant activity (AOA) ng mga plant materials at mga produktong pagkain batay dito.

Kilalang coulometric na paraan para sa pagtukoy ng kabuuang AOA ng tsaa, batay sa pakikipag-ugnayan ng may tubig na mga extract ng produkto na may electrically generated bromine compounds (I.F. Abdulin, E.N. Turova, G.K. Chemistry, 2001, vol. 56, no. 6, pp. 627- 629). Ang pagpili ng mga electrogenerated bromine compound bilang isang titrant ay dahil sa kanilang kakayahang pumasok sa iba't ibang mga reaksyon: radical, redox, electrophilic substitution at pagdaragdag ng maramihang mga bono. Ginagawa nitong posible na masakop ang isang malawak na hanay ng mga biologically active tea compound na may mga katangian ng antioxidant. Ang mga kawalan ng pamamaraan ay ang posibilidad ng reaksyon ng bromination sa mga sangkap na hindi antioxidant, at ang pagpapahayag ng nagresultang halaga ng kabuuang AOA sa mga yunit ng dami ng kuryente (kC/100 g), na nagpapahirap sa pagsusuri. ang mga resulta.

Isang kilalang paraan ng voltammetric para sa pagtukoy ng kabuuang aktibidad ng antioxidant sa pamamagitan ng relatibong pagbabago sa kasalukuyang ng oxygen electroreduction sa potensyal na hanay mula 0.0 hanggang -0.6 V (rel. sat. c.s.e.) sa isang mercury-film electrode (Pat. IPC 7 G 01 N 33/01 Voltammetric na pamamaraan para sa pagtukoy ng kabuuang aktibidad ng antioxidants / E. I. Korotkova, Yu. Ang kawalan ng pamamaraang ito ay ang paglitaw ng mga side electrochemical reactions, na binabawasan ang kahusayan ng pagpapasiya ng mga antioxidant, na humahantong sa pagbawas sa pagiging maaasahan ng mga resulta.

Isang kilalang paraan para sa pagkontrol sa kabuuang AOA ng prophylactic at therapeutic antioxidant agent para sa lipid peroxidation sa malonic aldehyde na may spectrophotometric o chemiluminescent detection (Pat. 2182706, Russia, IPC 7 G 01 N 33/15, 33/52. funds / Pavlyuchenko I.I., Basov A.A., Fedosov S.R. - No. 2001101389/14; application 01/15/2001; publication 05/20/2002). Kasabay nito, ang aktibidad ng antioxidant ay inversely proportional sa antas ng mga produktong lipid peroxidation. Ang kawalan ng pamamaraang ito ay maaaring ituring na isang limitadong hanay ng mga nasuri na bagay, dahil sa ilalim ng mga kondisyong ito, ang mga antioxidant ng isang grupo lamang, ang mga lipid, ay tinutukoy.

Isang kilalang paraan para sa pagtukoy ng kabuuang AOA ng isang katas ng halaman, na binubuo sa pagpapapisa ng katas na may linetol at iron (II) sulfate, pagsisimula ng reaksyon ng oksihenasyon sa pamamagitan ng UV irradiation at kasunod na pakikipag-ugnayan sa thiobarbituric acid sa pagkakaroon ng triton X-100 ( Application 97111917/13, Russia, IPC 6 G 01 N 33/00 Paraan para sa pagtukoy ng kabuuang aktibidad ng antioxidant / Rogozhin VV - Appl. 08.07.1997; publ. 10.06.1999). Kapag nagsasagawa ng spectrophotometry, ginagamit ang isang halo ng ethanol at chloroform sa isang ratio na 7:3. Ang halaga ng AOA ng isang biological na materyal ay tinutukoy ng ratio ng akumulasyon ng produkto ng reaksyon - malondialdehyde sa isang sample na naglalaman ng isang katas sa isang sample na may isang prooxidant. Ang kawalan ng pamamaraang ito ay nakasalalay sa posibilidad ng mga side reaction sa panahon ng pag-iilaw ng UV, na binabawasan ang pagiging maaasahan ng mga resulta ng pagsusuri.

Ang mga nakalistang pamamaraan para sa pagtukoy ng kabuuang AOA ay may ilang mga disadvantages: mataas na lakas ng paggawa, mababang pagiging maaasahan, ang sinusukat na halaga ng kabuuang AOA ay hindi nauugnay at hindi maihahambing sa anumang karaniwang sangkap.

Ang pinakamalapit na analogue sa inaangkin na imbensyon ay isang paraan para sa pagtukoy ng kabuuang AOA ng mga halamang panggamot sa pamamagitan ng pagsukat ng chemiluminescence na nangyayari kapag tumutugon sa luminol sa pagkakaroon ng isang oxidizing agent hydrogen peroxide (M.Kh. canary grass by chemiluminescence // Journal of Analytical Chemistry, 2004, V.59, No. 1, P.84-86). Para sa isang quantitative assessment ng kabuuang AOA, ang pagbabawas ng kakayahan ng katas ng mga panggamot na hilaw na materyales at ang aktibidad ng isang makapangyarihang antioxidant - ascorbic acid sa halagang 25-110 μg ay inihambing. Kung ikukumpara sa mga pamamaraan sa itaas, sa prototype, ang hydrogen peroxide ay ginagamit bilang isang oxidizing agent, nakikipag-ugnayan sa isang malawak na hanay ng mga antioxidant, at ang sinusukat na halaga ng kabuuang AOA ng bagay ay tinutukoy at ipinahayag na may kaugnayan sa ascorbic acid, na isang karaniwang antioxidant, na ginagawang posible upang makakuha ng maaasahang mga resulta habang pinapanatili ang iba pang mga disadvantages. Kasama rin sa mga disadvantage ang pagiging kumplikado ng mga kagamitan na ginamit sa pamamaraan.

Ang teknikal na layunin ng inaangkin na imbensyon ay ang pagbuo ng isang mas kaunting oras-ubos at maaasahang paraan para sa pagtukoy ng kabuuang aktibidad ng antioxidant ng mga materyales ng halaman at mga produktong pagkain batay dito.

Upang malutas ang teknikal na problema, iminungkahi na makipag-ugnay sa analyte sa reagent 0.006 M Fe (III) - 0.01 M o-phenanthroline, at ascorbic acid (AA) na may parehong reagent, na idinagdag sa isang ratio ng 1:100 , incubated para sa hindi bababa sa 90 minuto, photometered sa 510±20 nm, na sinusundan ng pagtatatag ng dependence ng analytical signal sa dami ng substance at pagkalkula ng kabuuang AOA. Sa partikular, ang pagkalkula ay maaaring isagawa ayon sa formula (I), na nagmula sa equation ng quantitative correspondence sa pagitan ng bagay na pinag-aaralan at ascorbic acid:

kung saan ang a, b ay ang mga coefficient sa regression equation para sa pagtitiwala ng analytical signal sa halaga ng AA;

a", c" - mga coefficient sa equation ng regression para sa pagtitiwala ng analytical signal sa dami ng bagay na pinag-aaralan;

x araw. - masa ng pinag-aralan na ahente ng pagbabawas (sample), mg.

Ang paggamit ng iminungkahing reagent sa ilalim ng mga kundisyong ito ay nagpapahintulot sa amin na palawakin ang linear na hanay at bawasan ang mas mababang limitasyon ng mga tinukoy na halaga ng ascorbic acid. Ang iminungkahing hanay ng mga mahahalagang tampok ay nagbibigay-daan sa iyo upang matukoy ang kabuuang AOA ng isang malawak na hanay ng mga materyales ng halaman at mga produktong pagkain batay dito.

Ang mga quantitative correspondence equation ay nagkokonekta sa dependence ng analytical signal sa dami ng ascorbic acid at sa dependence ng analytical signal sa dami ng object na pinag-aaralan, basta ang antioxidant activity ay pantay.

Pagkatapos ng pagproseso ng mga resulta ng photometric measurements ng magnitude ng analytical signal sa pamamagitan ng hindi bababa sa mga parisukat na paraan (K. Derffel Statistics sa analytical chemistry. - M .: "Mir", 1994. S. 164-169; A.K. Charykov Mathematical processing ng resulta ng pagsusuri ng kemikal - L .: Chemistry, 1984. S.137-144) ang mga dependency na ito ay inilarawan ng isang linear regression function: y=ax+b, kung saan ang a ay ang regression coefficient, b ay isang libreng miyembro. Ang coefficient a sa equation ng regression ay katumbas ng tangent ng slope ng tuwid na linya sa x-axis; coefficient b - distansya sa kahabaan ng y-axis mula sa pinanggalingan (0,0) hanggang sa unang punto (x 1 , y 1).

Ang mga coefficient a at b ay kinakalkula ng mga formula:

Ang equation ng regression para sa pag-asa ng AS sa dami ng ascorbic acid sa isang partikular na oras ay may anyo:

y AK \u003d a x AK (mg) + b,

regression equation para sa pag-asa ng AS sa dami ng bagay na pinag-aaralan (reducing agent):

y VOST \u003d isang "x VOST (mg) + b",

kung saan para sa AK, para sa VOST ay ang optical density ng photometric solution;

x AK (mg), x VOST (mg) - konsentrasyon ng ascorbic acid (reducing agent) sa solusyon;

pagkatapos, sa pamamagitan ng pagpareho ng mga halaga ng mga pag-andar, nakakakuha kami ng formula (I) para sa pagkalkula ng aktibidad ng antioxidant ng bagay na pinag-aaralan sa mga yunit ng halaga (mg) ng ascorbic acid.

Ang pagguhit ay nagpapakita ng pag-asa ng analytical signal sa halaga ng pagbabawas ng ahente.

Ang optical density ng mga nasuri na solusyon ay sinusukat sa isang KFK-2MP photoelectric colorimeter.

Ito ay kilala (F. Umland, A. Yasin, D. Tirik, G. Vunsch Complex compounds sa analytical chemistry - M.: Mir, 1975. - 531 p.) na ang o-phenanthroline ay bumubuo ng isang nalulusaw sa tubig na chelate na may bakal ( II) pula-orange na kulay, na nailalarawan sa pamamagitan ng maximum na pagsipsip sa λ=512 nm. Samakatuwid, sa iminungkahing pamamaraan, ang photometry ay isinasagawa sa λ=510±20 nm.

Ang pag-optimize ng komposisyon ng reagent at ang halaga nito na ipinakilala sa reaksyon ay isinagawa batay sa mga resulta ng pagpaplano ng multifactorial ng eksperimento gamit ang pamamaraang Latin Square, na binubuo sa pagbabago ng lahat ng pinag-aralan na mga kadahilanan sa bawat eksperimento, at bawat isa. antas ng bawat salik nang isang beses lamang nakakatugon sa iba't ibang antas ng iba pang mga salik. Binibigyang-daan ka nitong tukuyin at suriin ang epektong dulot ng bawat salik na pinag-aaralan nang hiwalay.

Ang mga sumusunod na salik ay ginamit: ang mga halaga ng Fe(III), o-phenanthroline, at ang dami ng reagent na ipinasok sa reaksyon. Ang kumbinasyon ng mga salik ay dapat magbigay ng malawak na hanay ng analytical signal (AS) linearity na may sapat na sensitivity, sa isang banda, at katatagan ng reagent sa paglipas ng panahon, sa kabilang banda. Ginawa nitong posible na iisa ang mga sumusunod na antas para sa bawat salik:

ang halaga ng Fe(III): 0.003 M (A 1); 0.006 M (A 2); 0.009 M (A 3);

dami ng o-phenanthroline: 0.01 M (B 1); 0.02 M (B 2); 0.03 M (B 3);

dami ng reagent: 0.5 ml (C 1); 1.0 ml (C 2); 2.0 ml (C 3) (Talahanayan 1).

Upang piliin ang pinakamainam na kumbinasyon ng mga antas ng kadahilanan, ang mga pag-asa sa pagkakalibrate ng AS sa dami ng ascorbic acid ay nakuha sa saklaw mula 10 hanggang 150 μg (na kinakailangan upang kumpirmahin ang linearity ng function), ang equation ng regression ng nakuha na pag-asa ay kinakalkula, at pagkatapos ay ang halaga ng AS sa isang naibigay na halaga (120 μg) ng ascorbic acid. Kaya, para sa bawat komposisyon ng reagent (mga kadahilanan A, B), ang dami (factor C) ay napili, kung saan ang halaga ng AC ay maximum. Ginawa nitong posible na bawasan ang bilang ng mga itinuturing na kumbinasyon sa siyam (Talahanayan 2).

Ang paghahambing ng kabuuang AS para sa bawat antas, ang mga halaga na may pinakamataas na halaga ay nakilala: ΣA 2 (0.991); ΣB 1 (1.066); ΣC 2 (1.361). Ginawa nitong posible na tapusin na ang komposisyon ng reagent ay pinakamainam: 0.006 M Fe (III) - 0.01 M o-phenanthroline kasama ang dami nito na ipinakilala sa reaksyon, 1.0 ml bawat 100 ml ng solusyon.

Sa pinakamainam na konsentrasyon ng reagent, pinag-aralan namin ang pagbabago sa pagtitiwala ng AS sa konsentrasyon ng ascorbic acid at ilang mga pagbabawas ng mga ahente na karaniwan sa mga natural na bagay (tannin, rutin, quercetin) sa iba't ibang oras ng pagpapapisa ng itlog ng pinaghalong reaksyon (30, 60). , 90, 120 min). Napag-alaman na para sa lahat ng pinag-aralan na mga ahente ng pagbabawas, ang pag-asa ng AS sa kanilang nilalaman ay linear sa hanay na 10-150 μg (tingnan ang pagguhit) at ang halaga ng AS ay nakasalalay sa oras ng pagpapapisa ng itlog (talahanayan 3).

Makikita mula sa pagguhit na ang pagbabago sa AC sa ilalim ng pagkilos ng rutin ay hindi gaanong mahalaga, ang tannin ay lumalapit, at ang quercetin ay lumampas sa parehong pag-asa para sa ascorbic acid. Kung isasaalang-alang ang pagbabago sa AC mula sa oras ng pagpapapisa ng itlog para sa lahat ng pinag-aralan na pagbabawas ng mga ahente (Talahanayan 3), natagpuan na ang pag-stabilize ng analytical signal sa paglipas ng panahon ay sinusunod mula sa 90 minuto.

Talahanayan 3 Pagbabago sa AS ng mga nagpapababang ahente sa paglipas ng panahon
Test substance	m sangkap, mg / cm 3	Analytical signal
Test substance	m sangkap, mg / cm 3	Oras ng pagpapapisa ng itlog ng pinaghalong reaksyon, min
30	60	90	120
Bitamina C	10	0,038	0,042	0,044	0,044
100	0,340	0,352	0,360	0,363
Tannin	10	0,029	0,037	0,042	0,043
100	0,280	0,295	0,303	0,308
Rutin	10	0,013	0,016	0,019	0,019
100	0,150	0,166	0,172	0,175
Quercetin	10	0,031	0,044	0,051	0,053
100	0,420	0,431	0,438	0,442

Upang patunayan ang kabuuan ng likas na katangian ng tinukoy na halaga ng AOA, ang epekto ng reagent Fe (III) - o-phenanthroline sa mga solusyon sa modelo, na kinabibilangan ng mga ahente ng pagbabawas: tannin, rutin, quercetin, at ascorbic acid sa iba't ibang ratios, ay pinag-aralan. Ang talahanayan 4 ay nagpapakita ng mga resulta ng pagsusuri ng mga pinaghalong modelo.

Talahanayan 4 Mga resulta ng pagsusuri ng mga pinaghalong modelo (P=0.95; n=3)
Ang bilang ng mga sangkap sa pinaghalong	Kabuuang AOA, nakalkula, mcgAA	Kabuuang AOA, natagpuan, mcgAA
ipinakilala	Kabuuang AOA, nakalkula, mcgAA	Kabuuang AOA, natagpuan, mcgAA	sa mga tuntunin ng AK
AK	Tannin	Rutin	Quercetin	AK	Tannin	Rutin	Quercetin
-	20	20	20	-	16,77	9,56	32,73	59,06	57,08
-	10	10	10	-	8,35	4,77	16,41	29,53	26,95
-	50	10	10	-	42,02	4,77	16,41	63,20	55,04
-	10	50	10	-	8,35	23,93	16,41	48,69	50,06
-	10	10	50	-	8,35	4,77	81,70	94,82	91,61
-	30	10	10	-	25,19	4,77	16,41	46,37	39,24
-	10	30	30	-	8,35	14,35	49,06	71,76	73,47
20	20	20	20	20	16,77	9,56	32,73	79,06	96,29
50	10	10	10	50	8,35	4,77	16,41	87,95	93,07
10	50	10	10	10	42,02	4,77	16,41	73,20	78,15
10	10	50	10	10	8,35	23,93	16,41	58,69	78,74
10	10	10	50	10	8,35	4,77	81,70	104,82	121,45
30	30	10	10	30	25,19	4,77	16,41	76,37	84,59
10	10	30	30	10	8,35	14,35	49,06	81,76	103,31

Ang pagkalkula ng teoretikal na halaga ng kabuuang AOA ay isinasagawa ayon sa mga equation ng quantitative correspondence na nagpapakilala sa kapasidad ng antioxidant ng pinag-aralan na pagbabawas ng ahente na may paggalang sa ascorbic acid, sa ilalim ng mga kondisyon ng pantay na aktibidad ng antioxidant: .

Ang halaga ng pang-eksperimentong (nahanap) AOA ay kinakalkula gamit ang average na regression equation para sa pagtitiwala ng AS sa dami ng ascorbic acid. Mula sa mga resulta na ipinakita sa Talahanayan 4, makikita na ang mga eksperimento na nakuhang mga halaga ng AOA ay sumasang-ayon nang kasiya-siya sa mga teoretikal na kinakalkula.

Kaya, ang natukoy na halaga ng AOA ay isang kabuuang tagapagpahiwatig, at ang pagpapasiya ng halaga nito gamit ang mga equation ng quantitative correspondence ay tama.

Ang iminungkahing pamamaraan ay nasubok sa mga tunay na sample. Upang matukoy ang kabuuang AOA ng isang tunay na sample o ang katas nito, ang mga pagdepende sa pagkakalibrate ng AS sa dami ng analyte at ascorbic acid ay nakuha sa isang incubation time ng reaction mixture na hindi bababa sa 90 minuto. Ang pagkalkula ng kabuuang AOA ay isinagawa ayon sa formula (I) at ipinahayag sa mg ng ascorbic acid bawat gramo ng test object (mgAA/g).

Upang kumpirmahin ang kawastuhan ng iminungkahing pamamaraan, ang mga sample na ito ay sinubukan ayon sa mga kilalang pamamaraan, sinusuri ang nilalaman ng ascorbic acid (GOST 24556-89 Mga naprosesong produkto ng prutas at gulay. Mga pamamaraan para sa pagtukoy ng bitamina C) at ang umiiral na mga ahente ng pagbabawas: sa tsaa - tannin (GOST 19885-74 Tea. Paraan para sa pagtukoy ng nilalaman tannin at caffeine), sa rosehips - ang halaga ng mga organic acids (GOST 1994-93 Rosehips. Mga Pagtutukoy) (talahanayan 5).

], gayunpaman, ang kahulugan ng mga antioxidant bilang mga compound ng kemikal ay hindi nagbibigay ng kumpletong larawan ng mga proteksiyon na katangian ng bagay na pinag-aaralan: natutukoy sila hindi lamang sa dami ng isa o ibang antioxidant, kundi pati na rin sa aktibidad ng bawat isa sa kanila. . Antioxidant activity, o antioxidant activity, AOA, ay ang rate constant para sa reaksyon ng antioxidant na may free radical (kInH). Ginagawang posible ng pamamaraang chemiluminescence (CL) na matukoy ang kabuuang dami ng mga radikal na ibinubuklod ng mga antioxidant sa sample (kabuuang kapasidad ng antioxidant, TAU), at kapag ginagamit ang paraan ng pagmomodelo ng matematika ng mga kinetika ng CL, gayundin ang rate ng pagbuo at reaksyon ng mga radikal na may mga antioxidant, ibig sabihin, AOA [ , , ].

Ang pinakakaraniwang pagbabago ng pamamaraan ng chemiluminescent para sa pagtukoy ng kabuuang kapasidad ng antioxidant ay batay sa paggamit ng luminol bilang isang chemiluminescence activator [, , , ]. Ang isang sample ay inilalagay sa cuvette ng chemiluminometer na may pagdaragdag ng luminol, hydrogen peroxide at isang tambalang may kakayahang makabuo ng mga radical bilang resulta ng kusang pagkabulok (thermolysis), halimbawa, 2,2'-azobis-(2-amidinopropane) dihydrochloride (ABAP): ABAP → 2R. Sa pagkakaroon ng molecular oxygen, ang alkyl radical R ay bumubuo ng isang peroxyl radical ROO : R + O 2 → ROO . Dagdag pa, ang peroxyl radical ay nag-oxidize sa chemiluminescent probe luminol (LH 2), at ang luminol radical (LH ) ay nabuo: ROO + LH 2 → ROOH + LH . Mula sa LH, sa pamamagitan ng pagbuo ng mga intermediate (luminol hydroperoxide at luminol endoperoxide), isang molekula ng pangwakas na produkto ng luminol oxidation, aminophthalic acid, ay nabuo sa isang elektronikong nasasabik na estado, na naglalabas ng isang photon, at bilang isang resulta, ang chemiluminescence ay sinusunod. . Ang intensity ng CL ay proporsyonal sa rate ng produksiyon ng photon, na, sa turn, ay proporsyonal sa nakatigil na konsentrasyon ng LH sa system. Ang pakikipag-ugnayan sa mga radikal, ang mga antioxidant ay nakakaabala sa inilarawan na kadena ng mga pagbabago at pinipigilan ang pagbuo ng isang photon.

Ang mga compound na napapailalim sa thermolysis ay hindi lamang ang posibleng pinagmumulan ng mga radical sa pagsusuri ng kapasidad ng antioxidant ng isang sample sa pamamagitan ng pamamaraang chemiluminescent. Ang mga alternatibo ay mga system malunggay peroxidase–hydrogen peroxide [ , ], hemin–hydrogen peroxide, cytochrome Sa–cardiolipin–hydrogen peroxide, atbp. Ang pamamaraan ng mga reaksyon ng luminol na oksihenasyon ng peroxidases ay isinasaalang-alang sa gawain ng Cormier et al. .

Ang CL kinetic curve para sa mga system na ito ay sumasalamin sa dalawang yugto ng reaksyon: ang yugto ng pagtaas ng intensity ng CL at ang yugto ng isang talampas o unti-unting pagbaba ng luminescence, kapag ang intensity ng CL ay pare-pareho o dahan-dahang bumababa. Ang papel ay naglalarawan ng dalawang diskarte sa pagsukat ng kabuuang kapasidad ng antioxidant na isinasaalang-alang ang tampok na ito ng mga kurba. Ang paraan ng TRAP (Total Reactive Antioxidant Potential) ay batay sa pagsukat ng latent period ng CL τ at maaaring magamit upang matukoy ang mga antioxidant tulad ng trolox o ascorbic acid: ang mga ito ay nailalarawan sa pamamagitan ng isang mataas na halaga ng pare-pareho ang rate ng reaksyon sa mga radical at sa kadahilanang ito ay maaaring tawaging malakas na antioxidant. Sa panahon ng tago, nangyayari ang kanilang kumpletong oksihenasyon. Ang pamamaraan ng TAR (Total Antioxidant Reactivity) ay sumusukat sa antas ng pagsusubo ng chemiluminescence q sa talampas o sa maximum ng chemiluminescent curve: formula , kung saan ang I ay ang intensity ng chemiluminescence na walang antioxidant, at ang I 1 ay ang intensity ng CL sa pagkakaroon ng antioxidant. Ang pamamaraang ito ay ginagamit kung ang sistema ay naglalaman ng nakararami mahinang antioxidant na may mababang rate ng mga constant ng pakikipag-ugnayan sa mga radical - mas mababa kumpara sa luminol constant.

Ang pagkilos ng mga antioxidant ay nailalarawan hindi lamang ng mga tagapagpahiwatig τ at q. Tulad ng makikita mula sa [ , ], ang epekto ng mga antioxidant tulad ng uric acid sa hemin–H2O2–luminol o tocopherol system, rutin, at quercetin sa cytochrome Sa–cardiolipin–H 2 O 2 –luminol, na nailalarawan sa pamamagitan ng pagbabago sa pinakamataas na rate ng pagtaas ng CL ( vmax). Tulad ng ipinapakita ng mga resulta ng matematikal na pagmomolde ng mga kinetics, ang mga halaga ng mga constant ng rate ng pakikipag-ugnayan ng mga antioxidant na ito sa mga radical ay malapit sa halaga ng luminol constant, samakatuwid, ang mga naturang antioxidant ay maaaring tawaging medium-strength antioxidants.

Kung ang pinag-aralan na materyal, sa partikular na mga hilaw na materyales ng halaman, ay naglalaman lamang ng isang uri ng mga antioxidant, kung gayon ang kanilang nilalaman ay maaaring mailalarawan sa pamamagitan ng isa sa tatlong mga tagapagpahiwatig na nakalista sa itaas ( τ , q o vmax). Ngunit ang mga hilaw na materyales ng halaman ay naglalaman ng pinaghalong antioxidant na may iba't ibang lakas. Upang malutas ang problemang ito, ginamit ng ilang may-akda [ , , , ] ang pagbabago sa chemiluminescence light sum sa isang tiyak na oras ∆S, na kinakalkula ng formula , kung saan ∆ S0 at ∆ S S- CL light sums para sa isang naibigay na oras t sa mga sample ng kontrol at pagsubok, ayon sa pagkakabanggit. Dapat sapat ang oras para sa oksihenasyon ng lahat ng antioxidant sa system, iyon ay, para maabot ng CL curve ng test sample ang antas ng CL curve ng control sample. Iminumungkahi ng huli na hindi lamang dapat i-record ng mga mananaliksik ang luminescence light sum, ngunit i-record din ang CL kinetics curve para sa isang sapat na mahabang panahon, na hindi palaging ginagawa.

Dahil ang lahat ng sinusukat na indicator ay nakasalalay sa device at mga kondisyon ng pagsukat, ang antioxidant effect ng isang substance sa system na pinag-aaralan ay kadalasang inihahambing sa epekto ng antioxidant na kinuha bilang pamantayan, halimbawa, Trolox [ , ].

Ang malunggay na peroxidase–hydrogen peroxide system ay ginamit upang pag-aralan ang kabuuang kapasidad ng antioxidant ng mga materyales ng halaman ng maraming may-akda. Sa mga gawa [ , ] ang latent period ng CL (TRAP method) ay ginamit upang tantyahin ang dami ng antioxidants sa mga sample, at sa mga gawa [ , , ] ginamit ang lugar sa ilalim ng CL development curve. Gayunpaman, ang mga nakalistang gawa ay hindi nagbibigay ng malinaw na katwiran para sa pagpili ng isa o ibang parameter para sa pagtantya ng TAU.

Ang layunin ng pag-aaral ay upang matukoy kung paano ang ratio ng mga antioxidant ng iba't ibang uri ay nakakaapekto sa TAU, at upang baguhin ang pamamaraan ng chemiluminescence sa paraang mas tumpak na matukoy ang TAU sa mga materyales ng halaman. Upang gawin ito, itinakda namin ang aming sarili ng ilang mga gawain. Una, upang ihambing ang mga kinetika ng CL ng mga pinag-aralan na bagay sa mga kinetika ng karaniwang antioxidant ng tatlong uri (malakas, katamtaman, at mahina) upang maunawaan kung aling uri ng mga antioxidant ang gumagawa ng pangunahing kontribusyon sa TAE ng mga pinag-aralan na bagay. Pangalawa, upang kalkulahin ang RAE ng mga pinag-aralan na bagay sa pamamagitan ng pagsukat ng pagbaba sa CL light sum sa ilalim ng pagkilos ng mga bagay na ito kumpara sa pagkilos ng antioxidant, na nagbibigay ng pinakamalaking kontribusyon sa TAC.

MGA MATERYAL AT PARAAN

Ang mga bagay ng pag-aaral ay mga pang-industriya na sample ng mga prutas ng hawthorn, mountain ash at wild rose na ginawa ng Krasnogorskleksredstva JSC (Russia), pati na rin ang mga prutas ng raspberry na nakolekta ng mga may-akda sa rehiyon ng Moscow sa ilalim ng mga kondisyon ng natural na paglago at tuyo sa temperatura ng 60–80 ° C hanggang sa huminto sila sa pagkuha ng juice at pressure deformations.

Ang mga reagents para sa pagsusuri ng kapasidad ng antioxidant sa pamamagitan ng pamamaraang chemiluminescent ay: KH 2 PO 4, 20 mM buffer solution (pH 7.4); peroxidase mula sa mga ugat ng malunggay (activity 112 U/mg, M = 44 173.9), 1 mM aqueous solution; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahydro-1,4-phthalazinedione, 3-aminophthalic acid hydrazide, M=177.11), 1 mM aqueous solution; hydrogen peroxide (H 2 O 2, M = 34.01), 1 mM may tubig na solusyon; mga solusyon ng antioxidant (ascorbic acid, quercetin, tocopherol). Ang lahat ng mga reagents ay ginawa ng Sigma Aldrich (USA).

Ang mga decoction ng hawthorn, mountain ash at wild rose fruits at isang pagbubuhos ng mga prutas ng raspberry ay inihanda ayon sa pamamaraan ng State Pharmacopoeia ng USSR, na itinakda sa pangkalahatang artikulo ng pharmacopoeial na "Infusions and decoctions".

Ang kabuuang kapasidad ng antioxidant ay natukoy sa pamamagitan ng pagrehistro ng chemiluminescence sa isang Lum-100 chemiluminometer (DISoft, Russia) gamit ang PowerGraph 3.3 software. Upang matukoy ang TAU sa mga materyales ng halaman, 40 µl ng luminol sa konsentrasyon na 1 mM, 40 µl ng malunggay peroxidase sa konsentrasyon na 0.1 µM, mula 10 hanggang 50 µl ng isang decoction o infusion (depende sa konsentrasyon) at phosphate buffer sa halagang kinakailangan upang dalhin ang kabuuang dami ng sample sa 1 ml. Ang cuvette ay na-install sa device at ang CL ay naitala, na nagmamasid sa background signal. Pagkatapos ng 48 segundo ng pagpaparehistro ng background signal, 100 μl ng H2O2 sa isang konsentrasyon ng 1 mM ay idinagdag sa cuvette, at ang pagpaparehistro ng CL ay ipinagpatuloy sa loob ng 10 min. Apat na sample ang inihanda na may iba't ibang konsentrasyon ng bawat isa sa mga bagay ng halaman. Ang CL ay naitala din para sa mga solusyon ng ascorbic acid, quercetin, at tocopherol sa limang magkakaibang konsentrasyon para sa bawat isa sa mga antioxidant. Kasunod nito, ang TAU ng mga sample ng decoctions at infusions ay muling kinalkula para sa quercetin.

Ang mga konsentrasyon ng luminol, malunggay peroxidase, at hydrogen peroxide ay pinili upang matukoy ang kapasidad ng antioxidant ng mga may tubig na katas mula sa mga materyales ng halamang gamot sa isang makatwirang oras (hindi hihigit sa 10 min). Sa panahong ito, ang chemiluminescence curves para sa antioxidants ascorbate at ang flavonoid quercetin (ang pangunahing antioxidants ng mga plant materials) ay umabot sa isang talampas, na nagpahiwatig ng kumpletong pagkasira ng mga antioxidant sa system. Ang mga dilution ng mga pinag-aralan na sample at ang mga konsentrasyon ng mga solusyon ng karaniwang antioxidants (ipinahiwatig sa mga caption sa mga figure) ay pinili sa paraang ang lahat ng CL kinetic curve ay nasusukat sa parehong sensitivity ng instrumento.

Ang kapasidad ng antioxidant ay kinakalkula mula sa pagbabago ng lugar (∆ S) sa ilalim ng kinetic curve ng chemiluminescence (light sum) na may pagdaragdag ng isang substance na naglalaman ng antioxidant. Para dito, binilang namin S0 para sa system na walang antioxidant at ibinawas mula dito ang lugar S S nagpapakilala sa sistema kung saan idinagdag ang antioxidant. ∆ halaga S depende sa sensitivity ng chemiluminometer at mga kondisyon ng pagsukat. Ratio ∆ S/C V(saan C- konsentrasyon ng pinag-aralan na biological na materyal sa cuvette, g/l, at V- volume ng cuvette, l) ay nagpapahayag ng kapasidad ng antioxidant ng 1 g ng pinag-aralan na materyal, ibig sabihin, mga materyales ng halaman.

Ang kapasidad ng antioxidant ∆ S A isang solusyon ng isang karaniwang antioxidant, tulad ng quercetin, na inilagay sa parehong dami ng pinaghalong reaksyon. Ratio ∆ S A/C A V(saan C A- Ang konsentrasyon ng timbang ng antioxidant sa cuvette, g/l) ay nagpapahayag ng kapasidad ng antioxidant ng 1 g ng antioxidant.

Para sa bawat isa sa mga karaniwang antioxidant, ang signal mula sa mga solusyon ng ilang mga konsentrasyon ay naitala upang matiyak na ang mga kalkulasyon ay isinasagawa sa loob ng mga limitasyon ng isang linear na relasyon, at ang mga resulta na nakuha ay maaaring kopyahin. Sa katunayan, nakuha ang isang linear na pag-asa (∆ S A = k A C A) signal mula sa konsentrasyon kung saan kinakalkula ang stoichiometric coefficient k A. Ayon sa pamantayan ng Fisher, ang mga halaga na nakuha para sa mga karaniwang antioxidant k A makabuluhang istatistika na may posibilidad na 0.975. Susunod, ang signal mula sa apat na konsentrasyon ay naitala para sa bawat isa sa apat na sample ng halaman, at para sa lahat ng mga sample ay isang linear na pag-asa ng signal sa konsentrasyon (∆ S = k C), na ginamit upang kalkulahin ang stoichiometric coefficient k. Sa posibilidad na 0.975 (Fischer's test), ang mga k value na nakuha para sa mga sample ng halaman ay makabuluhan sa istatistika. Ang kabuuang kapasidad ng antioxidant ng materyal ng halaman sa mga tuntunin ng bigat ng karaniwang antioxidant (mg%) ay natagpuan gamit ang formula .

Ang mga halaga ay ipinakita bilang arithmetic mean ± standard deviation (M ± δ) sa p

RESULTA NG PAG-AARAL

Pag-aaral ng chemiluminescence kinetics sa pagkakaroon ng sodium ascorbate (Fig. 1. Epekto ng sodium ascorbate sa chemiluminescence kinetics" data-note="Concentrations of system components: luminol - 40 μM, horseradish peroxidase - 4 nM, hydrogen peroxide - 100 μM. Curves: 1 - control sample; 2 - 0.05 µM; 3 - 0.10 µM; 4 - 0.15 µM; 5 - 0.2 µM; 6 - 0.25 µM sodium ascorbate. Ang antioxidant ay nailalarawan sa pamamagitan ng isang latent period kapag ang CL ay halos ganap na pinigilan. ay proporsyonal sa dami ng antioxidant sa system. Kasabay nito, hindi nagbabago ang slope ng CL curves o ang intensity ng CL sa talampas. Ito ay dahil sa katotohanan na ang ascorbic acid ay isang malakas na antioxidant na humaharang sa lahat ng mga radical nabuo sa system, kabilang ang mga luminol radical, at ang CL ay hindi nabubuo hanggang ang lahat ng ascorbate ay na-oxidize.

Ipinakita din ng iba pang mga mananaliksik na ang mga resulta ng pagsusuri ng kemikal at ang halaga ng TAU na tinutukoy ng pamamaraang chemiluminescent ay kadalasang hindi tumutugma. Sa trabaho, ang kabuuang kapasidad ng antioxidant na tinutukoy sa peroxidase–luminol–hydrogen peroxide system ay nauugnay sa nilalaman ng mga triterpene compound. Gayunpaman, sa gawain ng parehong mga may-akda, kung saan ang isa pang halaman ay ang object ng pag-aaral, walang ugnayan ang naobserbahan sa pagitan ng TAU at ang nilalaman ng anumang pangkat ng mga sangkap, kabilang ang mga flavonoid.

Ang mga pagkakaibang ito ay nauugnay sa hindi bababa sa tatlong mga kadahilanan. Una, ang aktibidad ng mga antioxidant ay mahalaga, ibig sabihin, ang rate ng kanilang pakikipag-ugnayan sa mga radical, na naiiba para sa iba't ibang mga antioxidant na bumubuo sa sample ng halaman. Ayon kay Izmailov, ang mga pare-parehong rate ng kaukulang mga reaksyon para sa mexidol, tocopherol at quercetin ay nauugnay bilang 0.04: 2: 60. Pangalawa, ang bawat molekula ng antioxidant, na pumapasok sa isang reaksyong kemikal, ay maaaring humarang ng ibang bilang ng mga radikal. Ayon sa trabaho, ang quercetin, uric at ascorbic acid ay humarang sa 3.6 ± 0.1, 1.4 ± 0.1 at 0.5 ± 0.2 radical bawat reacted antioxidant molecule, ayon sa pagkakabanggit (ginamit ang hemin–H 2 O 2 system – luminol). Pangatlo, ang mga resulta ng pag-aaral ay maaaring maimpluwensyahan ng pagkakaroon ng aktibidad ng peroxidase sa mga sample ng halaman mismo, tulad ng sa trabaho, pati na rin ang pagkakaroon ng calcium sa mga sample, na, tulad ng ipinapakita sa trabaho, ay may kakayahang tumaas. ang aktibidad ng malunggay peroxidase sa ilalim ng ilang mga kundisyon. Karaniwan itong nagdudulot ng mas mataas na intensity ng CL sa talampas kaysa sa mga control curves, na, gayunpaman, hindi namin naobserbahan.

Ang unang kadahilanan ay mahigpit na nililimitahan ang paggamit ng naturang parameter bilang isang pagbabago sa light sum, dahil ang oras ng pagsukat ng chemiluminescence ay dapat na mas mahaba kaysa sa oras ng pagkonsumo ng lahat ng mga antioxidant sa sample ng pagsubok. Ang diskarte ng sandaling ito ay maaaring hatulan lamang sa pamamagitan ng pagsukat ng chemiluminescence kinetics. Bilang karagdagan, ang kontribusyon ng mga mahina na antioxidant sa OAE ay mahigpit na minamaliit, dahil ang oras ng kanilang kumpletong oksihenasyon ay maraming beses na mas mahaba kaysa sa katanggap-tanggap na oras ng pagsukat (10-20 min).

Ang higit na kahalagahan ay ang stoichiometric coefficient ng antioxidant. Bilang ng mga radical n, naharang nito, ay katumbas ng , kung saan ρ - stoichiometric coefficient, at ∆ m- pagbabago sa konsentrasyon ng antioxidant sa panahon ng pagsukat, sa aming kaso - ang paunang konsentrasyon ng sangkap ng pagsubok sa sample ng pagsubok.

Ang pagkakaiba sa liwanag na kabuuan ng glow sa kawalan ng antioxidant at sa presensya nito ay proporsyonal sa n. Ang kabuuang bilang ng mga naharang na radical ay , kung saan ρ i ay ang stoichiometric coefficient ng isang partikular na antioxidant, at m i- konsentrasyon nito sa panahon ng pagsukat. Ang kabuuang bilang ng mga naharang na radikal ay malinaw na hindi katumbas ng kabuuang halaga ng mga antioxidant, dahil ang mga coefficient ρ i ay hindi lamang hindi katumbas ng pagkakaisa, ngunit makabuluhang naiiba din para sa iba't ibang mga antioxidant.

Halaga n ay proporsyonal sa pagkakaiba sa mga magaan na kabuuan na sinusukat sa isang tiyak na oras sa pagitan ng isang sample na naglalaman ng antioxidant at isang control sample na walang mga antioxidant: S = k n, saan k- pare-pareho ang koepisyent sa ilalim ng parehong mga kondisyon ng pagsukat.

Ang pamamaraan na isinasaalang-alang sa artikulo ay nagbibigay-daan sa pagtukoy ng kabuuang kapasidad ng antioxidant, habang ang pagsusuri ng kemikal ay nagpapahintulot sa pagtukoy ng kabuuang nilalaman ng mga antioxidant sa produkto. Samakatuwid, ang pamamaraan ng chemiluminescence ay tila mas nagbibigay-kaalaman kaysa sa mga pagsusuri sa kemikal.

Ang mga kundisyon na napili namin para sa pagtatasa ng kabuuang kapasidad ng antioxidant ng mga hilaw na materyales ng halaman sa pamamagitan ng pagtatala ng mga kinetics ng chemiluminescence sa isang sistema na binubuo ng malunggay peroxidase, hydrogen peroxide at luminol (mga konsentrasyon ng bahagi ay 4 nM, 100 μM at 40 μM, ayon sa pagkakabanggit; 20 mM phosphate buffer, pH 7.4), nagbigay ng oksihenasyon ng malalakas na antioxidant (ascorbic acid) at katamtamang antioxidant (quercetin) sa loob ng 10 min. Ang tagal ng pagsukat na ito ay maginhawa at tinitiyak ang kinakailangang kalidad ng mga sukat.

Ang isang pagsusuri ng chemiluminescence kinetics ay nagpakita na sa mga pinag-aralan na bagay (decoctions ng rowan, wild rose, hawthorn fruits at raspberry fruit infusion), ang pangunahing antioxidants ay medium-strength antioxidants, kabilang ang flavonoids, at weak-strength antioxidants (tocopherol, atbp. ). Batay sa pagbaba sa chemiluminescence light sum, ang kabuuang kapasidad ng antioxidant para sa mga pinag-aralan na bagay ay kinakalkula. Ang paghahambing ng nakuha na mga halaga ng TAU sa mga resulta ng pagsusuri ng kemikal ay nagpakita na ang mga produktong naglalaman ng parehong dami ng antioxidant na may iba't ibang mga ratio ay maaaring magkaiba sa kanilang kakayahang epektibong maprotektahan ang katawan mula sa mga nakakapinsalang epekto ng mga libreng radical. Ang inilarawan na pamamaraan ay nangangako para sa pag-aaral ng mga bagay ng halaman na naglalaman ng pinaghalong iba't ibang antioxidant. Kasabay nito, ito ay nailalarawan sa pagiging simple at mababang halaga ng pananaliksik. Ang pagsasama-sama ng pagsukat ng chemiluminescence kinetics na may matematikal na pagmomodelo ng mga reaksyon ay hindi lamang mag-automate sa proseso ng pagtukoy sa TAU, ngunit matutukoy din ang kontribusyon ng mga indibidwal na grupo ng mga antioxidant sa indicator.

graduate na trabaho

1.4 Mga pamamaraan ng pananaliksik para sa mga antioxidant

ang aktibidad ng antioxidant ay inuri: ayon sa mga pamamaraan ng pagpaparehistro ng ipinahayag na AOA (volumetric, photometric, chemiluminescent, fluorescent, electrochemical); ayon sa uri ng pinagmulan ng oksihenasyon; sa pamamagitan ng uri ng oxidized compound; ayon sa paraan ng pagsukat ng oxidized compound.

Gayunpaman, ang pinakakilalang mga pamamaraan para sa pagtukoy ng aktibidad ng antioxidant ay:

1 TEAC (trolox equivalent antioxidant capacity): ang pamamaraan ay batay sa sumusunod na reaksyon:

Metmyoglobin + H 2 O 2 > Ferrylglobin + ABTS > ABTS * + AO.

Ang Trolox Equivalence Method (TEAC) ay batay sa kakayahan ng mga antioxidant na bawasan ang 2,2-azinobis radical cations (ABTS) at sa gayo'y pinipigilan ang pagsipsip sa mahabang wavelength na bahagi ng spectrum (600 nm). Ang isang makabuluhang kawalan ng pamamaraan ay ang dalawang yugto ng reaksyon ng pagkuha ng isang radikal. Pinapahaba nito ang oras ng pagsusuri at maaaring dagdagan ang scatter ng mga resulta, sa kabila ng katotohanan na ang isang standardized na set ng mga reagents ay ginagamit para sa pagsusuri.

2 FRAP (ferric reducing antioxidant power): ang pamamaraan ay batay sa sumusunod na reaksyon:

Fe(III)-Tripyridyltriazine+AO>Fe(II)-Tripyridyltriazine.

Ang kapasidad ng pagbabawas ng bakal/antioxidant (FRAP). Dito, ginagamit ang pagbabawas ng reaksyon ng Fe(III)-tripyridyltriazine sa Fe(II)-tripyridyltriazine. Gayunpaman, hindi matukoy ng pamamaraang ito ang ilang antioxidant, tulad ng glutathione. Ang pamamaraang ito ay nagbibigay-daan sa direktang pagtukoy ng mababang molekular na timbang na antioxidant. Sa mababang pH, ang pagbawas ng Fe(III) tripyridyltriazine complex sa Fe(II) complex ay sinamahan ng hitsura ng isang matinding asul na kulay. Ang mga sukat ay batay sa kakayahan ng mga antioxidant na sugpuin ang oxidative na epekto ng mga particle ng reaksyon na nabuo sa pinaghalong reaksyon. Ang pamamaraang ito ay simple, mabilis at mababang gastos sa pagpapatupad.

3 ORAC (oxygen radical absorbance capacity): ang pamamaraan ay batay sa sumusunod na reaksyon:

Fe (II) + H 2 O 2 > Fe (III) + OH * + AO> OH * + Luminol.

Pagpapasiya ng kakayahang sumipsip ng mga radikal na oxygen (ORAC). Sa pamamaraang ito, ang fluorescence ng substrate (phycoerythrin o fluorescein) ay naitala, na nangyayari bilang isang resulta ng pakikipag-ugnayan nito sa ROS. Kung mayroong mga antioxidant sa sample ng pagsubok, ang pagbaba ng fluorescence ay sinusunod kumpara sa control sample. Ang pamamaraang ito ay orihinal na binuo ni Dr. Guohua Cao sa National Institute of Aging noong 1992. Noong 1996, sumali si Dr. Cao kay Dr. Ronald Pryer sa isang pinagsamang grupo sa USDA Research Center for Aging, kung saan ang isang semi-automated na pamamaraan ay umunlad.

4 TRAP (kabuuang radical trapping antioxidant parameter): ang pamamaraan ay batay sa sumusunod na reaksyon:

AAPH+AO>AAPH* + PL (PE).

Ginagamit ng pamamaraang ito ang kakayahan ng mga antioxidant na makipag-ugnayan sa peroxyl radical 2,2-azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride (AAPH). Ang mga pagbabago sa TRAP ay binubuo ng mga pamamaraan para sa pagrerehistro ng isang analytical signal. Kadalasan, sa huling yugto ng pagsusuri, ang AAPH peroxy radical ay nakikipag-ugnayan sa isang luminescent (luminol), fluorescent (dichlorofluorescein diacetate, DCFH-DA), o iba pang optically active substrate.

Ang water-soluble vitamin E derivative na Trolox (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxy acid) ay ginagamit bilang pamantayan para sa TEAC, ORAC at TRAP na pamamaraan.

Kamakailan lamang, ang interes sa paggamit ng mga pamamaraan ng electrochemical ay tumaas para sa pagsusuri ng aktibidad ng antioxidant. Ang mga pamamaraan na ito ay lubos na sensitibo at mabilis na pagsusuri.

Ang pagsusuri ng aktibidad ng antioxidant ng ilang mga produktong pagkain ay isinasagawa sa pamamagitan ng paraan ng potentiometry, batay sa paggamit ng ari-arian ng mga antioxidant na sangkap upang lumahok sa mga reaksyon ng redox dahil sa mga enol (-OH) at sulfhydryl (-SH) na mga grupo.

Ang pagpapasiya ng mga katangian ng antioxidant ng mga solusyon ay batay sa pakikipag-ugnayan ng kemikal ng mga antioxidant sa sistema ng tagapamagitan, na humahantong sa isang pagbabago sa potensyal na redox nito. Ang electrochemical cell ay isang lalagyan na naglalaman ng K-Na-phosphate buffer solution, isang mediator system na Fe(III)/Fe(II) at isang complex electrode bago sukatin ang redox potential. Ang aktibidad ng antioxidant ay tinatantya sa g-eq/L.

Ang paraan ng amperometric para sa pagtukoy ng aktibidad ng antioxidant ay batay sa pagsukat ng electric current na nangyayari sa panahon ng oksihenasyon ng test substance sa ibabaw ng working electrode, na nasa ilalim ng isang tiyak na potensyal. Ang sensitivity ng amperometric na paraan ay tinutukoy kapwa sa pamamagitan ng likas na katangian ng gumaganang elektrod at sa pamamagitan ng potensyal na inilapat dito. Ang limitasyon ng pagtuklas ng amperometric detector ng polyphenols, flavonoids sa antas ng nano-picograms, sa mababang konsentrasyon, mayroong isang mas mababang posibilidad ng magkaparehong impluwensya ng iba't ibang mga antioxidant sa kanilang magkasanib na presensya, lalo na, ang pagpapakita ng kababalaghan ng synergism . Ang mga disadvantages ng pamamaraan ay kinabibilangan ng pagtitiyak nito: sa ilalim ng mga kundisyong ito, ang mga antioxidant na ang kanilang mga sarili ay na-oxidized o nabawasan sa rehiyon ng mga potensyal na electroreduction ng oxygen ay hindi maaaring masuri. Ang mga bentahe ng pamamaraan ay kinabibilangan ng mabilis, prostate at sensitivity.

Galvanostatic coulometry method gamit ang electrogenerated oxidants - ang paraan ay naaangkop sa pagsusuri ng fat-soluble antioxidants.

Ang iba't ibang mga pamamaraan ay binuo para sa pagpapasiya ng ascorbic acid:

isang amperometric na paraan gamit ang isang aluminum electrode na binago ng isang film ng nickel(II) hexacyanoferrate sa pamamagitan ng isang simpleng paraan ng paglulubog ng solusyon;

isang paraan para sa solid-phase spectrophotometric at visual test na pagtukoy ng ascorbic acid gamit ang silicic acid xerogel na binago gamit ang Wawel's reagent at copper (II) bilang indicator powder;

Ang pagtukoy ng chemiluminescent ng ascorbic acid ay maaaring isagawa sa pamamagitan ng paraan ng pag-agos-injection ayon sa reaksyon ng chemiluminescent ng rhodamine B na may cerium (IV) sa isang daluyan ng sulfuric acid.

pagpapasiya ng ascorbic acid sa hanay na 10 -8 -10 -3 g/cm 3 sa pamamagitan ng anodic voltammetry sa may tubig at may tubig-organic na media.

Ang pinakakaraniwan ay ang paraan ng FRAP, dahil ito ay express, lubhang sensitibo. Sa nakalipas na ilang dekada, isang malaking bilang ng mga uri ng mga pamamaraan para sa pagtukoy ng aktibidad ng antioxidant sa pamamagitan ng paraan ng FRAP ay binuo (talahanayan 1).

Talahanayan 1 Pag-unlad ng pamamaraan ng FRAP at ang paggamit nito upang matukoy ang aktibidad ng antioxidant ng iba't ibang mga bagay

	Mga bagay ng pagsusuri	Mga Tala
	dugong plasma	t=4min. Ang reaksyon stoichiometry at additivity ay pinag-aralan.
	Tsaa, alak	Pagpapasiya ng AOA dahil sa polyphenols
		Ang mga halaga ng AOA ng iba't ibang uri ng tsaa ay inihambing
Pulido, Bravo, Saura-Calixto	Mga solusyon sa modelo	t=30min. Ang impluwensya ng non-aqueous solvent ay ipinahayag
	Mga halaman
	dugo, tissue	Paraan ng PIA. Sinuri ang impluwensya ng mga dayuhang sangkap.
Firuzi, Lacanna, Petrucci e.a.	Mga solusyon sa modelo	Ang sensitivity ng pagpapasiya ng iba't ibang mga AO bilang isang function ng kanilang istraktura at potensyal na redox ay pinag-aralan.
Katalinic, Milos,	Iba't ibang alak
Temerdashev, Tsyupko at iba pa.	Mga pinaghalong modelo
Loginova, Konovalova	Mga gamot. Mga paghahanda	paraan ng pagsubok
Temerdashev, Tsyupko at iba pa.	Mga pulang tuyong alak	Kaugnayan ng AOA sa iba pang mga tagapagpahiwatig ng kalidad ng alak
Nagpatuloy ang talahanayan 1
	Mga pinaghalong modelo	Ang sensitivity ng pagpapasiya ng iba't ibang AO
Vershinin, Vlasova, Tsyupko	Mga pinaghalong modelo	Ang non-additivity ng signal na may kakulangan ng isang oxidizing agent ay ipinahayag
Anisimovich, Deineka at iba pa.	Mga solusyon sa modelo	Ang mga kinetic na parameter para sa pagtatantya ng AOA ay iminungkahi.

Mga Tala: karaniwang may label: PIA-flow-injection analysis, TPTZ-tripyridyltriazine, DIP-2,2, -dipyridyl, PHEN-o-phenanthroline, DPA-pyridinedicarboxylic acid, FZ-ferrozine, AA-ascorbic acid, CT-catechol, t - oras ng pagkakalantad, min.

Pakikipag-ugnayan sa pagitan ng mga protina at polyelectrolytes sa mga may tubig na solusyon

Ang iba't ibang paraan ng pagsusuri ay ginagamit upang makilala ang mga protina-polyelectrolyte complex. Ang mga instrumental na pamamaraan ay nagbibigay ng impormasyon sa istruktura at optical na mga katangian, pati na rin ang pagtukoy sa dynamics at likas na katangian ng PEC binding...

Epekto ng d-Metal Compounds sa Rate ng Dissociation ng isang Water Molecule sa isang Bipolar Membrane

Sa proseso ng pag-synthesize ng mga bagong BPM, maraming pansin ang dapat bayaran sa pag-aaral ng mga katangian ng nakuha na mga sample para sa kasunod na pagpili ng mga kondisyon ng synthesis na matiyak ang pagpapabuti ng mga electrochemical na katangian ng mga synthesized na lamad...

Mga gamot na taga-disenyo at mga sintetikong cannabinoid

Ang pagtuklas ng mga sintetikong cannabinoids sa mga herbal mixture ay maaaring isagawa sa pamamagitan ng iba't ibang pamamaraan ng physicochemical, tulad ng gas chromatography-mass spectrometry, gas, thin layer at high performance liquid chromatography ...

Pagbuo ng isang paraan para sa pagtukoy ng mga flavonoid sa mga materyales ng halamang gamot

Synthesis at pharmacological properties ng quinolinones-2

Layunin ng pag-aaral: Quinolinone-2. Paraan ng pananaliksik: Gamit ang computer program na "Marvin JS", nilikha ang istraktura ng sangkap. Susunod, ipinadala siya sa site na "http://www.way2drug.com/PASSOnline/predict.php" para sa karagdagang imbestigasyon...

Paraan ng Thermospectral para sa Pag-aaral ng Mga Produkto ng Pagsingaw ng isang Epoxy Polymer

Teknolohiya para sa pagkuha ng mataas na purified chitosan mula sa crustacean shell

Pagpapasiya ng molekular na bigat ng chitosan Ang molekular na bigat ng chitosan ay natukoy sa viscometrically ayon sa karaniwang pamamaraan. Ang mga solusyon na may konsentrasyon na 0.05 at 0.5 g / dl ay inihanda sa pamamagitan ng pagtunaw ng isang tinimbang na bahagi ng polymer powder sa isang acetate buffer (0...

Mga katangiang pisikal at heograpikal ng teritoryo ng natural na parke

Mga keyword

libreng radikal/antioxidant/ aktibidad ng antioxidant / kabuuang kapasidad ng antioxidant / chemiluminescence/ luminol / libreng radical / antioxidant / aktibidad ng antioxidant / kabuuang kapasidad ng antioxidant / chemiluminescence / luminol

anotasyon artikulong siyentipiko sa mga agham ng kemikal, may-akda ng artikulong siyentipiko - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Ang mga halamang gamot na materyales ay isa sa mga pinagmumulan ng mga antioxidant para sa katawan ng tao. Kabilang sa mga pamamaraan para sa pagtukoy ng nilalaman ng mga antioxidant sa mga bagay ng halaman, ang paraan ng pagsusuri ng chemiluminescent ay laganap. Sa kasalukuyang gawain, ginamit ito sa pagtatantya kabuuang kapasidad ng antioxidant(OAU) decoctions ng rowan, wild rose at hawthorn fruits at pagbubuhos ng raspberry fruits. Ang mga kinetics ay naitala sa eksperimento chemiluminescence sa isang sistema na binubuo ng malunggay peroxidase, hydrogen peroxide at luminol. Ang mga konsentrasyon at dami ng mga bahagi ng system sa sample ay pinili upang ang malakas na antioxidant (ascorbic acid) at katamtamang malakas na antioxidant (quercetin) ay ganap na na-oxidized sa oras ng pagsukat (10 min). Ang isang paraan para sa pagkalkula ng TAU batay sa isang pagbabago sa magaan na kabuuan ay iminungkahi at makatwiran. chemiluminescence sa pagkakaroon ng mga sample ng halaman. Kinetic analysis chemiluminescence ay nagpakita na sa mga pinag-aralan na bagay, nangingibabaw ang mga antioxidant na may katamtamang lakas, kabilang ang mga flavonoid, at mahinang antioxidant (tocopherol, atbp.). Ang paghahambing ng mga kinakalkula na halaga ng TAU para sa mga pinag-aralan na bagay at ang data ng kanilang pagsusuri sa kemikal ay nagpakita na ang mga produktong naglalaman ng parehong dami ng antioxidant na may iba't ibang mga ratio ayon sa mga uri ay maaaring magkaiba sa kanilang kakayahang protektahan ang katawan mula sa mga nakakapinsalang epekto ng mga libreng radikal. Ang inilarawan na pamamaraan ay nangangako para sa pag-aaral ng mga bagay ng halaman na naglalaman ng pinaghalong antioxidant ng iba't ibang uri.

Mga Kaugnay na Paksa mga siyentipikong papel sa mga agham ng kemikal, may-akda ng siyentipikong papel - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

2016 / Georgiy Vladimirov, Sergunova E.V., Izmaylov D.Yu., Vladimirov Yu.A.
Pagpapasiya ng mga antioxidant sa pamamagitan ng activated chemiluminescence gamit ang 2,2"-azo-bis(2-amidinopropane)
2012 / Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.
Antioxidant action ng dihydroquercetin at rutin sa peroxidase reactions catalyzed by cytochrome c
2008 / Demin E.M., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.
Pagsusuri ng oxidative at antioxidant na kapasidad ng mga biological substrates sa pamamagitan ng chemiluminescence na sapilitan ng reaksyon ng Fenton
2016 / Piskarev Igor Mikhailovich, I.P. Ivanova
Pagpapasiya ng nilalaman ng lipohydroperoxide sa serum lipoprotein ng dugo gamit ang microperoxidase-luminol system
2011 / Teselkin Yuri Olegovich, Babenkova Irina Vladimirovna
Mga pamamaraan para sa pag-aaral ng mga antioxidant
2004 / Khasanov V. V., Ryzhova G. L., Maltseva E. V.
Antioxidant aktibidad ng mga halaman na ginagamit sa ethnomedicine ng Tuva
2012 / Chekhani N.R., Teselkin Yu.O., Pavlova L.A., Kozin S.V., Lyubitsky O.B.
Pag-aaral ng mga katangian ng antioxidant ng Fosprenil sa iba't ibang mga biological test system
2017 / A. V. Sanin, A. N. Narovlyansky, A. V. Pronin, T. N. Kozhevnikova, V. Yu. Sanina, A. D. Agafonova
Epekto ng iba't ibang dosis ng polychlorinated biphenyls sa estado ng spontaneous at immunoglobulin-induced luminol-dependent chemiluminescence ng buong dugo
2016 / Gabdulkhakova I.R., Kayumova A.F., Samohodova O.V.
Pagsusuri ng sistema ng lipid peroxidation ng proteksyon ng antioxidant sa mga bata na may mahahalagang arterial hypertension gamit ang spectrophotometry at chemiluminescence
2014 / Natyaganova Larisa Viktorovna, Gavrilova Oksana Aleksandrovna, Kolesnikova Larisa Romanovna

Chemiluminescent na pagpapasiya ng kabuuang kapasidad ng antioxidant sa materyal ng halamang gamot

Ang materyal na halamang gamot ay isa sa mga pinagmumulan ng mga antioxidant para sa katawan ng tao. Ang pagsusuri ng chemiluminescence ay isa sa mga karaniwang pamamaraan ng pagtukoy ng nilalaman ng mga antioxidant sa mga materyales ng halaman. Sa aming trabaho, ginamit ang pagsusuri ng chemiluminescence upang matukoy ang kabuuang kapasidad ng antioxidant (TAC) ng mga decoction ng prutas ng mountain-ash, rose at hawthorn, pati na rin ang pagbubuhos ng raspberry fruit. Itinatag ng mga eksperimento ang kinetics ng chemiluminescence ng isang system na binubuo ng horseradish peroxidase, hydrogen peroxide at luminol . Ang mga konsentrasyon at dami ng mga bahagi ng system ay pinili upang ang mga malakas na antioxidant (ascorbic acid) at mga antioxidant ng average na puwersa (quercetin) ay ganap na na-oxidized sa panahon ng pagsukat (10 minuto). Ang isang paraan para sa pagkalkula ng TAC batay sa mga pagbabago sa chemiluminescence light sum sa pagkakaroon ng mga sample ng halaman ay iminungkahi at napatunayan. Ang pagsusuri ng chemiluminescence kinetics ay nagpakita na ang mga antioxidant ng average na puwersa ay nangingibabaw sa mga bagay na pinag-aralan, kabilang ang mga flavonoid at mahinang antioxidant (tocopherol at iba pa). Ang paghahambing ng mga kinakalkula na halaga ng TAC para sa mga bagay na pinag-aaralan at ang kanilang data sa pagsusuri ng kemikal ay nagpakita na ang mga produktong naglalaman ng parehong dami ng antioxidant na may iba't ibang ratio ng antioxidant ayon sa mga uri ay maaaring mag-iba sa kanilang kakayahang protektahan ang katawan laban sa mga nakakapinsalang epekto ng mga libreng radikal. . Ang pamamaraan na inilarawan ay isang maaasahan para sa pag-aaral ng mga bagay ng halaman na naglalaman ng pinaghalong iba't ibang uri ng antioxidants.

Ang teksto ng gawaing siyentipiko sa paksang "Chemiluminescent method para sa pagtukoy ng kabuuang kapasidad ng antioxidant sa mga materyales ng halamang gamot"

pamamaraan ng chemiluminescent para sa pagtukoy ng kabuuang kapasidad ng antioxidant sa mga materyales ng halamang gamot

G. K. Vladimirov1^, E. V. Sergunova2, D. Yu. Izmailov1, Yu. A. Vladimirov1

1 Department of Medical Biophysics, Faculty of Fundamental Medicine, Lomonosov Moscow State University, Moscow

2 Department of Pharmacognosy, Faculty of Pharmacy,

I. M. Sechenov Unang Moscow State Medical University, Moscow

Ang mga halamang gamot na materyales ay isa sa mga pinagmumulan ng mga antioxidant para sa katawan ng tao. Kabilang sa mga pamamaraan para sa pagtukoy ng nilalaman ng mga antioxidant sa mga bagay ng halaman, ang paraan ng pagsusuri ng chemiluminescence ay laganap. Sa kasalukuyang gawain, ginamit ito upang masuri ang kabuuang kapasidad ng antioxidant (TOA) ng mga decoction ng rowan, wild rose, at hawthorn fruits at raspberry fruit infusion. Sa eksperimento, ang kinetics ng chemiluminescence ay naitala sa isang sistema na binubuo ng malunggay peroxidase, hydrogen peroxide, at luminol. Ang mga konsentrasyon at dami ng mga bahagi ng system sa sample ay pinili upang ang malakas na antioxidant (ascorbic acid) at katamtamang malakas na antioxidant (quercetin) ay ganap na na-oxidized sa oras ng pagsukat (10 min). Ang isang paraan para sa pagkalkula ng RAE batay sa pagbabago sa chemiluminescence light sum sa pagkakaroon ng mga sample ng halaman ay iminungkahi at pinatutunayan. Ang isang pagsusuri sa chemiluminescence kinetics ay nagpakita na ang mga katamtamang malakas na antioxidant, kabilang ang mga flavonoid, at mahinang antioxidant (tocopherol, atbp.) ay nangingibabaw sa mga pinag-aralan na bagay. Ang paghahambing ng mga kinakalkula na halaga ng TAU para sa mga pinag-aralan na bagay at ang data ng kanilang pagsusuri sa kemikal ay nagpakita na ang mga produktong naglalaman ng parehong dami ng antioxidant na may iba't ibang mga ratio ayon sa mga uri ay maaaring magkaiba sa kanilang kakayahang protektahan ang katawan mula sa mga nakakapinsalang epekto ng mga libreng radikal. Ang inilarawan na pamamaraan ay nangangako para sa pag-aaral ng mga bagay ng halaman na naglalaman ng pinaghalong antioxidant ng iba't ibang uri.

Mga keyword: libreng radikal, antioxidant, aktibidad ng antioxidant, kabuuang kapasidad ng antioxidant, chemiluminescence, luminol

Pagpopondo: Ang gawain ay suportado ng Russian Science Foundation, grant No. 14-15-00375.

Dapat matugunan ang Ex3 Correspondence: Georgy Konstantinovich Vladimirov

119192, Moscow, Lomonosovsky pr-t, 31, gusali 5; [email protected]

Natanggap ang artikulo: 03/10/2016 Tinanggap ang artikulo para sa publikasyon: 03/18/2016

chemiluminescent na pagpapasiya ng kabuuang kapasidad ng antioxidant sa materyal ng halamang gamot

1 Department of Medical Biophysics, Faculty of Fundamental Medicine, Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russia

2 Department of Pharmacognosy, Faculty of Pharmacy,

Ang Unang Sechenov Moscow State Medical University, Moscow, Russia

Ang materyal na halamang gamot ay isa sa mga pinagmumulan ng mga antioxidant para sa katawan ng tao. Ang pagsusuri ng chemiluminescence ay isa sa mga karaniwang pamamaraan ng pagtukoy ng nilalaman ng mga antioxidant sa mga materyales ng halaman. Sa aming trabaho, ginamit ang pagsusuri ng chemiluminescence upang matukoy ang kabuuang kapasidad ng antioxidant (TAC) ng mga decoction ng prutas ng mountain-ash, rose at hawthorn, pati na rin ang pagbubuhos ng raspberry fruit. Itinatag ng mga eksperimento ang kinetics ng chemiluminescence ng isang system na binubuo ng horseradish peroxidase, hydrogen peroxide at luminol. Ang mga konsentrasyon at dami ng mga bahagi ng system ay pinili upang ang mga malakas na antioxidant (ascorbic acid) at mga antioxidant ng average na puwersa (quercetin) ay ganap na na-oxidized sa panahon ng pagsukat (10 minuto). Ang isang paraan para sa pagkalkula ng TAC batay sa mga pagbabago sa chemiluminescence light sum sa pagkakaroon ng mga sample ng halaman ay iminungkahi at napatunayan. Ang pagsusuri ng chemiluminescence kinetics ay nagpakita na ang mga antioxidant ng average na puwersa ay nangingibabaw sa mga bagay na pinag-aralan, kabilang ang mga flavonoid at mahinang antioxidant (tocopherol at iba pa). Ang paghahambing ng mga kinakalkula na halaga ng TAC para sa mga bagay na pinag-aaralan at ang kanilang data sa pagsusuri ng kemikal ay nagpakita na ang mga produktong naglalaman ng parehong dami ng antioxidant na may iba't ibang ratio ng antioxidant ayon sa mga uri ay maaaring mag-iba sa kanilang kakayahang protektahan ang katawan laban sa mga nakakapinsalang epekto ng mga libreng radikal. . Ang pamamaraan na inilarawan ay isang maaasahan para sa pag-aaral ng mga bagay ng halaman na naglalaman ng pinaghalong iba't ibang uri ng antioxidants.

Mga keyword: libreng radikal, antioxidant, aktibidad ng antioxidant, kabuuang kapasidad ng antioxidant, chemiluminescence, luminol

Pagpopondo: ang gawaing ito ay suportado ng Russian Science Foundation, grant no. 14-15-00375.

Mga Pasasalamat: pinasasalamatan ng mga may-akda si Andrey Alekseev mula sa Lomonosov Moscow State University para sa kanyang tulong sa pagsasagawa ng eksperimento. Dapat matugunan ang sulat: George Vladimirov

Lomonosovskiy prospekt, d. 31, k. 5, Moscow, Russia, 119192; [email protected] Natanggap: 03/10/2016 Tinanggap: 03/18/2016

Ang mga libreng radikal na nabuo sa katawan ay nakakagambala sa istraktura ng mga lamad ng cell, na, naman, ay humahantong sa pag-unlad ng iba't ibang mga kondisyon ng pathological. Ang mapanirang oxidative na epekto ng mga radical ay pinipigilan ng antioxidant defense system ng katawan, kung saan ang mababang molekular na timbang na mga compound - mga radical scavengers (traps) ay may mahalagang papel. Ang isa sa mga mapagkukunan ng mga antioxidant ay ang mga hilaw na materyales ng halamang gamot, pati na rin ang mga paghahanda batay dito, ang pag-aaral ng potensyal na antioxidant na nakakatulong upang madagdagan ang kanilang pang-iwas at therapeutic effect.

Ang mga pangunahing pamamaraan para sa pagtukoy ng mga antioxidant ay isinasaalang-alang sa mga gawa, gayunpaman, ang kahulugan ng mga antioxidant bilang mga compound ng kemikal ay hindi nagbibigay ng kumpletong larawan ng mga proteksiyon na katangian ng bagay na pinag-aaralan: natutukoy sila hindi lamang sa dami ng isa o ibang antioxidant. , ngunit sa pamamagitan din ng aktibidad ng bawat isa sa kanila. Antioxidant activity, o antioxidant activity, AOA, ay ang rate constant para sa reaksyon ng antioxidant na may free radical (kInH). Ang pamamaraan ng chemiluminescence (CL) ay ginagawang posible upang matukoy ang kabuuang dami ng mga radikal na ibinubuklod ng mga antioxidant sa sample (kabuuang kapasidad ng antioxidant, TAU), at kapag ginagamit ang pamamaraan ng matematikal na pagmomolde ng CL kinetics, gayundin ang rate ng pagbuo at reaksyon ng mga radikal na may mga antioxidant, i.e. AOA.

Ang pinakakaraniwang pagbabago ng pamamaraan ng chemiluminescent para sa pagtukoy ng kabuuang kapasidad ng antioxidant ay batay sa paggamit ng luminol bilang isang activator ng chemiluminescence. Ang isang sample ay inilalagay sa cuvette ng chemiluminometer na may pagdaragdag ng luminol, hydrogen peroxide, at isang tambalang may kakayahang makabuo ng mga radikal bilang resulta ng kusang pagkabulok (thermolysis), halimbawa, 2,2"-azobis-(2-amidinopropane). ) dihydrochloride (ABAP):

Sa pagkakaroon ng molecular oxygen, ang alkyl radical R^ ay bumubuo ng peroxyl radical ROO^:

ROO^ + LH2 ^ ROOH + LHv Mula sa LH, sa pamamagitan ng pagbuo ng mga intermediate substance (luminol hydroperoxide at luminol endoperoxide), isang molecule ng end product ng luminol oxidation, aminophthalic acid, ay nabuo sa isang electronically excited state, na naglalabas ng photon , at bilang isang resulta, ang chemiluminescence ay sinusunod. Ang intensity ng CL ay proporsyonal sa rate ng produksiyon ng photon, na, sa turn, ay proporsyonal sa nakatigil na konsentrasyon ng LH sa system. Ang pakikipag-ugnayan sa mga radikal, ang mga antioxidant ay nakakaabala sa inilarawan na kadena ng mga pagbabago at pinipigilan ang pagbuo ng isang photon.

Ang mga compound na napapailalim sa thermolysis ay hindi lamang ang posibleng pinagmumulan ng mga radical sa pagsusuri ng kapasidad ng antioxidant ng isang sample sa pamamagitan ng pamamaraang chemiluminescent. Ang mga alternatibo ay ang mga system malunggay peroxidase-hydrogen peroxide, hemin-hydrogen peroxide, cytochrome c-cardiolipin-hydrogen peroxide, atbp. Ang scheme ng mga reaksyon ng luminol oxidation sa pamamagitan ng peroxidases ay isinasaalang-alang sa gawain ng Cormier et al. .

Ang CL kinetic curves para sa mga sistemang ito ay sumasalamin sa dalawang yugto ng reaksyon: ang yugto ng pagtaas ng intensity ng CL at ang yugto ng isang talampas o unti-unting pagbaba ng luminescence, kapag

Ang intensity ng CL ay pare-pareho o dahan-dahang bumababa. Ang papel ay naglalarawan ng dalawang diskarte sa pagsukat ng kabuuang kapasidad ng antioxidant na isinasaalang-alang ang tampok na ito ng mga kurba. Ang pamamaraan ng TRAP (Total Reactive Antioxidant Potential) ay batay sa pagsukat ng CL latency t at maaaring gamitin upang matukoy ang mga anti-oxidant tulad ng trolox o ascorbic acid: ang mga ito ay nailalarawan sa pamamagitan ng mataas na rate ng reaksyon na pare-pareho sa mga radical at sa kadahilanang ito ay maaaring tinatawag na malakas na antioxidant. . Sa panahon ng tago, nangyayari ang kanilang kumpletong oksihenasyon. Ang pamamaraan ng TAR (Total Antioxidant Reactivity) ay sumusukat sa antas ng pagsusubo ng chemiluminescence q sa talampas o sa maximum ng chemiluminescent curve:

kung saan ang I ay ang intensity ng chemiluminescence na walang antioxidant, at ang 11 ay ang intensity ng CL sa pagkakaroon ng antioxidant. Ang pamamaraang ito ay ginagamit kung ang sistema ay naglalaman ng nakararami mahinang antioxidant na may mababang rate ng mga constant ng pakikipag-ugnayan sa mga radical - mas mababa kumpara sa luminol constant.

Ang pagkilos ng mga antioxidant ay nailalarawan hindi lamang ng mga tagapagpahiwatig ng t at c. Tulad ng makikita mula sa mga gawa, ang pagkilos ng mga antioxidant tulad ng uric acid sa hemin-H202-luminol system o tocopherol, rutin at quercetin sa cytochrome c-cardiolipin-H202-luminol system ay nailalarawan sa pamamagitan ng pagbabago sa maximum na rate. ng pagtaas ng CL (utx). Tulad ng ipinapakita ng mga resulta ng matematikal na pagmomolde ng mga kinetics, ang mga halaga ng mga constant ng rate ng pakikipag-ugnayan ng mga antioxidant na ito sa mga radical ay malapit sa halaga ng luminol constant, samakatuwid, ang mga naturang antioxidant ay maaaring tawaging medium-strength antioxidants.

Kung ang pinag-aralan na materyal, sa partikular na mga hilaw na materyales ng halaman, ay naglalaman lamang ng isang uri ng antioxidant, kung gayon ang kanilang nilalaman ay maaaring mailalarawan sa pamamagitan ng isa sa tatlong mga tagapagpahiwatig na nakalista sa itaas (m, q, o V). Ngunit ang mga hilaw na materyales ng halaman ay naglalaman ng pinaghalong antioxidant na may iba't ibang lakas. Upang lutasin ang problemang ito, ginamit ng ilang may-akda ang pagbabago sa chemiluminescence light sum sa isang partikular na DE time, na kinakalkula ng formula

DE = DE0 - DE,

kung saan ang DE0 at DE5 ay CL light sums para sa isang naibigay na oras? sa mga sample ng kontrol at pagsubok, ayon sa pagkakabanggit. Dapat sapat ang oras para sa oksihenasyon ng lahat ng antioxidant sa system, iyon ay, para maabot ng CL curve ng test sample ang antas ng CL curve ng control sample. Iminumungkahi ng huli na hindi lamang dapat i-record ng mga mananaliksik ang luminescence light sum, ngunit i-record din ang CL kinetics curve para sa isang sapat na mahabang panahon, na hindi palaging ginagawa.

Dahil ang lahat ng sinusukat na indicator ay nakadepende sa instrumento at mga kondisyon ng pagsukat, ang antioxidant effect ng isang substance sa system na pinag-aaralan ay kadalasang inihahambing sa epekto ng antioxidant na kinuha bilang pamantayan, gaya ng Trolox.

Ang system na malunggay peroxidase-hydrogen peroxide ay ginamit upang pag-aralan ang kabuuang kapasidad ng antioxidant ng mga materyales ng halaman ng maraming may-akda. Sa mga gawa, upang matantya ang dami ng antioxidant sa mga sample, ginamit ang CL latent period (TRAP method), at sa mga gawa, ginamit ang lugar sa ilalim ng CL development curve. Gayunpaman, ang mga gawaing ito ay hindi nagbibigay ng malinaw na katwiran

ang pagpili ng isa o ibang parameter para sa pagtantya ng OAU.

Ang layunin ng pag-aaral ay upang matukoy kung paano ang ratio ng mga antioxidant ng iba't ibang uri ay nakakaapekto sa TAU, at upang baguhin ang pamamaraan ng chemiluminescence sa paraang mas tumpak na matukoy ang TAU sa mga materyales ng halaman. Upang gawin ito, itinakda namin ang aming sarili ng ilang mga gawain. Una, upang ihambing ang mga kinetika ng CL ng mga pinag-aralan na bagay sa mga kinetika ng karaniwang antioxidant ng tatlong uri (malakas, katamtaman, at mahina) upang maunawaan kung aling uri ng mga antioxidant ang gumagawa ng pangunahing kontribusyon sa TAE ng mga pinag-aralan na bagay. Pangalawa, upang kalkulahin ang TAE ng mga pinag-aralan na bagay sa pamamagitan ng pagsukat ng pagbaba sa CL light sum sa ilalim ng pagkilos ng mga bagay na ito kumpara sa pagkilos ng antioxidant, na nagbibigay ng pinakamalaking kontribusyon sa TAE.

MGA MATERYAL AT PARAAN

Ang mga bagay ng pag-aaral ay mga pang-industriyang sample ng hawthorn, mountain ash at wild rose fruit na ginawa ng Krasnogorskleksredstva JSC (Russia), pati na rin ang mga prutas ng raspberry na nakolekta ng mga may-akda sa rehiyon ng Moscow sa ilalim ng natural na lumalagong mga kondisyon at pinatuyo sa temperatura na 60- 80 ° C hanggang sa huminto sila sa paghihiwalay ng juice at pressure deformations.

Ang mga reagents para sa pagsusuri ng kapasidad ng antioxidant sa pamamagitan ng pamamaraang chemiluminescent ay: KH2PO4, 20 mM buffer solution (pH 7.4); peroxidase mula sa mga ugat ng malunggay (activity 112 U/mg, M = 44 173.9), 1 mM aqueous solution; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahydro-1,4-phthalazinedione, 3-aminophthalic acid hydrazide, M=177.11), 1 mM aqueous solution; hydrogen peroxide (H2O2, M = 34.01), 1 mM may tubig na solusyon; mga solusyon ng antioxidant (ascorbic acid, quercetin, tocopherol). Ang lahat ng mga reagents ay ginawa ng Sigma Aldrich (USA).

Ang kabuuang kapasidad ng antioxidant ay natukoy sa pamamagitan ng pagtatala ng chemiluminescence sa isang Lum-100 chemi-luminometer (DISoft, Russia) gamit ang PowerGraph 3.3 software. Upang matukoy ang TAU sa mga materyales ng halaman, 40 µl ng luminol sa konsentrasyon na 1 mM, 40 µl ng malunggay peroxidase sa konsentrasyon na 0.1 µM, mula 10 hanggang 50 µl ng isang decoction o infusion (depende sa konsentrasyon) at phosphate buffer sa halagang kinakailangan upang dalhin ang kabuuang dami ng sample sa 1 ml. Ang cuvette ay na-install sa device at ang CL ay naitala, na nagmamasid sa background signal. Matapos ang 48 s ng pagpaparehistro ng signal ng background, 100 μl ng H2O2 sa isang konsentrasyon ng 1 mM ay idinagdag sa cuvette, at ang pagpaparehistro ng CL ay ipinagpatuloy sa loob ng 10 min. Apat na sample ang inihanda na may iba't ibang konsentrasyon ng bawat isa sa mga bagay ng halaman. Ang CL ay naitala din para sa mga solusyon ng ascorbic acid, quercetin, at tocopherol sa limang magkakaibang konsentrasyon para sa bawat isa sa mga antioxidant. Kasunod nito, ang TAU ng mga sample ng decoctions at infusions ay muling kinalkula para sa quercetin.

umabot sa isang talampas, na nagpahiwatig ng kumpletong pagkasira ng mga antioxidant sa system. Ang mga dilution ng mga pinag-aralan na sample at ang mga konsentrasyon ng mga solusyon ng karaniwang antioxidants (ipinahiwatig sa mga caption sa mga figure) ay pinili sa paraang ang lahat ng CL kinetic curve ay nasusukat sa parehong sensitivity ng instrumento.

Ang kapasidad ng antioxidant ay kinakalkula mula sa pagbabago sa lugar (AS) sa ilalim ng chemiluminescence kinetic curve (light sum) sa pagdaragdag ng isang substance na naglalaman ng antioxidant. Upang gawin ito, kinakalkula namin ang S0 para sa system na walang antioxidant at ibinawas mula dito ang lugar na SS, na nagpapakilala sa sistema kung saan idinagdag ang antioxidant. Ang halaga ng AS ay depende sa sensitivity ng chemiluminometer at mga kondisyon ng pagsukat. Ang ratio na AS/C ■ V (kung saan ang C ay ang konsentrasyon ng pinag-aralan na biological na materyal sa cuvette, g/l, at V ay ang volume ng cuvette, l) ay nagpapahayag ng antioxidant capacity ng 1 g ng pinag-aralan na materyal, i.e. , mga materyales sa halaman.

Ang kapasidad ng antioxidant ASa ng isang solusyon ng isang karaniwang antioxidant, halimbawa, quercetin, na inilagay sa parehong dami ng pinaghalong reaksyon ay kinakalkula sa katulad na paraan. Ang ratio na AS/CÄ ■ V (kung saan ang CA ay ang weight concentration ng antioxidant sa cuvette, g/l) ay nagpapahayag ng antioxidant capacity ng 1 g ng antioxidant.

Para sa bawat isa sa mga karaniwang antioxidant, ang signal mula sa mga solusyon ng ilang mga konsentrasyon ay naitala upang matiyak na ang mga kalkulasyon ay isinasagawa sa loob ng mga limitasyon ng isang linear na relasyon, at ang mga resulta na nakuha ay maaaring kopyahin. Sa katunayan, nakuha ang isang linear na pag-asa (ASa = kA ■ CA) ng signal sa konsentrasyon, kung saan kinakalkula ang stoichiometric coefficient kA. Ayon sa pamantayan ng Fisher, ang mga halaga ng kA na nakuha para sa mga karaniwang antioxidant ay makabuluhan sa istatistika na may posibilidad na 0.975. Susunod, ang signal mula sa apat na konsentrasyon ay naitala para sa bawat isa sa apat na sample ng halaman, at para sa lahat ng mga sample ay nakuha ang linear dependence ng signal sa konsentrasyon (AS = k ■ C), kung saan kinakalkula ang stoichiometric coefficient k. Sa posibilidad na 0.975 (Fischer's test), ang mga k value na nakuha para sa mga sample ng halaman ay makabuluhan sa istatistika. Ang kabuuang kapasidad ng antioxidant ng materyal ng halaman sa mga tuntunin ng bigat ng karaniwang antioxidant (mg%) ay natagpuan ng formula

OAU = k ■ 105. k

Ang mga halaga ay ipinakita bilang arithmetic mean ± standard deviation (M ± 5) sa p<0,05.

RESULTA NG PAG-AARAL

Ang pag-aaral ng chemiluminescence kinetics sa pagkakaroon ng sodium ascorbate (Fig. 1) ay nagpakita na ang antioxidant na ito ay nailalarawan sa pamamagitan ng isang latent na panahon, kapag ang CL ay halos ganap na pinigilan. Ang tagal nito ay proporsyonal sa dami ng antioxidant sa system. Sa kasong ito, hindi nagbabago ang slope ng CL curves o ang CL intensity sa talampas. Ito ay ipinaliwanag sa pamamagitan ng katotohanan na ang ascorbic acid ay isang malakas na antioxidant na humaharang sa lahat ng mga radical na nabuo sa system, kabilang ang mga luminol radical, at ang CL ay hindi nabubuo hanggang ang lahat ng ascorbate ay na-oxidized.

Ang pagkilos ng tocopherol (Larawan 2) ay ipinakita sa pamamagitan ng pagbawas sa intensity ng CL sa isang talampas, na karaniwan para sa mga mahinang antioxidant, bagaman ang tocopherol ay itinuturing na isa sa mga pinaka

makapangyarihang antioxidants. Marahil ang pagkakaibang ito ay dahil sa katotohanan na sa aming eksperimento, ang mga libreng radikal ay nasa isang may tubig na solusyon, habang ang epekto ng tocopherol ay karaniwang pinag-aaralan sa nonpolar media. Sa pag-aaral, kung saan ang complex ng cytochrome c na may cardiolipin ay nagsilbing pinagmumulan ng mga radical at ang reaksyon sa luminol ay nagpatuloy sa loob ng complex na ito, ang tocopherol ay may mga katangian ng isang antioxidant ng katamtamang lakas.

Ang pagkakaroon ng pag-aaral ng epekto ng iba't ibang mga konsentrasyon ng quercetin sa aming system (Larawan 3) at paghahambing ng mga kinetic curves para dito at sodium ascorbate at tocopherol, mapapansin na ang pangunahing epekto ng quercetin ay ipinahayag sa isang pagbabago sa slope ng curves, ibig sabihin, ang rate ng pag-unlad ng CL, na karaniwan para sa mga katamtamang antioxidant.

Ang mga kurba ng CL para sa lahat ng pinag-aralan na decoction (Larawan 4) ay kahawig ng mga kurba para sa quercetin na may bahagyang pagbaba sa intensity ng CL sa dulo, ibig sabihin, sa pag-abot.

Oras, min

kanin. 1. Epekto ng sodium ascorbate sa chemiluminescence kinetics

Ang mga konsentrasyon ng mga bahagi ng system: luminol - 40 μM, malunggay peroxidase - 4 nM, hydrogen peroxide - 100 μM. Curves: 1 - control sample; 2 - 0.05 μM; 3 - 0.10 μM; 4 - 0.15 μM; 5 - 0.2 μM; 6 - 0.25 μM sodium ascorbate.

talampas. Tulad ng ipinakita sa trabaho, ang pag-uugali na ito ay tipikal para sa mga antioxidant ng katamtamang lakas, na sa aming kaso ay kinabibilangan ng polyphenols - flavonoids at tannins. Para sa isang pagbubuhos ng mga prutas ng raspberry (Larawan 4, D), ang pagbawas sa chemiluminescence sa antas ng talampas ay kapansin-pansin, na tipikal para sa mga mahina na antioxidant, na sa kasong ito ay tocopherol. Sa mga tuntunin ng quercetin at tocopherol, ang pagbubuhos ng prutas ng raspberry ay naglalaman ng 4.7 ± 0.9 µmol/g ng quercetin at 11.9 ± 0.8 µmol/g ng tocopherol.

Kapag inihambing ang mga curve ng chemiluminescence na nakuha para sa iba't ibang mga konsentrasyon ng apat na pinag-aralan na may tubig na mga extract mula sa mga materyales ng halaman, ipinakita na ang kontribusyon ng daluyan at mahina na mga antioxidant sa kabuuang kapasidad ng antioxidant ng mga sample ay nabawasan sa sumusunod na pagkakasunud-sunod: pagbubuhos ng prutas ng raspberry (Fig. 4, D), rosehip fruit decoction (Fig. 4, C), isang decoction ng rowan fruits (Fig. 4, A), isang decoction ng hawthorn fruits (Fig. 4, B). Ang mga halaga ng AS sa mga tuntunin ng konsentrasyon C ng pinag-aralan na sangkap sa cuvette at ang mga halaga ng kabuuang kapasidad ng antioxidant sa mga tuntunin ng quercetin ay ipinapakita sa talahanayan.

ANG TALAKAYAN NG MGA RESULTA

Ang data na nakuha sa panahon ng mga eksperimento at ang mga halaga ng TAU ng mga pinag-aralan na bagay na kinakalkula sa kanilang batayan ay inihambing sa nilalaman ng mga pangunahing antioxidant sa kanila, na tinutukoy gamit ang mga kemikal na pamamaraan ng pagsusuri. Sa kabila ng katotohanan na ang isang positibong ugnayan sa pagitan ng kabuuang halaga ng antioxidant at TAU sa iba't ibang mga bagay ay hindi maikakaila, may mga kapansin-pansing pagkakaiba sa pagitan ng mga tagapagpahiwatig na ito. Halimbawa, kung kukunin natin ang kabuuan ng nilalaman ng mga flavonoid, tannin at ascorbic acid, kung gayon ito ay lumalabas na higit pa sa kinakalkula na TAU para sa lahat ng pinag-aralan na bagay, maliban sa sabaw ng mga prutas ng hawthorn (talahanayan).

46 Oras, min

ako" "h chi----.

kanin. 2. Epekto ng tocopherol sa chemiluminescence kinetics

Ang mga konsentrasyon ng mga bahagi ng system: luminol - 40 μM, malunggay peroxidase - 4 nM, hydrogen peroxide - 100 μM. Curves: 1 - control sample; 2 - 0.01 μM; 3 - 0.025 μM; 4 - 0.06 μM; 5 - 0.1 μM; 6 - 0.2 μM tocopherol.

46 Oras, min

kanin. Fig. 3. Epekto ng quercetin sa chemiluminescence kinetics Mga konsentrasyon ng mga bahagi ng system: luminol - 40 μM, malunggay peroxidase - 4 nM, hydrogen peroxide - 100 μM. Curves: 1 - control sample; 2 - 0.02 μM; 3 - 0.03 μM; 4 - 0.04 μM; 5 - 0.05 μM; 6 - 0.06 μM na quercetin.

Oras, min

46 Oras, min

120 I 100 80 \ 60 40 20

46 Oras, min

kanin. Fig. 4. Impluwensiya ng decoctions ng rowan fruits (A), hawthorn (B), wild rose (C) at raspberry fruit infusion (D) sa chemiluminescence kinetics . (A) Curves: 1 - control sample; 2 - 0.002 g/l; 3 - 0.004 g/l; 4 - 0.006 g/l; 5 - 0.008 g/l decoction ng rowan fruits. (B) Curves: 1 - control sample; 2 - 0.005 g/l; 3 - 0.0075 g/l; 4 - 0.01 g/l; 5 - 0.0125 g/l decoction ng hawthorn fruits. (C) Curves: 1 - control sample; 2 - 0.001 g/l; 3 - 0.0015 g/l; 4 - 0.002 g/l; 5 - 0.0025 g/l decoction ng rose hips. (D) Curves: 1 - control sample; 2 - 0.001 g/l; 3 - 0.003 g/l; 4 - 0.004 g/l; 5 - 0.005 g/l pagbubuhos ng mga raspberry.

sa sistema ng peroxidase-luminol-hydrogen peroxide na nauugnay sa nilalaman ng mga compound ng triterpene. Gayunpaman, sa gawain ng parehong mga may-akda, kung saan ang isa pang halaman ay ang object ng pag-aaral, walang ugnayan ang naobserbahan sa pagitan ng TAU at ang nilalaman ng anumang pangkat ng mga sangkap, kabilang ang mga flavonoid.

Ang mga pagkakaibang ito ay nauugnay sa hindi bababa sa tatlong mga kadahilanan. Una, ang aktibidad ng mga antioxidant ay mahalaga, ibig sabihin, ang rate ng kanilang pakikipag-ugnayan sa mga radical, na naiiba para sa iba't ibang mga antioxidant na bumubuo sa sample ng halaman. Ayon kay Izmailov, ang mga pare-parehong rate ng kaukulang mga reaksyon para sa mexidol, tocopherol at quercetin ay nauugnay bilang 0.04: 2: 60. Pangalawa, ang bawat molekula ng antioxidant, na pumapasok sa isang reaksyong kemikal, ay maaaring humarang ng ibang bilang ng mga radikal. Ayon sa trabaho, ang quercetin, uric at ascorbic acid ay humarang sa 3.6 ± 0.1, 1.4 ± 0.1 at 0.5 ± 0.2 radical bawat reacted antioxidant molecule, ayon sa pagkakabanggit (gemin-H202-luminol system ang ginamit) . Pangatlo, ang mga resulta ng pag-aaral ay maaaring maimpluwensyahan ng pagkakaroon ng aktibidad ng peroxidase sa mga sample ng halaman mismo, tulad ng sa trabaho, pati na rin ang pagkakaroon ng calcium sa mga sample, na, tulad ng ipinapakita sa trabaho, ay may kakayahang tumaas. ang aktibidad ng malunggay peroxidase sa ilalim ng ilang mga kundisyon. Ito ay kadalasang nagreresulta sa higit pa

mas mataas na intensity ng CL sa talampas kaysa sa mga control curves, na, gayunpaman, hindi namin naobserbahan.

Ang higit na kahalagahan ay ang stoichiometric coefficient ng antioxidant. Ang bilang ng mga radical n naharang ng mga ito ay katumbas ng

kung saan ang p ay ang stoichiometric coefficient, at ang Am ay ang pagbabago sa konsentrasyon ng antioxidant sa panahon ng pagsukat, sa aming kaso, ang paunang konsentrasyon ng sangkap ng pagsubok sa sample ng pagsubok.

Ang pagkakaiba sa liwanag na kabuuan ng luminescence sa kawalan ng antioxidant at sa presensya nito ay proporsyonal sa n. Ang kabuuang bilang ng mga naharang na radical ay n = Y.p. m,

kung saan ang stoichiometric coefficient ng isang partikular na antioxidant, at m ang konsentrasyon nito sa panahon ng pagbabago

Layunin ng pag-aaral Flavonoids, mg%* Tannins, mg%* Ascorbic acid, mg%* AS/C ■ 10-8, arb. mga yunit OAU, mg% quercetin

Sabaw ng mga prutas ng rowan 8.87 ± 0.01 210.00 ± 10.00 0.67 ± 0.02 7.13 ± 0.96 56.53 ± 7.61

Sabaw ng rose hips 4.66 ± 0.04 850.00 ± 20.00 3.70 ± 0.12 16.60 ± 3.40 131.63 ± 27.26

Sabaw ng mga prutas ng hawthorn 3.01 ± 0.06 12.00 ± 3.00 0.23 ± 0.002 3.18 ± 0.29 25.20 ± 2.32

Pagbubuhos ng mga pinatuyong raspberry 90.00 ± 4.00 40.00 ± 20.00 3.91 ± 0.08 6.65 ± 1.21 52.69 ± 9.56

Tandaan: * - data ng panitikan, . AS - pagbabago sa light sum para sa sample, rel. mga yunit, C - konsentrasyon ng sample sa cuvette, g/l. Ang mga kinakalkula na halaga ay maaasahan sa p<0,05. Число измерений для каждого образца - четыре.

rhenium. Ang kabuuang bilang ng mga naharang na radical ay malinaw na hindi katumbas ng kabuuang halaga ng mga antioxidant, dahil ang coefficients pt ay hindi lamang hindi katumbas ng pagkakaisa, ngunit malaki rin ang pagkakaiba para sa iba't ibang mga antioxidant.

Ang halaga ng n ay proporsyonal sa pagkakaiba sa mga magaan na kabuuan na sinusukat sa isang tiyak na oras sa pagitan ng isang sample na naglalaman ng antioxidant at isang control sample na walang mga antioxidant:

kung saan ang k ay isang koepisyent na pare-pareho sa ilalim ng parehong mga kondisyon ng pagsukat.

siniguro ang oksihenasyon ng malakas na antioxidant (ascorbic acid) at katamtamang antioxidant (quercetin) sa loob ng 10 min. Ang tagal ng pagsukat na ito ay maginhawa at tinitiyak ang kinakailangang kalidad ng mga sukat.

Panitikan

1. Proskurnina E. V., Vladimirov Yu. A. Mga libreng radical bilang mga kalahok sa mga proseso ng regulasyon at pathological. Sa: Grigoriev A. I., Vladimirov Yu. A., mga editor. Pangunahing agham - gamot. Biophys. honey. teknolohiya. Moscow: MAKS Press; 2015. tomo 1. p. 38-71.

3. Khasanov V. V., Ryzhova G. L., Maltseva E. V. Mga pamamaraan para sa pag-aaral ng mga antioxidant. Chem. rast. hilaw na materyales. 2004; (3): 63-75.

4. Vasiliev R. F., Kancheva V. D., Fedorova G. F., Batovska D. I., Trofimov A. V. Antioxidant na aktibidad ng chalcones. Chemiluminescent na pagpapasiya ng reaktibiti at quantum-chemical na pagkalkula ng mga energies at istruktura ng mga reagents at intermediate. Kinetics at catalysis. 2010; 51(4): 533-41.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil "ev RF, Veprintsev TL. Peroxy-

radical-mediated chemiluminescence: mechanistic diversity at fundamentals para sa antioxidant assay. Arkivoc. 2007; 8:163-215.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. Pagsusuri ng antiradical na kapasidad ng H2O2-hemin-induced luminol chemiluminescence. J Agric Food Chem. 2003 Disyembre 3; 51 (25): 7481-8.

9. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V. Mga libreng radical at cellular chemiluminescence. Nagtagumpay ang biol. chem. 2009; 49:341-88.

10. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V., Izmailov D. Yu. Kinetic chemiluminescence bilang isang paraan para sa pag-aaral ng mga libreng radikal na reaksyon. Biophysics. 2011; 56(6): 1081-90.

11. Izmailov D. Yu., Demin E. M., Vladimirov Yu. A. Pagpapasiya ng aktibidad ng antioxidant sa pamamagitan ng pagsukat ng chemiluminescence kinetics. Photobiology at photomedicine. 2011; 7(2):70-6.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Luminol luminescence induced ng 2.2"-Azo-bis(2-amidinopropane) thermolysis. Libre

Radic Res Commun. 1992; 17(5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Sa paggamit ng pagsusubo ng luminol luminescence upang suriin ang aktibidad ng SOD. Libreng Radic Biol Med. 1994 Hun; 16(6): 833-7.

15. Lissi EA, Salim-Hanna M, Pascual C, Del Castillo MD. Pagsusuri ng kabuuang antioxidant potential (TRAP) at kabuuang antioxidant reactivity mula sa luminol-enhanced chemiluminescence measurements. Libreng Radic Biol Med. Peb 1995; 18(2):153-8.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Isang pagsisiyasat sa mekanismo ng luminescent peroxidation ng luminol sa pamamagitan ng mga diskarte sa paghinto ng daloy. J Biol Chem. 1968 Set 25; 243(18): 4706-14.

21. Alekseev A. V., Proskurnina E. V., Vladimirov Yu. A. Pagpapasiya ng mga antioxidant sa pamamagitan ng activated chemiluminescence gamit ang 2,2'-azo-bis(2-amidinopropane). Bulletin ng Moscow State University. Ser. 2. Khim. 2012; 53 ( 3): 187-93.

24. Ministry of Health ng USSR State Pharmacopoeia ng USSR XI ed. Isyu. 2 “Mga pangkalahatang pamamaraan ng pagsusuri. Mga materyales sa halamang gamot". M.: Medisina; 1987. p. 147-8.

25. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Kornyushina M. A. Pag-aaral ng mga paghahanda ng rosehip extract. Botika. 2012; (2): 14-6.

26. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Avrach A. S. Pag-aaral ng prutas ng hawthorn sa iba't ibang paraan ng pangangalaga at pagkuha ng tubig. Botika. 2010; (5): 16-8.

27. Avrach A. S., Sergunova E. V., Kuksova Ya. V. Biologically active substances ng mga prutas at water extracts ng karaniwang raspberry. Botika. 2014; (1): 8-10.

28. Avrach A. S., Samylina I. A., Sergunova E. V. Pag-aaral ng biologically active substances ng hawthorn fruits - raw na materyales para sa paghahanda ng homeopathic matrix tinctures. Sa Sab. siyentipiko tr. Batay sa mga materyales ng XXIV Mosk. intl. homeopathist. conf. "Pag-unlad ng paraan ng homeopathic sa modernong gamot"; Enero 24-25, 2014; Moscow. M.; 2014. p. 146-7.

29. Sergunova E. V., Sorokina A. A. Pag-aaral ng komposisyon ng biologically active substances sa medicinal plant raw na materyales ng iba't ibang paraan ng pangangalaga. Sa Sab. abstracts batay sa XX Ross. nat. congr. "Tao at gamot"; Abril 15-19, 2013; Moscow. Moscow: EkoOnis; 2013. p. 184-90.

30. Alexandrova E. Yu., Orlova M. A., Neiman P. L. Pag-aaral ng aktibidad ng peroxidase sa mga extract mula sa malunggay na rhizome at mga ugat at ang katatagan nito sa iba't ibang impluwensya. Vestn. Moscow State University. Ser. 2. Chem. 2006; 47(5):350-2.

1. Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Libreng radikaly kak uchastniki regulyatornykh at patologicheskikh protsessov. Sa: Grigor "ev AI, Vladimirov YuA, mga editor. Fundamental" nye nauki - meditsine. Biofizicheskie meditsinskie tekhnologii. Moscow: MAKS Press; 2015.v. 1. p. 38-71. Ruso.

2. Chanda S, Dave R. In vitro na mga modelo para sa pagsusuri sa aktibidad ng antioxidant at ilang mga halamang gamot na nagtataglay ng mga katangian ng antioxidant: Isang pangkalahatang-ideya. Afr J Microbiol Res. Disyembre 2009; 3(13): 981-96.

3. Khasanov VV, Ryzhova GL, Mal "tseva EV. Metody issledovaniya antioksidantov. Khimija Rastitel "nogo Syr" noong 2004; (3): 63-75. Russian.

4. Vasil "ev RF, K" "ncheva VD, Fedorova GF, B" "tovska DI, Trofimov AV. Antioksidantnaya aktivnost" khalkonov. Khemilyuminestsentnoe opredelenie reaktsionnoi sposobnosti i kvantovo-khimicheskii raschet energii at stroeniya reagentov at intermediatov. Kinetics at catalysis. 2010; 51(4): 533-41. Ruso.

5. Slavova-Kazakova AK, Angelova SE, Veprintsev TL, Denev P, Fabbri D, Dettori MA, et al. Antioxidant potential ng curcumin-related compounds na pinag-aralan ng chemiluminescence kinetics, chain-breaking efficiencies, scavenging activity (ORAC) at kalkulasyon ng DFT. Beilstein J Org Chem. 2015 Agosto 11; 11:1398-411.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil'ev RF, Veprintsev TL. Peroxy-radical-mediated chemiluminescence: mechanistic diversity at fundamentals para sa antioxidant assay. Arkivoc. 2007; 8: 163-215.

7. Fedorova GF, Menshov VA, Trofimov AV, Vasil'ev RF. Facile chemiluminescence assay para sa mga antioxidative na katangian ng mga lipid ng gulay: mga pangunahing kaalaman at mga halimbawa ng paglalarawan. Analyst. 2009 Okt; 134 (10): 2128-34.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. Pagsusuri ng antiradical na kapasidad ng H2O2-hemin-induced luminol

9. Vladimirov YuA, Proskurnina EV. Libreng radikaly at kletochnaya khemilyuminestsentsiya. Usp Biol Khim. 2009; 49:341-88. Ruso.

10. Vladimirov YuA, Proskurnina EV, Izmailov DYu. Kineticheskaya khemilyuminestsentsiya bilang metod izucheniya reaktsii svobodnykh radikalov. biophysics. 2011; 56(6): 1081-90. Ruso.

11. Izmailov DYu, Demin EM, Vladimirov YuA. Opredelenie aktivnosti antioksidantov metodom izmereniya kinetiki khemilyuminestsen-tsii. Fotobiologiya at fotomeditsina. 2011; 7(2):70-6. Ruso.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Luminol luminescence induced by 2.2"-Azo-bis(2-amidinopropane) thermolysis. Free Radic Res Commun. 1992; 17 (5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Sa paggamit ng pagsusubo ng luminol luminescence upang suriin ang aktibidad ng SOD. Libreng Radic Biol Med. 1994 Hun; 16(6): 833-7.

14. Lissi EA, Escobar J, Pascual C, Del Castillo MD, Schmitt TH, Di Mascio P. Nakikitang chemiluminescence na nauugnay sa reaksyon sa pagitan ng methemoglobin o oxyhemoglobin na may hydrogen peroxide. Photochem Photobiol. Nob 1994; 60(5):405-11.

16. Landi-Librandi AP, de Oliveira CA, Azzolini AE, Kabeya LM, Del Ciampo JO, Bentley MV, et al. In vitro evaluation ng antioxidant activity ng liposomal flavonols ng HRP-H2O2-luminol system. J Microencapsul. 2011; 28(4):258-67.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Isang pagsisiyasat sa mekanismo

ng luminescent peroxidation ng luminol sa pamamagitan ng mga diskarte sa paghinto ng daloy. J Biol Chem. 1968 Set 25; 243(18): 4706-14.

18. Chang CL, Lin CS, Lai GH. Mga katangian ng phytochemical, mga aktibidad sa free radical scavenging, at neuroprotection ng limang extract ng halamang gamot. Evid Based Complement Alternat Med. 2012; 2012: 984295. doi: 10.1155/2012/984295. Epub 2011 Agosto 10.

19. Chang CL, Lin CS. Phytochemical composition, antioxidant activity, at neuroprotective effect ng Terminalia chebula Retzius extracts. Evid Based Complement Alternat Med. 2012; 2012: 125247. doi: 10.1155/2012/125247. Epub 2011 Hul 5.

20. Georgetti SR, Casagrande R, Di Mambro VM, Azzolini AE, Fonseca MJ. Pagsusuri ng aktibidad ng antioxidant ng iba't ibang flavonoid sa pamamagitan ng pamamaraan ng chemiluminescence. AAPS PharmSci. 2003; 5(2):111-5.

21. Alekseev AV, Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Opredelenie antioksidantov metodom aktivirovannoi khemilyuminestsentsii s ispol "zovaniem 2.2" -azo-bis (2-amidinopropana). Bulletin ng Chemistry ng Moscow University. 2012; 53(3): 187-93. Ruso.

22. Pogacnik L, Ulrih NP. Application ng optimized chemiluminescence assay para sa pagpapasiya ng antioxidant capacity ng mga herbal extract. Luminescence. 2012 Nob-Dis; 27(6):505-10.

23. Saleh L, Plieth C. Kabuuang low-molecular-weight na antioxidant bilang isang summary parameter, na binibilang sa biological sample sa pamamagitan ng chemiluminescence inhibition assay. Nat Protocol. 2010 Set; 5(10): 1627-34.

24. Ministerstvo zdravookhraneniya SSSR. Gosudarsvennaya farmakopeya SSSR. ika-11 ed. Is. 2. "Pagsusuri ng pamamaraan ng obshchie.

Lekarstvennoe rastitel "noe syr" e", Moscow: Medltsina, 1987, p. 147-8. Russian.

25. Sergunova EV, Sorokina AA, Kornyushina MA. Izuchenie ekstraktsionnykh preparatov shipovnika. Botika. 2012; (2): 14-6. Ruso.

26. Sergunova EV, Sorokina AA, Avrach AS. Izuchenie plodov boyaryshnika razlichnykh sposobov konservatsii at vodnykh izvlechenii. Farmatsia. 2010; (5): 16-8. Ruso.

27. Avrach AS, Sergunova EV, Kuksova YaV. Biologicheski aktivnye veshchestva plodov i vodnykh izvlechenii maliny obyknovennoi. Farmatsia. 2014; (1): 8-10. Ruso.

28. Avrach AS, Samylina IA, Sergunova EV. Izuchenie biologicheski aktivnykh veshchestv plodov boyaryshnika - syr "ya dlya prigotovleniya nastoek gomeopaticheskikh matrichnykh. Proceedings of the 14th Moscow International Homeopathic Conference "Razvitie gomeopaticheskogo method v sovremennoi meditsine"; 24012.

29. Sergunova EV, Sorokina AA. Izuchenie sostava biologicheski aktivnykh veshchestv v lekarstvennom rastitel "nom syr" at razlichnykh sposobov konservatsii. Mga pamamaraan ng 20th Russian National Congress "Chelovek i lekarstvo"; 2013 Abr 1519; Moscow. Moscow: EkOOnis; 2013. p. 184-90. Ruso.

30. Aleksandrova EYu, Orlova MA, Neiman PL. Izuchenie peroksidaznoi aktivnosti v ekstraktakh iz kornevishcha at kornei khrena at ee stabil "nosti k razlichnym vozdeistviyam. Moscow University Chemistry Bulletin. 2006; 47 (5): 350-2. Russian.

1 Milentiev V.N. 2Sannikov D.P. 3Kazmin V.M. 2

1 Oryol State Institute of Economics and Trade

2 Institusyon ng Badyet ng Pederal na Estado "Sentro para sa Chemicalization at Radiology ng Agrikultura "Orlovsky"

3 Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Professional Education "State University - Educational, Scientific and Industrial Complex"

Ang posibilidad ng paggamit ng chemiluminescence upang masuri ang aktibidad ng antioxidant ng mga sangkap ng pagkain ay pinag-aralan. Ang iminungkahing paraan ay batay sa chemiluminescence ng luminol sa isang alkaline medium, ang intensity nito ay depende sa dami ng peroxide sa chemiluminescent sample. Ang Chemiluminescence ay naitala gamit ang isang binuo na setup na naglalaman ng dosing pump, isang light-tight chamber, isang glass vacuum photomultiplier tube, at isang computer system. Upang mapahusay ang chemiluminescence, isang solusyon ng potassium ferricyanide ay idinagdag sa luminol. Ang mga pagbabago sa intensity ng chemiluminescence ay naitala sa sandali ng pagpapakilala ng nasuri na sample sa luminol solution. Ang dandelion extract na nakuha sa pamamagitan ng dry low-temperature distillation ay ginamit bilang nasuri na sample. Naglalaman ito ng mga phenolic compound na kilala sa kanilang mataas na aktibidad na antioxidant. Ito ay itinatag na ang pamamaraan ng chemiluminescence ay maaaring gamitin upang matukoy ang mga katangian ng antioxidant ng iba't ibang mga compound ng pagkain.

chemiluminescence

aktibidad ng antioxidant

peroxides

sustansya

1. Vasiliev R.F. Chemical glow // Chemistry at chemists, 21.01.10. – URL: http://chemistry-chemists.com. (petsa ng pag-access: 22.08.13).

2. Vladimirov Yu.A. Mga libreng radical at antioxidant // Vestn. RAMN. - 1998. - Bilang 7. - P. 43-51.

3. Kondrashova E.A. Chemiluminescence bilang ang pinakasensitibong paraan ng enzyme immunoassay at ang aplikasyon nito. Mga diagnostic ng klinikal na laboratoryo. - 1999. - No. 9. - P. 32.

4. Lyubimov, G.Yu. Chemiluminescent analysis // Immunology. - 1991. - Hindi. 1. - P. 40–49.

5. Mayansky A.N., Nevmyatullin A.L., Chebotar I.V. Ang reaktibong chemiluminescence sa phagocytosis system // Microbiology. - 1987. - Hindi. 1. - S. 109–115.

6. Sherstnev M.P. Calcium-dependent at calcium-independent pathways ng cell chemiluminescence generation. Mga Isyu sa Chemiluminescence. - 1991. - Hindi. 2. - S. 1–4.

Ngayon, ang chemiluminescence ay isang malaking lugar ng agham na matatagpuan sa interface sa pagitan ng chemistry, physics at biology. Sa chemiluminescence, mayroong direktang conversion ng enerhiya ng kemikal sa enerhiya ng mga electromagnetic oscillations, i.e. sa mundo. Gamit ang chemiluminescence, matututunan ng isa ang tungkol sa kung paano nagpapatuloy ang reaksyon, ano ang mekanismo nito, na kinakailangan para sa mahusay at makatwirang pag-uugali ng mga teknolohikal na proseso. Kung ang teknolohikal na proseso ng pagkuha ng anumang produktong kemikal ay sinamahan ng chemiluminescence, kung gayon ang intensity nito ay maaaring magsilbing sukatan ng bilis ng proseso: mas mabilis ang reaksyon, mas maliwanag ang glow. Sa panahon ng reaksyon ng chemiluminescence, ang mga produktong mayaman sa enerhiya ay nakuha, na pagkatapos ay nagbibigay ng enerhiya sa pamamagitan ng paglabas ng liwanag, ibig sabihin, ang enerhiya ng kemikal ay na-convert sa electromagnetic radiation energy.

Ang layunin ng pag-aaral ay upang galugarin ang posibilidad ng paggamit ng chemiluminescence upang masuri ang aktibidad ng antioxidant ng mga sangkap ng pagkain.

Mga resulta ng pananaliksik at talakayan

Ang problema sa pagtatasa ng aktibidad ng antioxidant ng mga sangkap ng pagkain ay napaka-kaugnay. Ang paggamit ng terminong "antioxidant activity" upang ipakita ang pagiging kapaki-pakinabang ng isang partikular na produkto ay kadalasang ginagawa nang walang anumang kemikal at biochemical na argumento. Bilang isang patakaran, ang aktibidad ng antioxidant ng anumang sangkap ay tumutukoy sa pagiging epektibo ng pagbawas ng halaga ng peroxide. Ang mismong konsepto ng halaga ng peroxide ay hindi rin ganap na nagbubunyag ng kemikal na kakanyahan nito, dahil hindi ito ganap na tumutugma sa kinetics at thermodynamics ng mga yugto ng metabolismo ng isang partikular na produkto ng pagkain. Bilang karagdagan, ang halagang ito ay ginagamit upang makilala ang mga lipid sa anyo ng mga taba. Gayunpaman, ang mga proseso ng oksihenasyon at ang pagbuo ng mga peroxide sa katawan ay nangyayari hindi lamang sa paggamit ng mga taba, kundi pati na rin sa iba pang mga produkto. Sa madaling salita, ang nilalaman ng peroxide sa isang partikular na produkto ay masasabing "timbang" sa isang uri ng balanse, kung saan ang "reference weight" ay isang yunit ng konsentrasyon sa isang acidic na kapaligiran ng isang iodide ion na na-oxidized ng mga peroxide, bilang isang resulta kung saan nabuo ang molecular iodine:

ako- - e → ako; (isa)

I + I → I20. (2)

Kapag ang molecular iodine ay titrated na may solusyon na naglalaman ng sodium thiosulfate, ang konsentrasyon nito ay itinatag at, dahil dito, ang dami ng mga oxidizer ng iodide ions ay natutukoy, i.e. peroxide compounds, na talagang tinatawag na peroxide number. Ang pagtukoy sa halaga ng peroxide gamit ang ganitong uri ng "pagtimbang" ay batay sa reaksyon na ipinapakita sa fig. isa.

kanin. 1. Pagtukoy ng halaga ng peroxide gamit ang sodium thiosulfate

Kaya, ang konsentrasyon ng mga peroxide ay tinutukoy mula sa equation

С(I2) = ϒ(C[-O-O-]), (3)

kung saan ang ϒ ay ang koepisyent ng ugnayan sa pagitan ng konsentrasyon ng molecular iodine at ng konsentrasyon ng mga peroxide.

Ang iminungkahing paraan para sa pagtukoy ng mga peroxide sa mga produkto ay batay sa chemiluminescence ng luminol (C[lm]) sa isang alkaline medium, ang intensity (Ichl) na depende sa konsentrasyon ng peroxides (C[-O-O-]), sa isang sample ng chemiluminescent:

IHL. = Ϧchl ω, (4)

kung saan ang Ϧchl ay ang quantum yield ng chemiluminescence; ω - rate ng reaksyon na kinasasangkutan ng mga peroxide:

khlC[-O-O-] C[lm] = ω, (5)

kung saan ang kchl ay pare-pareho ang rate ng reaksyon o sa:

C[lm] kchl Ϧchl = K, (6)

IХЛ = K C[-O-O-]. (7).

Ang dami ng peroxide (-O-O-) ay tinutukoy ng light sum (S):

Ang halaga ng S ay depende sa antas ng pagkakumpleto ng pagkonsumo ng peroxide sa chemiluminescent reaction.

Upang matukoy ang pare-parehong K, ang isang calibration curve ay itinayo para sa pagtitiwala ng light sum S sa konsentrasyon ng peroxide, na tinutukoy ng titration:

S = f(C[-O-O-]). (9)

Ang hydrogen peroxide H2O2 ay ginagamit bilang peroxides.

Pagkatapos ay inihambing ang mga datos na nakuha mula sa equation (3) at (9). Batay sa paghahambing ng ϒ at K, ang isang konklusyon ay ginawa tungkol sa kasunduan ng mga mekanismo ng reaksyon na pinagbabatayan ng pagpapasiya ng mga peroxide sa pamamagitan ng mga pamamaraang ito. Napag-alaman na sa hanay na ito ng mga konsentrasyon ng peroxide ϒ at K ay talagang sumasang-ayon sa isa't isa at samakatuwid ay magagamit ang mga ito upang matukoy ang halaga ng peroxide.

Ang chemiluminescence ay naobserbahan sa isang alkaline medium na naglalaman ng luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahydro-1,4-phthalazinedione, 3-aminophthalic hydrazide, H2L). Ito ay naitala gamit ang isang chemiluminescent setup, kabilang ang isang glass vacuum photomultiplier. Ang photomultiplier ay pinapagana ng isang mataas na boltahe na rectifier (7) na isinama sa isang bloke (9) na nagpapalakas sa signal ng photomultiplier, na naitala sa display ng monitor ng computer (5).

kanin. 2. Pagpaparehistro ng chemiluminescence ng nasuri na produkto: 1 - dosing pump; 2 - hindi tinatablan ng liwanag na silid; 3 - salamin; 4 - cuvette; 5 - sistema ng computer; 6 - photomultiplier; 7 - mataas na boltahe rectifier; 8 - isang aparato na nagbibigay-daan sa iyo upang matukoy ang parang multo na rehiyon ng chemiluminescent radiation; 9 - i-block ang pagpapalakas ng signal ng photomultiplier

Ang isang dosing pump (1) ay kinakailangan upang ipasok ang nasuri na sample sa isang cuvette (4) na naglalaman ng isang chemiluminescent na solusyon ng luminol. Ang dispenser na ito ay nagsisilbing stirrer para sa iniksyon na sample na may chemiluminescent solution. Upang mapahusay ang rate ng reaksyon at intensity ng chemiluminescence, isang solusyon ng potassium ferricyanide ay idinagdag sa luminol. Ang paghahalo ay isinasagawa ng mga bula ng hangin na nakuha sa pamamagitan ng pagbomba ng hangin sa pamamagitan ng likidong solusyon na may bomba. Ang salamin (3) na matatagpuan sa opaque chamber (2) ay nagsisilbi para sa mas magandang koleksyon ng liwanag ng chemiluminescent radiation incident sa photocathode ng photomultiplier (6) na naka-mount sa opaque chamber. Hinahayaan ka ng dispenser na ipasok ang nais na mga bahagi ng likido sa cuvette nang hindi binubuksan ang light-tight chamber (2) sa panahon ng mga eksperimento. Sa kasong ito, ang mga likidong ito ay pumapasok sa cuvette (4) sa pamamagitan ng salamin o plastik na mga tubo. Pinapayagan ka ng computer system na irehistro ang dependence ng luminescence intensity I sa oras t, iyon ay, ang chemiluminescence kinetics:

Ang sistema ng computer ay sumasalamin sa pagtaas at pagbaba ng mga constant sa function na I = f(t), na kung saan ay conjugated sa rate constants ng mga reaksyon na nagdudulot ng chemiluminescence, iyon ay, sa kanilang mga kinetics. Ang isang aparato (8) ay kasama sa silid ng chemiluminescent, na ginagawang posible upang matukoy ang spectral na rehiyon ng chemiluminescent radiation, iyon ay, ang pagtitiwala:

I = f1(λ). (labing isang)

Ang bloke na ito ay isang cassette sa anyo ng isang disk, kung saan naka-mount ang mga filter ng hangganan. Ang pagbabago ng mga light filter ay isinasagawa sa pamamagitan ng pag-ikot ng disc cassette tungkol sa pahalang na axis na kumukonekta sa mga sentro ng eroplano ng mga light filter at ang eroplano ng photocathode ng photomultiplier.

Ang proseso ng pagsukat ay isinasagawa tulad ng sumusunod:

1. Ang tugon ng photomultiplier sa mga pagbabago sa supply boltahe nito at sa mga pagbabago sa intensity ng reference light source na bumabagsak sa cathode nito ay nakatakda.

2. Ang cuvette ay puno ng solusyon ng luminol sa isang alkaline na daluyan.

3. Ang dispenser ay puno ng nasuri na sample.

4. Ang dependence ng intensity ng chemiluminescence sa oras t ay naitala. Ang chemiluminescence ay sinusubaybayan hanggang sa oras na t1, kung saan ang pagbabago sa I1 mula sa oras na t ay minimal: I1 = f1(t).

5. Ang isang bahagi ng nasuri na solusyon ay pinapakain gamit ang isang dispenser.

6. Ang chemiluminescence ng nasuri na sample ay sinusunod, ang kinetics nito ay I = f(t).

Sa fig. Ang Figure 3 ay nagpapakita ng isang graph ng dependence ng mga function (I1 = f1(t)), conjugated sa isang graph (I = f(t)), pagkatapos ng pagpapakilala ng nasuri na solusyon.

Gaya ng makikita mula sa fig. 3, ang intensity ng chemiluminescence ng luminol ay nagbabago: ang isang matalim na pagtaas ay sinusundan ng isang matalim na pagbaba sa luminescence pagkatapos ng pagdaragdag ng nasuri na sample.

Dahil ang pagpapahusay ng chemiluminescence sa panahon ng oksihenasyon ng luminol ay nauugnay sa pagbuo ng mga peroxide, ang pagbawas sa intensity ng chemiluminescence pagkatapos ng pagpapakilala ng nasuri na sample ay nagpapahiwatig ng pagbawas sa kanilang bilang. Samakatuwid, maaari nating pag-usapan ang pagkakaroon ng aktibidad ng antioxidant sa mga compound na bumubuo sa nasuri na sample.

Dapat tandaan na ang dandelion extract na nakuha sa pamamagitan ng dry low-temperature distillation, na naglalaman ng mga phenolic compound na kilala sa kanilang mataas na antioxidant activity, ay ginamit bilang nasuri na sample.

kanin. Fig. 3. Dependence graph ng mga function (I1 = f1(t)), conjugated sa graph (I = f(t)), pagkatapos ng pagpapakilala ng nasuri na solusyon

Bilang karagdagan, sa panahon ng eksperimento, natagpuan na ang paggamit ng chemiluminescence ay posible upang matukoy ang dami ng mga peroxide sa mga superdiluted na sistema, na mahalaga para sa pagtatasa ng simula ng oksihenasyon ng mga produkto, halimbawa, sa panahon ng kanilang imbakan.

Kaya, ipinakita ng mga isinagawang pag-aaral na ang pamamaraan para sa pagtukoy ng mga peroxide sa mga produkto, batay sa chemiluminescence ng luminol sa isang alkaline medium, ay ginagawang posible upang suriin ang aktibidad ng antioxidant ng mga sangkap ng pagkain at maaaring magamit upang maitaguyod ang mga katangian ng antioxidant ng iba't ibang pagkain. mga compound.

Mga Reviewer:

Litvinova E.V., Doktor ng Teknikal na Agham, Propesor ng Kagawaran ng Teknolohiya, Organisasyon at Kalinisan ng Pagkain, OrelGIET, Orel;

Kovaleva O.A., Doktor ng Biological Sciences, Direktor ng INITs, FSBEI HPE "Oryol State Agrarian University", Orel.

Ang gawain ay natanggap ng mga editor noong 11/08/2013.

Bibliographic na link

Panichkin A.V., Bolshakova L.S., Milentiev V.N., Sannikov D.P., Kazmin V.M. PAGGAMIT NG CHEMILUMINESCENCE UPANG MASUSURI ANG ANTIOXIDANT PROPERTIES NG MGA PAGKAIN // Fundamental Research. - 2013. - Hindi. 10-11. – S. 2436-2439;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=32810 (petsa ng access: 12/17/2019). Dinadala namin sa iyong pansin ang mga journal na inilathala ng publishing house na "Academy of Natural History"

Portal para sa mag-aaral. Pagsasanay sa sarili

1.4 Mga pamamaraan ng pananaliksik para sa mga antioxidant

anotasyon artikulong siyentipiko sa mga agham ng kemikal, may-akda ng artikulong siyentipiko - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Mga Kaugnay na Paksa mga siyentipikong papel sa mga agham ng kemikal, may-akda ng siyentipikong papel - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Chemiluminescent na pagpapasiya ng kabuuang kapasidad ng antioxidant sa materyal ng halamang gamot

Ang teksto ng gawaing siyentipiko sa paksang "Chemiluminescent method para sa pagtukoy ng kabuuang kapasidad ng antioxidant sa mga materyales ng halamang gamot"

Bibliographic na link

MGA KAUGNAY NA ARTIKULO