Lingkungan khusus.
Dalam bakteriologi, media nutrisi kering produksi industri banyak digunakan, yaitu serbuk higroskopis yang mengandung semua komponen media, kecuali air. Untuk persiapannya, pencernaan tryptic dari produk non-makanan murah (limbah ikan, tepung daging dan tulang, kasein teknis) digunakan. Mereka nyaman untuk transportasi, dapat disimpan untuk waktu yang lama, membebaskan laboratorium dari proses besar persiapan media, dan membawa masalah standardisasi media lebih dekat ke resolusi. Industri medis memproduksi media kering Endo, Levin, Ploskirev, agar bismut sulfit, agar nutrisi, karbohidrat dengan indikator BP dan lain-lain.
termostat
Termostat digunakan untuk budidaya mikroorganisme.
Termostat adalah perangkat yang mempertahankan suhu konstan. Perangkat ini terdiri dari pemanas, ruang, dinding ganda di mana udara atau air bersirkulasi. Suhu dikendalikan oleh termostat. Suhu optimum untuk reproduksi sebagian besar mikroorganisme adalah 37°C.
AKTIVITAS 7
TOPIK: METODE ISOLASI BUDAYA AEROBIK MURNI. TAHAP ISOLASI BAKTERI AEROBIK MURNI BUDAYA MURNI DENGAN METODE MECHANICAL UNCOUPLING
Rencana belajar
1. Konsep "kultur murni" bakteri
2. Metode untuk mengisolasi kultur murni dengan pemisahan mekanis
3. Metode biologis untuk mengisolasi biakan murni
4. Metode untuk mengidentifikasi bakteri
Tujuan pelajaran: Untuk memperkenalkan siswa dengan berbagai metode untuk mengisolasi kultur murni, untuk mengajarkan cara bercocok tanam dengan lingkaran, guratan, tusukan
Pedoman demonstrasi
Di habitat aslinya, bakteri ditemukan berasosiasi. Untuk mengetahui sifat-sifat mikroba, perannya dalam perkembangan proses patologis, diperlukan bakteri dalam bentuk populasi yang homogen (kultur murni). Kultur murni adalah kumpulan individu bakteri dari spesies yang sama yang ditumbuhkan pada media nutrisi.
Metode untuk mengisolasi biakan murni bakteri aerob
Metode Pasteur Metode Koch Biologis Fisik
(memiliki sejarah (kabel pelat)
Berarti)
Metode Kimia
Shchukevich
Modern
Menabur dengan loop Menabur dengan spatula
(Metode Drigalski)
Metode untuk mengisolasi kultur murni:
1. Metode pemisahan mekanis didasarkan pada pemisahan mikroba dengan menggosokkan bahan uji secara berurutan di atas permukaan agar.
a) Metode Pasteur - penting secara historis, menyediakan pengenceran berurutan dari bahan uji dalam media nutrisi cair dengan metode penggulungan
b) Metode Koch - metode tata letak pelat - didasarkan pada pengenceran berurutan bahan uji dengan agar pepton daging, diikuti dengan menuangkan tabung reaksi dengan bahan yang diencerkan ke dalam cawan Petri.
c) Metode Drygalski - saat menabur bahan yang banyak mengandung mikroflora, gunakan 2-3 cangkir untuk penaburan berturut-turut dengan spatula.
d) Menabur dengan loop dalam pukulan paralel.
2. Metode biologis didasarkan pada sifat biologis patogen.
a) Biologis - infeksi pada hewan yang sangat sensitif, di mana mikroba dengan cepat berkembang biak dan menumpuk. Dalam beberapa kasus, metode ini adalah satu-satunya yang memungkinkan Anda untuk mengisolasi kultur patogen dari orang yang sakit (misalnya, dengan tularemia), dalam kasus lain lebih sensitif (misalnya, isolasi pneumokokus pada tikus putih). atau agen penyebab tuberkulosis pada marmut).
b) Kimia - berdasarkan ketahanan asam mikobakteri. Untuk membebaskan material dari flora yang menyertainya, itu
diperlakukan dengan larutan asam. Hanya basil tuberkel yang akan tumbuh, karena mikroba toleran asam dibunuh oleh asam.
c) Metode fisik didasarkan pada ketahanan spora terhadap panas. Untuk mengisolasi kultur bakteri pembentuk spora dari
campuran, bahan dipanaskan pada 80 ° C dan diinokulasi pada media nutrisi. Hanya bakteri spora yang akan tumbuh, karena sporanya tetap hidup dan memberi pertumbuhan.
d) metode Shukevich - berdasarkan mobilitas tinggi dari proteus vulgar, yang mampu merayapi pertumbuhan.
Metode Persiapan Piring Agar
MPA dilebur dalam penangas air, kemudian didinginkan hingga 50-55 °C. Leher botol dibakar dalam nyala lampu alkohol, cawan Petri dibuka sehingga leher botol masuk, tanpa menyentuh tepi cawan, tuangkan 10-15 ml MPA, tutup, kocok piring agar medianya merata, biarkan di atas permukaan mendatar hingga memadat. Setelah kering, piring dengan agar piring disimpan dalam dingin.
Penaburan lingkaran
Setetes bahan diambil dengan loop dingin steril, salah satu ujung cangkir dibuka sedikit dengan tangan kiri, loop dimasukkan ke dalam dan beberapa pukulan dibuat di tepi yang berlawanan di satu tempat, kemudian loop dirobek dan bahan diinokulasi dengan sapuan paralel dari satu tepi cangkir ke tepi lainnya dengan interval 5-6 mm. Pada awal penaburan, ketika akan ada banyak mikroba pada lingkaran, mereka akan memberikan pertumbuhan yang konfluen, tetapi dengan setiap pukulan mikroba pada lingkaran, akan ada semakin sedikit, dan mereka akan tetap soliter dan memberikan isolasi koloni.
Menabur sesuai dengan metode Drygalski
Metode ini digunakan saat menabur bahan yang banyak diunggulkan dengan mikroflora (nanah, tinja, dahak). Untuk disemai menurut metode Drygalsky, spatula dan beberapa cangkir (3-4) diambil. Spatula adalah alat yang terbuat dari kawat logam atau anak panah kaca, ditekuk berbentuk segitiga atau berbentuk L. Bahan dimasukkan ke dalam cangkir pertama dengan loop atau pipet dan didistribusikan secara merata dengan spatula di atas permukaan media, dengan spatula yang sama, tanpa membakarnya, bahan dioleskan ke dalam media nutrisi di cangkir kedua, lalu di ketiga. Dengan inokulasi ini, piring pertama akan memiliki pertumbuhan yang konfluen, dan koloni yang terisolasi akan tumbuh di piring berikutnya.
Apabila berdasarkan gejala tertentu pada tanaman dan hasil pemeriksaan mikroskopis diduga penyebab penyakit tersebut adalah bakteri, maka langkah selanjutnya yang harus dilakukan adalah mengisolasinya.
Dalam hal ini, diasumsikan bahwa patogen terkontaminasi dengan organisme terkait, yaitu, ada populasi campuran. Untuk mendapatkan patogen sebagai koloni tumbuh yang terpisah, maserasi jaringan harus digoreskan ke media.
Penaburan stroke. Sejumlah kecil maserat jaringan tanaman yang mengandung bakteri diambil dengan loop inokulasi yang dikalsinasi dan dengan gerakan ringan, tanpa merusak permukaan agar-agar, diterapkan pada media nutrisi yang disiapkan dengan 4-6 pukulan. Setelah menyalakan kembali loop, cangkir dengan media diputar 90 ° ke kanan dan kemudian 4-6 pukulan lagi diterapkan dari pukulan kedua, jarum dinyalakan kembali dan inokulasi ketiga dilakukan. Ini mencapai pengenceran bahan awal, di mana bakteri, setelah inkubasi dalam termostat selama 48-72 jam pada 28 ° C, membentuk koloni terpisah dengan berbagai bentuk dan warna. Koloni kemudian dipindahkan untuk dipelajari lebih lanjut ke dalam tabung agar miring. Koloni diambil dengan loop yang dikalsinasi dan, dengan gerakan hati-hati dalam bentuk ular atau zigzag, diterapkan pada agar nutrisi.
Metode penuangan Koch. Metode penuangan Koch memastikan bahwa setiap koloni terbentuk dari satu sel bakteri. Cara terbaik adalah untuk menangguhkan bahan awal dalam air steril dan menerapkan metode Koch hanya dengan pengenceran ini. Sejumlah kecil suspensi dipindahkan ke dalam tabung reaksi pertama dengan media nutrisi yang didinginkan hingga 60 °C. Kemudian isi tabung dicampur dengan inokulum dengan cara diputar di antara telapak tangan. Selanjutnya, ambil tabung reaksi kedua, buka dengan hati-hati di atas nyala api pembakar dan pindahkan tiga bagian substrat ke dalamnya dari tabung reaksi pertama dengan loop besar. Isi tabung reaksi setelah menembak leher dan sumbat dituangkan ke dalam cawan petri pertama, sedikit membuka tutup cangkir cukup untuk memasukkan leher tabung reaksi di bawahnya. Segera setelah dituang, cawan ditutup dan media nutrisi didistribusikan secara merata dengan gerakan hati-hati.
Setelah benar-benar mencampur isi tabung reaksi kedua, ambil tabung reaksi ketiga dan pindahkan enam bagian substrat ke dalamnya dengan putaran dari yang kedua. Isi tabung reaksi dituangkan ke dalam cangkir, dan isi tabung reaksi, setelah dicampur, dituangkan ke dalam cangkir. Cawan dengan media diinkubasi dalam termostat pada 28 ° C, setelah beberapa hari bakteri yang terkandung dalam bahan awal membentuk koloni.
Pemuliaan serial. Jika, misalnya, perlu untuk mengisolasi bakteri dari tanah, maka pengenceran serial digunakan. Media nutrisi steril (15 ml per piring) dituangkan ke dalam piring, 0,1 ml dari tiga pengenceran suspensi terakhir diterapkan pada agar yang mengeras dan disebarkan ke permukaan dengan spatula kaca.
Untuk mengisolasi bakteri, 1 g tanah disuspensikan dalam 9 ml air, dikocok dengan baik, didiamkan selama beberapa detik, dan pengenceran serial dibuat dari suspensi. Dengan metode ini, jumlah mikroorganisme dalam setiap sampel dapat ditentukan.
Jika Anda menemukan kesalahan, sorot sepotong teks dan klik Ctrl+Enter.
Metode Pasteur Metode Koch Biologis Fisik
(memiliki sejarah (lamellar
nilai) kabel) Metode Kimia Shchukevich
Modern
Menabur dengan loop Menabur dengan spatula
(Metode Drigalski)
Metode untuk mengisolasi kultur murni (Skema 11):
1. Metode pelepasan mekanis berdasarkan pemisahan mikroba dengan penggilingan berturut-turut bahan uji di atas permukaan agar-agar.
sebuah) Metode Pasteur– sangat penting secara historis, menyediakan pengenceran berurutan dari bahan uji dalam media nutrisi cair dengan metode penggulungan
b) Metode Koch- metode tata letak piring - berdasarkan pengenceran berurutan bahan uji dengan agar pepton daging, diikuti dengan menuangkan tabung reaksi dengan bahan yang diencerkan ke dalam cawan Petri
di) Metode Drygalski- saat menabur bahan yang diunggulkan dengan mikroflora, gunakan 2-3 cangkir untuk penaburan berturut-turut dengan spatula.
G) Penaburan loop dengan pukulan paralel.
2. metode biologis berdasarkan sifat biologis patogen.
sebuah) Biologis- Infeksi hewan yang sangat sensitif, di mana mikroba berkembang biak dengan cepat dan menumpuk. Dalam beberapa kasus, metode ini adalah satu-satunya yang memungkinkan Anda untuk mengisolasi kultur patogen dari orang yang sakit (misalnya, dengan tularemia), dalam kasus lain lebih sensitif (misalnya, isolasi pneumokokus pada tikus putih). atau agen penyebab tuberkulosis pada marmut).
b) Bahan kimia– berdasarkan ketahanan asam mikobakteri. Untuk membebaskan material dari flora yang menyertainya, itu
diperlakukan dengan larutan asam. Hanya basil tuberkel yang akan tumbuh, karena mikroba toleran asam dibunuh oleh asam.
di) metode fisik berdasarkan ketahanan spora terhadap panas. Untuk mengisolasi kultur bakteri pembentuk spora dari
campuran, bahan dipanaskan pada 80 ° C dan diinokulasi pada media nutrisi. Hanya bakteri spora yang akan tumbuh, karena sporanya tetap hidup dan memberi pertumbuhan.
G) Metode Shchukevich- berdasarkan mobilitas tinggi proteus vulgar, mampu merayap pertumbuhan.
Cara pemindahan dari koloni ke agar miring dan BCH:
sebuah) Pemindahan dari koloni ke agar miring
Tutup cawan dibuka sedikit, bagian dari koloni individu dihilangkan dengan loop dingin yang dikalsinasi, tabung reaksi dengan agar miring steril dibuka, memegangnya di tangan kiri dalam posisi miring, sehingga permukaan cawan sedang dapat diamati. Lingkaran dengan kultur dipindahkan ke dalam tabung reaksi tanpa menyentuh dinding, digosokkan di atas media nutrisi, meluncur di atas permukaan dari satu ujung tabung reaksi ke ujung lainnya, menaikkan sapuan ke atas media - disemai dengan pukulan. Tabung ditutup dan, tanpa melepaskan, nama mikroba yang diunggulkan dan tanggal penaburan ditandatangani.
b) Mentransfer dari koloni ke kaldu daging-pepton
Teknik reseeding pada MPB pada dasarnya sama seperti saat disemai pada media padat. Saat menabur di BCH, loop dengan bahan di atasnya direndam dalam media. Jika bahannya kental dan tidak dikeluarkan dari loop, itu digosokkan pada dinding kapal, dan kemudian dicuci dengan media cair. Bahan cair yang dikumpulkan dengan Pasteur steril atau pipet ukur dituangkan ke dalam media nutrisi.
Sebagai hasil dari pekerjaan mandiri, siswa harus mengetahui:
1. Metode untuk mengisolasi biakan murni mikroorganisme
2. Metode budidaya mikroorganisme
Mampu untuk:
1. Keterampilan untuk mematuhi aturan rezim anti-epidemi dan tindakan pencegahan keselamatan
2. Desinfeksi bahan, rawat tangan
3. Siapkan preparat dari koloni bakteri
4. Mikroskop koloni
5. Mikroorganisme pewarnaan Gram
AKTIVITAS 8
SUBJEK. Metode untuk mengisolasi kultur murni (lanjutan). Aktivitas enzimatik bakteri dan metode studinya.
Relatif sedikit metode yang diketahui untuk mengisolasi bakteri sebagai kultur murni. Hal ini paling sering dilakukan dengan mengisolasi sel individu pada media pertumbuhan padat menggunakan metode inokulasi beruntun atau dengan menuangkan sedikit kultur cair ke dalam piring ( metode pengenceran). Namun, memperoleh koloni terpisah tidak selalu menjamin kemurnian kultur, karena koloni dapat tumbuh tidak hanya dari sel individu, tetapi juga dari kelompoknya. Jika mikroorganisme membentuk lendir, maka bentuk asing sering menempel padanya. Untuk pembersihan, sebaiknya menggunakan media non-selektif (MPA) karena kontaminan tumbuh lebih baik di atasnya dan lebih mudah dideteksi.
Mendapatkan koloni terisolasi pada media nutrisi padat dicapai baik dengan mengayak suspensi mikroorganisme dengan spatula ( Metode Koch), atau dengan bantuan lingkaran bakteriologis ( metode stroke yang melemahkan). Sebagai hasil dari pemisahan mekanis sel mikroba, masing-masing sel tersebut dapat menimbulkan koloni terisolasi dari satu spesies mikroba.
Pengayakan dengan spatula (metode Koch) diproduksi dalam urutan berikut:
1) pada permukaan media nutrisi dalam cangkir No. 1, setetes biakan pengayaan diteteskan dengan pipet steril dan didistribusikan dengan spatula steril;
2) spatula dikeluarkan, cawan ditutup dengan cepat dan spatula dipindahkan ke cawan No. 2 tanpa mensterilkannya. Mensimulasikan penyebaran kultur ke seluruh permukaan media dengan menyentuh permukaannya dengan sisi yang sama dari spatula yang sebelumnya digunakan untuk mendistribusikan sampel;
3) tindakan yang persis sama dilakukan dalam cangkir No. 3, setelah itu spatula disterilkan;
4) cangkir benih ditempatkan dalam termostat dan diinkubasi pada suhu optimal.
Setelah waktu tertentu, cangkir dikeluarkan dari termostat dan pertumbuhan mikroorganisme dipelajari. Biasanya, pertumbuhan bakteri yang berkelanjutan diamati pada cawan No. 1, koloni dicatat pada cawan berikutnya.
Pengayakan loop (metode depleting stroke) melibatkan inokulasi loop bakteriologis dari kultur pengayaan ke permukaan media agar dalam cawan Petri. Pada tahap pertama, loop dengan kultur diterapkan dengan serangkaian goresan paralel pada media agar (Gambar 4.2, TETAPI). Loop disterilkan, didinginkan pada bagian yang tidak diinokulasi dari media agar dan serangkaian goresan ditarik ke arah tegak lurus terhadap yang pertama (Gambar 4.2, B). Kemudian loop disterilkan lagi, didinginkan dan sapuan diterapkan ke arah PADA(Gambar 4.2), dan setelah sterilisasi berikutnya - ke arah G(Gambar 4.2). Cangkir ditempatkan di termostat dan setelah waktu tertentu hasilnya diperhitungkan. Biasanya pada stroke TETAPI dan B sejumlah besar koloni tumbuh (kadang-kadang pertumbuhan terus menerus), sedangkan pada guratan PADA dan G koloni terisolasi terbentuk.
Gambar 4.2 - Skema penyaringan bakteri dengan guratan untuk mendapatkan koloni terisolasi
Pengenceran serial dalam media padat- metode inokulasi piring yang paling sederhana, yang terdiri dari fakta bahwa setelah menginokulasi sampel ke dalam tabung reaksi dengan agar-agar cair dan dingin steril, media dicampur, dituangkan ke dalam cawan Petri dan dibiarkan memadat. Untuk mendapatkan koloni yang terisolasi dengan baik, dibuat serangkaian pengenceran sepuluh kali berturut-turut dan 1 ml sampel ditambahkan segera ke cawan, 15-20 ml medium agar cair ditambahkan dan dicampur dengan mengocok cawan. Kadang-kadang koloni individu direndam dalam agar-agar dan hanya dapat dihilangkan secara mekanis. Juga buruk bahwa bakteri berada di media pada suhu agar cair untuk beberapa waktu.
Kultur murni adalah kumpulan mikroorganisme dari spesies yang sama. Perolehan materi ini merupakan momen penting penelitian dalam penerapan teknik diagnostik laboratorium. Untuk mengisolasi kultur murni bakteri, apusan dari darah, dahak, tinja digunakan, purulen, serta bahan biologis lainnya diperiksa. Dalam kondisi alami (di udara, air, tanah), produk makanan, dalam mayat (manusia, hewan) terdapat asosiasi berbagai jenis mikroorganisme.
Pemisahan kultur murni penting untuk studi rinci tentang sifat-sifat mikroba: morfologi, kultur, biokimia, dan juga antigenik. Berdasarkan hasil metode penelitian tersebut, dimungkinkan untuk menetapkan bahwa patogen termasuk dalam jenis dan jenis tertentu, dengan kata lain, untuk melakukan identifikasi.
Prinsip-prinsip pemisahan biologis bakteri menyiratkan dengan mempertimbangkan karakteristik aktivitas vital mikroba untuk memilih metode penelitian yang paling optimal. Metode yang dipilih harus cocok dengan patogen dalam parameter tertentu.
- Jenis napas. Di antara bakteri, kelompok perwakilan aerobik dan anaerobik dibedakan. Untuk mendapatkan mikroba anaerob, bahan penelitian dipanaskan. Tahap selanjutnya adalah budidaya mikroba dalam kondisi anaerobik. Metode untuk memperoleh bakteri aerob dan anaerob berbeda.
- Sporulasi. Kemampuan beberapa bakteri untuk bersporulasi memastikan perlindungan dan keamanan mikroorganisme.
- Ketahanan bakteri terhadap efek agresif alkali dan asam. Ketahanan beberapa jenis bakteri terhadap zat ini memastikan pemurnian maksimum bahan uji dari campuran bakteri lain menggunakan larutan alkali atau asam.
- Mobilitas organisme bakteri. Untuk memisahkan kultur murni mikroorganisme motil, digunakan metode pemisahan kultur mikroba dalam setetes kondensat.
- Kerentanan mikroorganisme terhadap antibiotik, bahan kimia tertentu dan agen antimikroba lainnya. Untuk beberapa patogen, metode isolasi kultur menggunakan media nutrisi selektif (spesifik) paling disukai.
- Antibiotik. Memurnikan bahan dari mikroorganisme tambahan.
- Kemampuan bakteri untuk menembus kulit utuh. Sifat ini melekat pada beberapa varietas yang memiliki faktor agresi.
- Kerentanan hewan terhadap penyakit tertentu yang berasal dari infeksi.
Metode Penilaian Patogen
Sejumlah metode digunakan untuk mendapatkan biakan murni sel bakteri. Masing-masing digunakan dalam situasi tertentu dan memiliki langkah-langkah yang jelas berturut-turut untuk mendapatkan koloni patogen. Pertimbangkan yang paling populer.
teknik pasteur
Ini adalah pengenceran biakan murni dalam media pertumbuhan bakteri (konsistensi cair) hingga konsentrasi 1 sel per volume cairan. Metode seleksi ini sangat penting secara historis.
Teknik Koch
Juga dikenal sebagai teknik "plate spread". Merupakan pengenceran bahan penelitian dalam agar (dalam keadaan cair dengan suhu 48-50 °C). Selanjutnya, komposisi yang dihasilkan dituangkan ke dalam cawan Petri, di mana ia harus mengeras.
Tanaman biasanya dilakukan dari 3-4 pengenceran terakhir, karena sudah ada beberapa bakteri di sana. Jadi, selama pertumbuhan mikroba pada media nutrisi, koloni mikroorganisme yang terisolasi muncul, yang lahir dari sel induk tunggal. Kemudian, koloni yang diisolasi dapat dipilih dari kedalaman agar-agar dan dipindahkan ke media nutrisi segar. Langkah selanjutnya adalah identifikasi dan isolasi patogen.
Teknik Shukevich
Ini digunakan ketika diperlukan untuk mengisolasi kultur murni Proteus aerob atau mikroba lain yang ditandai dengan pertumbuhan "merayap". Tanam biakan dalam air kental di dasar agar miring.
Dengan metode pemisahan kultur murni ini, organisme seluler (Proteus) naik ke atas miring agar-agar, dan bentuk tidak bergerak tidak mengubah lokasinya pada media penyemaian. Dengan mensubkultur tepi atas kultur yang berkecambah, kultur bakteri murni dapat diperoleh.
Teknik Drygalsky
Metode Drygalsky cukup banyak digunakan dalam studi bahan biologis dengan mengencerkan biakan dalam tabung reaksi dengan kaldu atau garam.
Langkah selanjutnya: menggunakan spatula kaca steril, satu tetes larutan yang dihasilkan didistribusikan secara merata di atas permukaan media nutrisi di cangkir pertama. Kemudian, tanpa membakar spatula di atas api, mereka melakukan penaburan yang sama pada mangkuk ke-2 dan ke-3. Inti dari metode Drygalsky adalah bahwa dengan setiap penaburan kultur berikutnya, konsentrasi bakteri (aerob) semakin sedikit. Di piring ke-3, mereka didistribusikan cukup terpisah, setiap sel bakteri menimbulkan sel klon (dalam bentuk koloni terisolasi). Mereka disubkultur pada agar miring untuk akumulasi patogen.
Teknik Weinberg
Kesulitan tertentu disebabkan oleh isolasi biakan murni patogen anaerob jika mikroorganisme tidak mati saat kontak dengan molekul oksigen. Inti dari teknik ini adalah untuk menghilangkan mikroba anaerob (dalam komposisi bahan) dalam medium nutrisi cair yang agak dingin (45-50 ° C) (agarosed). Habiskan 6-10 pengenceran. Kemudian datang ke tahap berikutnya: perlu dengan cepat mendinginkan komposisi dalam tabung reaksi dan mengisi permukaannya dengan campuran petroleum jelly dan minyak parafin, yang mencegah penetrasi udara dan mendorong perkembangan kondisi anaerobik.
Dengan penaburan yang menguntungkan, koloni yang terisolasi berkecambah pada hari kedua, yang dapat dikeluarkan dari tabung dengan memanaskannya dengan kompor. Kultur dilingkarkan dari kolom agar yang dipotong untuk pemeriksaan lebih lanjut. Koloni yang dihasilkan ditempatkan dalam media nutrisi cair, di mana langkah-langkah untuk mengisolasi koloni patogen anaerobik dapat diselesaikan.
Teknik Hungate
Hal ini sering digunakan untuk mengisolasi mikroba aerobik dengan sensitivitas oksigen yang tinggi. Dalam melakukan isolasi kultur aerob, teknik memutar tabung reaksi digunakan.
Metode untuk inokulasi bakteri aerobik melibatkan pembiakan mereka pada media agar-agar cair. Adanya gas inert dalam tabung reaksi memungkinkan untuk menumbuhkan kolom terisolasi bakteri aerob sedemikian rupa sehingga kultur aerob yang diisolasi dapat terlihat dengan jelas bahkan dengan mata telanjang selama 2-3 hari.
mikromanipulator
Ini adalah teknik untuk mengisolasi sel bakteri individu menggunakan mikromanipulator. Sebuah mikromanipulator adalah perangkat khusus yang dapat digunakan untuk mengambil satu sel dari suspensi, dan juga untuk memberikan kemungkinan penyemaian kultur dalam tabung reaksi.
Identifikasi lebih lanjut dari patogen dilakukan dengan mempertimbangkan semua sifat patogen yang terdaftar (aerob dan anaerob), serta fitur interaksinya dengan berbagai zat.
