Untuk periode 9 Januari sampai 10 Oktober 2014. Departemen Keahlian Kedokteran Hewan dan Sanitasi dari Lembaga Anggaran Negara Federal "Tula MVL" menerima - 302 sampel air, dilakukan - 693 studi, di antaranya, untuk indikator Biro Desain, studi TKB-458.

Apa saja indikator-indikator ini, dan mengapa tepatnya mereka diperhatikan saat menilai air minum?

Air - komponen utama organisme apa pun, memainkan peran besar dalam hidupnya. Ini adalah habitat bagi berbagai mikroorganisme, termasuk patogen. Deteksi patogen adalah indikator pencemaran air yang paling akurat. Mikroorganisme ini termasuk bakteri dari kelompok Escherichia coli - E. coli (bakteri dari kelompok Escherichia coli, juga disebut bakteri colimorphic dan coliform) - sekelompok bakteri dari keluarga Enterobacteriaceae, yang secara kondisional dibedakan berdasarkan karakteristik morfologi dan budaya, digunakan oleh mikrobiologi sanitasi sebagai penanda kontaminasi tinja. Di antara bakteri koliform, keberadaan bakteri koliform umum dan termotoleransi (TCB, TKB) dalam air minum sering ditentukan, yang menunjukkan kualitas pasokan air yang buruk dan kemungkinan kontaminasi tinja dari sumber air, yang menciptakan potensi ancaman bagi perkembangan dan penyebarannya. dari penyakit usus.

Dalam sistem pasokan air dengan air yang disiapkan, bakteri coliform tidak boleh terdeteksi (SanPiN). Kehadiran organisme coliform menunjukkan pemurnian air yang tidak mencukupi, polusi sekundernya, dan adanya nutrisi di dalam air. Masuknya organisme coliform secara tidak sengaja ke dalam sistem diperbolehkan, tetapi tidak lebih dari 5% sampel yang diambil sepanjang tahun. Jika TKB, OKB) terdeteksi dalam sampel air minum, maka segera ditentukan dalam sampel berulang.

TKB (bakteri koliform termotoleransi). Ini adalah kelompok organisme coliform yang mampu memfermentasi laktosa pada 44-45 °C. Mereka cepat terdeteksi, oleh karena itu, mereka berfungsi untuk mengevaluasi efektivitas pemurnian air dari bakteri tinja.

OKB (Bakteri Coliform Umum) - Kelompok OKB mencakup sejumlah besar genera dari keluarga Enterobacteriacea, yang perwakilannya dapat memfermentasi laktosa: Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Pantoea, Rahnella, dll. Di antara mikroorganisme ini ada juga sejumlah besar saprofit yang hidup bebas, oleh karena itu, indikator TKB merupakan indikator (indikator) teknologi yang penting.

Dengan demikian, jika bakteri ini ditemukan dalam air minum, maka ini berarti ada kemungkinan pencemaran air oleh limbah.

Hasil penentuan indikator OKB, TKB disajikan sebagai CFU / 100 ml; bakteri coliform tidak boleh dideteksi dalam 100 ml air minum dalam studi tiga kali lipat dari volume yang dinormalisasi.

Bagaimanapun, peningkatan kandungan bakteri di dalam air adalah tanda peringatan, dan ketika itu muncul, sesuatu harus dilakukan dengan air.

Untuk melakukan studi mikrobiologis air minum, Anda dapat menghubungi Lembaga Anggaran Negara Federal Tula MVL.

Metode titrasi

Metode ini didasarkan pada akumulasi bakteri setelah inokulasi volume air tertentu dalam media nutrisi cair, diikuti dengan inokulasi ulang pada medium padat diferensial dengan laktosa dan identifikasi koloni dengan uji kultur dan biokimia. Dalam studi air minum dengan metode kualitatif, tiga volume 100 cm3 ditaburkan. Dalam studi air dengan tujuan | penentuan kuantitatif OKB dan TKB (analisis berulang), masing-masing 1,10 dan 100 cm3, diinokulasi - tiga volume setiap seri.

Inokulasi 10 dan 100 cm3 air masing-masing dilakukan dalam 1 dan 10 cm3 media akumulasi - LPS pekat tanpa indikator. Penaburan 1 cm3 sampel dilakukan dalam 10 cm3 LPS konsentrasi biasa. Inokulasi diinkubasi pada suhu 37 °C selama 48 jam.Setelah 24 jam, dilakukan penilaian awal terhadap inokulasi dalam media akumulasi. Dari wadah yang diamati adanya pertumbuhan (kekeruhan) dan pembentukan gas, bahan ditaburkan dengan lingkaran bakteriologis pada sektor media Endo untuk mendapatkan koloni yang diisolasi. Wadah tanpa tanda-tanda pertumbuhan dan pembentukan gas yang terlihat dibiarkan di termostat hingga 48 jam dan dilihat lagi untuk evaluasi akhir.

Hasil tanaman tanpa tanda-tanda pertumbuhan dianggap negatif, dan tidak dapat dipelajari lebih lanjut. Dari wadah yang diketahui kekeruhannya, penyemaian dilakukan pada sektor media Endo. Inokulasi pada media Endo diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 18-20 jam.Jika kekeruhan muncul, gas terbentuk dalam media akumulasi dan koloni tumbuh pada media Endo, khas untuk bakteri laktosa positif: merah tua atau merah, dengan atau tanpa kilau logam, cembung dengan pusat merah dan jejak pada media nutrisi, memberikan kesimpulan positif tentang keberadaan OKB dalam volume sampel tertentu.

Kehadiran OKB harus dikonfirmasi dalam kasus-kasus berikut:

ü hanya kekeruhan yang tercatat dalam media akumulasi;

ü Milik koloni laktosa-positif dipertanyakan.

Untuk mengonfirmasi keberadaan OKB, lakukan langkah-langkah berikut:

1. periksa keberadaan jejak pada media Endo setelah menghilangkan koloni yang mencurigakan dengan loop;

2. melakukan uji oksidase;

3. cek milik grup Gram;

4. Konfirmasi kemampuan pembentukan gas dengan menginokulasikan 1-2 koloni terisolasi dari semua jenis dari setiap sektor ke dalam media konfirmasi (LPS dengan indikator) diikuti dengan inkubasi inokulasi pada suhu 37 °C selama 24-48 jam.

Dengan tidak adanya koloni terisolasi, pengayakan pada media Endo dilakukan dengan metode konvensional. Pendapat negatif diberikan jika:

ü tidak ada tanda-tanda pertumbuhan di lingkungan akumulasi;

ü tidak ada pertumbuhan di sektor lingkungan Endo;

ü koloni yang tidak khas untuk bakteri coliform (transparan, dengan tepi bergerigi, tidak jelas) tumbuh pada sektor media Endo;

ü semua koloni positif oksidase;

semua koloni adalah gram positif;

ü pada uji konfirmasi pada media LPS dengan indikator, pembentukan gas tidak teramati.

Untuk menentukan TCB, bekerja dengan sektor media Endo di mana laktosa + koloni khas telah tumbuh. Dua atau tiga koloni terisolasi dari masing-masing jenis dari setiap sektor diinokulasi ke dalam tabung reaksi dengan salah satu media akumulasi laktosa, diinkubasi pada suhu 44 ° C selama sehari. Dengan terbentuknya gas pada media penimbunan laktosa, pertumbuhan bakteri positif laktosa pada media Endo, dan deteksi kemampuan fermentasi laktosa menjadi asam dan gas pada media konfirmasi laktosa pada suhu 44°C selama 24 jam , kesimpulan positif diberikan tentang keberadaan TKB dalam volume air ini. Dalam studi kualitatif (saat memeriksa tiga volume masing-masing 100 cm3, ketika OKB dan TKB terdeteksi, setidaknya dalam salah satu dari tiga volume, entri berikut dibuat: "OKB dan TBC ditemukan dalam 100 cm3."

Dalam penelitian dengan metode kuantitatif, NVCh, OKB dan TKB ditentukan menurut tabel khusus. Jika hasil penelitian untuk keberadaan OKB dan TKB di semua volume yang diperiksa negatif, kesimpulan dikeluarkan: "Tidak ditemukan OKB dan TKB dalam 100 cm3."

8.1. Penentuan jumlah total mikroorganisme yang membentuk koloni pada nutrien agar

8.1.1. Definisi konsep indikator

Metode tersebut menentukan dalam air minum jumlah total mikroorganisme mesofilik aerobik dan anaerobik fakultatif (FMC) yang mampu membentuk koloni pada media agar pada suhu 37 °C selama 24 jam, terlihat dengan peningkatan 2 kali lipat.

8.1.2. Melakukan analisis

Dari setiap sampel, setidaknya dua volume 1 ml diinokulasi.

Setelah pencampuran menyeluruh, sampel air ditambahkan 1 ml ke dalam cawan Petri steril, sedikit membuka tutupnya. Setelah menambahkan air, (8-12) ml (pada cangkir dengan diameter 90-100 mm) cair dan didinginkan hingga (45-49) ° C nutrisi agar dituangkan ke dalam setiap cangkir setelah membakar tepi piring di yang dikandungnya. Kemudian dengan cepat mencampur isi cangkir, merata di seluruh bagian bawah, menghindari pembentukan gelembung udara, mendapatkan agar-agar di tepi dan tutup cangkir. Prosedur ini dilakukan pada permukaan horizontal, di mana pelat dibiarkan sampai agar-agar mengeras.

Agar-agar cair untuk periode analisis ditempatkan dalam penangas air atau termostat yang mempertahankan suhu (45-49) °C.

Setelah agar-agar memadat, cawan dengan kultur ditempatkan terbalik dalam termostat dan diinkubasi pada suhu (37 ± 1)°C selama (24 ± 2) jam.

8.1.3. Hasil genap

Semua koloni yang tumbuh di piring, diamati pada perbesaran 2 kali lipat, dihitung. Hanya piring yang tidak lebih dari 300 koloni terisolasi yang tumbuh yang diperhitungkan.

Jumlah koloni pada kedua cawan dijumlahkan dan dibagi dua. Hasilnya dinyatakan sebagai jumlah unit pembentuk koloni (CFU) dalam 1 ml sampel air uji.

Jika penghitungan tidak memungkinkan pada salah satu dari 2 piring, hasilnya diberikan berdasarkan jumlah koloni pada satu piring. Jika dua cawan menunjukkan pertumbuhan koloni difus yang tidak menutupi seluruh permukaan cawan, atau lebih dari 300 koloni telah tumbuh dan pengujian tidak dapat diulang, hitung sektor cawan dan kemudian hitung ulang seluruh permukaan. Dalam kasus ini, protokol mencatat "jumlah CFU / ml - kira-kira".

Jika jumlah koloni di piring tidak memungkinkan, catat "pertumbuhan berkelanjutan" pada protokol.

8.2. Penentuan bakteri koliform umum dan termotoleran dengan filtrasi membran (metode utama)

8.2.1. Definisi konsep indikator

Bakteri koliform umum (CBC) adalah gram negatif, oksidase-negatif, batang bebas spora yang mampu tumbuh pada media laktosa diferensial, memfermentasi laktosa menjadi asam, aldehida dan gas pada suhu (37 ± 1) ° C selama (24- 48) jam.

Bakteri koliform termotoleran (TCB) adalah salah satu bakteri koliform yang umum, memiliki semua karakteristiknya dan, selain itu, mampu memfermentasi laktosa menjadi asam, aldehida dan gas pada suhu (44 ± 0,5) °C selama 24 jam.

8.2.2. Prinsip metode

Metode ini didasarkan pada penyaringan sejumlah volume air melalui filter membran, menanam tanaman pada media nutrisi diferensial dengan laktosa, dan identifikasi koloni selanjutnya dengan sifat kultur dan biokimia.

8.2.3. Melakukan analisis

8.2.3.1. Perintah penelitian

Dalam studi air minum, 3 volume 100 ml dianalisis.

Jika diperoleh hasil negatif yang stabil, 300 ml air dapat disaring melalui satu saringan.

Saat menyaring air dengan kualitas yang tidak diketahui, disarankan untuk menambah jumlah volume yang disaring untuk mendapatkan koloni terisolasi pada filter (misalnya, 10, 40, 100, 150 ml air).

Volume air yang diukur disaring melalui filter membran sesuai dengan persyaratan yang ditetapkan dalam paragraf 7.

Filter ditempatkan pada media Endo yang disiapkan sesuai dengan paragraf 5.4. Cawan dengan filter ditempatkan dalam termostat terbalik dan diinkubasi pada suhu (37 ± 1) °C selama (24 ± 2) jam.

Jika tidak ada pertumbuhan pada filter atau koloni bermembran, kenyal, berjamur, transparan, tidak jelas, memberikan jawaban negatif: tidak adanya OKB dan TKB dalam 100 ml air uji. Analisis selesai setelah 24 jam.

Jika pertumbuhan koloni khas laktosa-positif yang diisolasi ditemukan pada filter: merah tua, merah dengan atau tanpa kilau logam, atau jenis koloni serupa lainnya dengan jejak di bagian belakang filter, hitung jumlah koloni masing-masing jenis secara terpisah dan lanjutkan untuk mengkonfirmasi kepemilikan mereka pada OKB dan TKB.

Untuk mengkonfirmasi keberadaan OKB, periksa:

Semua koloni jika kurang dari 5 koloni tumbuh pada filter;

Setidaknya 3-4 koloni dari setiap jenis.

Untuk memastikan keberadaan TKB, semua koloni khas diperiksa, tetapi tidak lebih dari 10.

Setiap koloni terisolasi yang dipilih diperiksa untuk:

Adanya aktivitas oksidase;

Afiliasi Gram (mikroskop preparat pewarnaan Gram atau tes Gregersen);

Fermentasi laktosa menjadi asam dan gas.

8.2.3.2. Menyiapkan tes oksidase

Sepotong kertas saring ditempatkan dalam cawan Petri bersih dan dibasahi dengan 2-3 tetes reagen uji oksidase sesuai dengan paragraf 5.7. Sistem kertas jadi dibasahi dengan air suling. Bagian dari koloni yang diisolasi dengan map kaca atau gelung platinum (lingkaran logam yang terbuat dari nikrom dapat memberikan reaksi positif palsu) digoreskan pada kertas saring yang telah disiapkan. Reaksi dianggap positif jika noda coklat-ungu (bagian 5.7.1 opsi 1) atau biru (bagian 5.7.2 opsi 2 dan NIB oksidase) muncul dalam waktu 1 menit. Dengan reaksi negatif, warna di tempat penerapan kultur tidak berubah. Dengan hasil positif, koloni ini dikeluarkan dari penelitian lebih lanjut.

Jika, ketika memeriksa koloni yang diwarnai dengan warna merah tua, diperoleh hasil yang kurang jelas, kultur perlu dipindahkan dari media Endo ke media agar nutrisi. Setelah inkubasi, tes diulang.

8.2.3.3. Penentuan milik Gram

Apusan diambil dari koloni oksidase-negatif, diwarnai Gram, dan diperiksa secara mikroskopis.

Pada kaca objek yang dihilangkan lemaknya dengan alkohol, 1 tetes air suling diterapkan dalam satu lingkaran, sejumlah kecil kultur dari koloni yang dianalisis ditambahkan dan disebarkan di atas permukaan kaca. Apusan dikeringkan pada suhu kamar dan difiksasi tiga kali melalui nyala api pembakar. Sepotong kertas saring diterapkan pada preparasi dan larutan karbol violet gentian dituangkan di atasnya selama (0,5-1) menit, kertas dikeluarkan, larutan Lugol dituangkan selama (0,5-1) menit, larutan Lugol dikeringkan dan gelas dicuci dalam etil alkohol selama (0,5-1) menit, sampai pewarna berhenti keluar. Kemudian kaca dicuci bersih dengan air dan diwarnai selama (1-2) menit dengan fuchsin Ziel, diencerkan 1:10 dengan air suling. Setelah preparat dicuci dan dikeringkan, apusan diperiksa secara mikroskopis.

Persiapan reagen untuk pewarnaan Gram dijelaskan dalam Bagian 5.9.

Mikroorganisme Gram-negatif berwarna merah muda, Gram-positif berwarna biru. Bakteri Coliform merupakan bakteri batang gram negatif.

Pewarnaan Gram dapat diganti dengan tes Gregersen, yang tidak memerlukan penggunaan optik.

Uji Gregersen: dalam setetes larutan KOH 3% pada kaca objek, massa bakteri yang diambil dari media padat diemulsi. Setelah beberapa detik mengaduk dengan loop, suspensi menjadi lendir dan benang lendir meregang di belakang loop, yang menunjukkan bahwa kultur atau koloni uji termasuk spesies gram negatif. Pada bakteri gram positif, benang lendir tidak terbentuk - reaksinya negatif.

8.2.3.4. Penentuan fermentasi laktosa

Koloni terisolasi gram negatif oksidase-negatif yang tersisa diunggulkan secara paralel dalam dua tabung reaksi dengan media laktosa (hal. 5.6):

Untuk memastikan adanya OKB, biakan diinkubasi pada suhu (37 ± 1) °C selama 48 jam;

Untuk memastikan adanya TKB, dilakukan inokulasi pada media yang telah dipanaskan terlebih dahulu pada suhu (43-44) °C dan diinkubasi pada suhu (44 ± 0,5) °C selama 24 jam.

Perhitungan utama untuk pembentukan asam dan gas pada konfirmasi media semi-cair dan NIB (bagian 5.6) dimungkinkan setelah (4-6) jam.Jika asam dan gas terdeteksi, jawaban positif diberikan. Jika tidak ada asam dan gas atau hanya ada asam, tabung dengan biakan untuk penghitungan akhir TKB dibiarkan hingga 24 jam Tabung dengan tanaman untuk mengkonfirmasi keberadaan TTB setelah dilihat setelah 24 jam dan menerima hasil negatif dibiarkan untuk penghitungan akhir hingga 48 jam.

Jika koloni yang akan diperiksa berukuran kecil, lakukan subkultur pada media agar miring dan setelah inkubasi selama (18-24) jam, lakukan semua uji konfirmasi yang diperlukan.

8.2.3.5. Lakukan tes konfirmasi dalam overlay koloni atau pertumbuhan berkelanjutan

Jika koloni atau pertumbuhan terus menerus diamati pada sebagian atau seluruh permukaan filter, uji oksidase dilakukan dengan menempatkan filter membran pada lingkaran kertas saring dengan diameter lebih besar dari filter, yang dibasahi dengan reagen, atau pada NIB. cakram oksidase yang dibasahi dengan air suling. Ketika tanda-tanda pertama reaksi muncul, tetapi tidak lebih dari 5 menit kemudian, filter membran dipindahkan kembali ke media Endo. Setelah manifestasi reaksi yang jelas, hasilnya ditentukan. Jika muncul warna ungu-coklat atau biru (tergantung pada reagen yang digunakan), uji oksidase dianggap positif.

Jika semua koloni pada filter positif oksidase, mereka tidak diperhitungkan dan memberikan respons tentang tidak adanya OKB dan TKB dan menyelesaikan analisis.

Dalam kasus reaksi oksidase negatif, pengayakan dilakukan sampai koloni yang diisolasi diperoleh dan kepemilikannya pada OKB dan TKB dikonfirmasi sesuai dengan paragraf 8.2.3.3-8.2.3.4 (analisis kualitatif).

8.2.4. Akuntansi untuk hasil

8.2.4.1. Koloni gram negatif dihitung sebagai TBC untuk uji oksidase negatif dan fermentasi laktosa pada 37°C dengan produksi asam dan gas.

Koloni gram negatif dihitung sebagai TKB dengan uji oksidase negatif dan fermentasi laktosa pada suhu 44 °C dengan terbentuknya asam dan gas.

8.2.4.2. Dengan tidak adanya bakteri koliform umum dan termotoleransi pada semua filter, hasilnya dicatat sebagai “tidak ada CFU dari TCB dalam 100 ml” dan “tidak ada CFU dari TCB dalam 100 ml”.

8.2.4.3. Dalam hal identifikasi semua koloni yang mencurigakan tumbuh, jumlah unit pembentuk koloni TKB dan TKB dihitung pada semua filter dan hasil analisis CFU dinyatakan dalam 100 ml air.

Perhitungan dilakukan sesuai dengan rumus:

X adalah jumlah koloni dalam 100 ml;

volume air yang disaring melalui filter tempat akun disimpan;

a adalah jumlah total koloni yang dihitung pada filter ini.

1. Saat menabur 3 filter 100 ml, dua koloni tumbuh di 100 ml, tidak ada pertumbuhan pada dua filter lainnya. Jumlah total atau thermotoleran coliform adalah:

CFU OKB (TKB) dalam 100 ml

2. Saat menabur 10, 40, 100 dan 150 ml pada filter dengan volume tersaring 40 ml, tumbuh 4 koloni terisolasi, dengan volume tersaring 100-3 OKB. Filter dengan volume 10 ml dan 150 ml ditumbuhi terlalu banyak dan tidak dikenakan penghitungan. Jumlah total koloni OKB (TKB) pada filter tempat diperolehnya koloni terisolasi dijumlahkan dan dihitung ulang untuk volume 100 ml.

CFU dalam 100 ml

8.2.4.4. Jika selama pemeriksaan selektif koloni dari jenis yang sama diperoleh hasil yang tidak sama, maka jumlah OKB atau TKB di antara koloni jenis ini dihitung dengan rumus:

, di mana

X adalah jumlah bakteri yang dikonfirmasi dari jenis yang sama;

a adalah jumlah total koloni jenis ini;

- jumlah yang diuji;

c adalah jumlah koloni dengan hasil positif.

Hasil penghitungan untuk setiap jenis koloni dijumlahkan dan kemudian dihitung menurut pasal 8.2.4.3-8.2.4.4.

8.2.4.5. Hasil akhir diberikan: jumlah CFU TCB dalam 100 ml, di mana jumlah CFU TCB dalam 100 ml.

Hasil indikatif dapat dikeluarkan dengan mendeteksi koloni khas coliform pada media Endo, yang dibentuk oleh bakteri gram negatif oksidase-negatif. Jawaban akhir dikonfirmasi oleh hasil fermentasi laktosa.

8.2.4.6. Saat melapiskan koloni atau pertumbuhan berkelanjutan pada semua filter (klausul 8.2.3.5), dalam kasus konfirmasi milik OKB dan TKB, hasil kualitatif "OKB terdeteksi dalam 100 ml" dikeluarkan.

Jika semua koloni pada filter positif oksidase atau milik OKB dan TKB tidak dikonfirmasi, analisis selesai, protokol mengatakan "filter mengubur".

Dalam kedua kasus, analisis diulang.

8.3. Penentuan bakteri koliform umum dan termotoletal dengan metode titrasi

8.3.1. Definisi konsep indikator

Pengertian konsep indikator OKB dan TKB menurut pasal 8.2.1.

8.3.2. Area aplikasi

Metode titrasi dapat digunakan:

Dengan tidak adanya bahan dan peralatan yang diperlukan untuk melakukan analisis dengan filtrasi membran;

Saat menganalisis air dengan kandungan padatan tersuspensi yang tinggi;

Dalam kasus dominasi mikroflora asing di dalam air, yang mencegah produksi koloni terisolasi dari bakteri koliform umum pada filter.

8.3.3. Prinsip metode

Metode ini didasarkan pada akumulasi bakteri setelah inokulasi volume air yang tetap ke dalam media nutrisi cair, diikuti dengan pelapisan ulang pada media nutrisi padat diferensial dengan laktosa dan identifikasi koloni dengan uji kultur dan biokimia.

8.3.4. Melakukan analisis

Dalam studi tentang air minum metode kualitatif(pengawasan sanitasi dan epidemiologis saat ini, pengendalian produksi) menyuntikkan 3 volume 100 ml.

Saat mempelajari air untuk tujuan itu hitungan OKB dan TKB, ketika dianalisis kembali, diinokulasi: 3 volume 100 ml, 3 volume 10 ml, 3 volume 1 ml.

Setiap volume air uji diinokulasikan ke dalam media laktosa-pepton yang dibuat menurut ayat 5.5. Inokulasi 100 ml dan 10 ml air dilakukan dalam 10 dan 1 ml medium laktosa-pepton pekat, inokulasi 1 ml sampel dilakukan dalam 10 ml medium konsentrasi normal.

Tanaman diinkubasi pada (37 ± 1) °C selama 48 jam, tidak lebih awal dari 24 jam. inkubasi, penilaian awal tanaman dilakukan. Dari wadah, di mana adanya pertumbuhan (kekeruhan) dan pembentukan gas, loop bakteriologis diinokulasi ke dalam sektor media Endo (bagian 5.4.1) untuk mendapatkan koloni terisolasi.

Wadah tanpa pertumbuhan dan pembentukan gas dibiarkan dalam termostat dan akhirnya diperiksa setelah 48 jam.Tanaman tanpa tanda-tanda pertumbuhan dianggap negatif dan tidak perlu diteliti lebih lanjut. Dari wadah di mana kekeruhan dan pembentukan gas atau hanya kekeruhan dicatat, penyemaian dilakukan pada sektor media Endo.

Inokulasi pada media Endo diinkubasi pada suhu (37 ± 1) °C selama (18-20) jam.

Dengan pembentukan kekeruhan dan gas dalam media akumulasi dan pertumbuhan pada media Endo koloni khas bakteri laktosa-positif: merah tua atau merah, dengan atau tanpa kilau logam, cembung dengan pusat merah dan jejak pada nutrisi medium, mereka memberikan respons positif terhadap keberadaan bakteri coliform umum dalam volume sampel tertentu.

Kehadiran OKB harus dikonfirmasi:

Jika hanya kekeruhan dicatat dalam media akumulasi;

Jika tergolong koloni laktosa-positif dipertanyakan oleh peneliti. Dalam kasus-kasus ini:

Periksa jejak pada media Endo setelah mengulang koloni yang mencurigakan;

Lakukan uji oksidase sesuai dengan pasal 8.2.3.2;

Konfirmasi milik Gram menurut klausul 8.2.3.3;

Kemampuan pembentukan gas dikonfirmasi dengan inokulasi terisolasi 1-2 koloni masing-masing jenis dari masing-masing sektor pada media dengan laktosa sesuai klausul 5.6, diikuti dengan inkubasi inokulasi pada suhu (37 ± 1) ° C selama ( 24-48) jam.

Dengan tidak adanya koloni yang diisolasi, pengayakan dilakukan pada media Endo dengan metode bakteriologis konvensional.

Jawaban negatif diberikan jika:

Tidak ada tanda-tanda pertumbuhan di lingkungan akumulasi;

Tidak ada pertumbuhan di sektor lingkungan Endo;

Koloni yang tidak bercirikan bakteri koliform (transparan dengan tepi bergerigi, buram, dll) tumbuh pada sektor media Endo;

Semua koloni positif oksidase;

Semua koloni adalah Gram-positif;

Jika pembentukan gas tidak dicatat dalam uji konfirmasi pada media dengan karbohidrat.

Untuk menentukan bakteri koliform termotoleran bekerja dengan sektor media Endo di mana koloni khas laktosa-positif telah tumbuh. Menabur 2-3 koloni terisolasi dari setiap jenis dari setiap sektor dalam tabung reaksi dengan salah satu media laktosa yang disiapkan sesuai dengan paragraf 5.6.

Sebelum disemai, media dipanaskan dalam penangas air atau termostat hingga 44 °C. Segera setelah inokulasi, tabung ditempatkan dalam termostat dan diinkubasi pada suhu (44 ± 0,5) °C selama 24 jam, setelah (4-6) jam, diperbolehkan untuk melihat inokulasi.

Dengan terbentuknya gas pada media akumulasi, tumbuhnya bakteri laktosa positif pada media Endo, dan deteksi kemampuan bakteri tersebut dalam memfermentasi laktosa menjadi asam dan gas selama 24 jam pada suhu 44 °C, memberikan respon positif dengan adanya sampel air TKB dalam volume ini. Dalam semua kasus lain, mereka memberikan jawaban negatif.

Diperbolehkan untuk mempercepat keluarnya respon terhadap adanya TKB dengan menginokulasi 1 ml dari volume media akumulasi, dimana kekeruhan dan pembentukan gas dicatat dalam tabung reaksi dengan media laktosa-pepton dengan pelampung sesuai dengan ayat 5.6 dan dipanaskan sampai suhu 44 ° C. Tanaman disimpan dalam termostat pada suhu (44 ± 0,5) ° C selama 24 jam.Jika asam dan gas terdeteksi, mereka memberikan jawaban positif.

8.3.5. Akuntansi untuk hasil

Saat memeriksa 3 volume 100 ml, hasilnya dievaluasi secara kualitatif, dan jika OKB dan TKB terdeteksi dalam setidaknya satu dari 3 volume, entri dibuat dalam protokol "ditemukan dalam 100 ml".

Dalam kajian metode kuantitatif, angka kemungkinan terbesar (MPN) dari OKB dan TKB ditentukan sesuai Tabel. 1.1 aplikasi 1.

Hasilnya dilaporkan tanpa selang kepercayaan.

Dalam kasus tanggapan negatif terhadap keberadaan TKB dan TKB di semua volume yang diselidiki, kesimpulan dikeluarkan dalam protokol "tidak ditemukan dalam 100 ml".

8.4. Penentuan spora clostridia pereduksi sulfit

8.4.1. Definisi konsep indikator

Klostridia pereduksi sulfit adalah mikroorganisme berbentuk batang anaerob pembentuk spora yang mereduksi natrium sulfit pada agar besi-sulfit pada suhu (44 ± 1) ° C selama (16-18) jam.

8.4.2. Prinsip metode

Metode ini didasarkan pada penanaman tanaman dalam agar besi sulfit dalam kondisi yang mendekati anaerobik dan menghitung jumlah koloni hitam.

8.4.3. Melakukan analisis

8.4.3.1. Sampel air sebanyak 20 ml dipanaskan dalam penangas air dalam tabung reaksi pada suhu (75 ± 5)°C selama 15 menit untuk menghilangkan bentuk vegetatif.

Dalam studi air terklorinasi, pemanasan sampel dapat dihilangkan.

Dari setiap sampel air minum, dibiakkan atau disaring sebanyak 20 ml. Jika perlu, pilih volume sehingga tidak lebih dari 10-15 koloni tumbuh di tanaman (pada filter). Dalam hal ini, mereka berpedoman pada hasil penelitian sebelumnya.

Penyaringan air dilakukan sesuai dengan persyaratan yang ditetapkan dalam ayat 7.

8.4.3.2. Penentuan dengan penyaringan dalam tabung reaksi

Sebelum inokulasi, tabung dengan agar besi sulfit yang disiapkan menurut 5.8 dilebur dalam penangas air (jangan sampai mendidih!). Selama penaburan, media tetap dipanaskan hingga (70-80) °C dalam penangas air.

Setelah menyaring volume air yang telah ditetapkan, filter membran diambil dengan pinset flambéed dengan dua ujung yang berlawanan dan, ditekuk dalam bentuk tabung, ditempatkan dalam tabung reaksi dengan agar-agar panas. Sisi filter dengan bakteri menetap menghadap ke dalam. Dalam hal ini, filter diluruskan dan terletak di sepanjang dinding tabung reaksi.

Segera setelah inokulasi, tabung dengan agar dan filter untuk menciptakan kondisi anaerobik didinginkan dengan cepat dengan menempatkannya dalam wadah berisi air dingin. Budidaya tanaman pada (44 ± I) °C selama (16-18) jam.

8.4.3.3. Penentuan dengan penyaringan dalam cawan Petri

Cawan petri dengan diameter (55-60) mm diisi dengan lapisan tipis agar besi-sulfit. Setelah penyaringan, letakkan filter dengan permukaan filter di bawah media nutrisi yang telah dipadatkan sehingga tidak ada gelembung udara di bawah filter. Kemudian tuangkan agar besi sulfit cair ke atas cawan sehingga tutupnya pas dengan media untuk menciptakan kondisi anaerobik. Budidaya tanaman pada (44 ± 1) ° C selama (16 - 1 8) jam.

8.4.3.4. Penentuan dengan penyemaian langsung

Botol agar besi sulfit dan sampel air disiapkan seperti yang dijelaskan dalam 8.4.3.1.

Tambahkan ke tabung reaksi steril:

10 ml dalam 2 tabung reaksi (volume minimal 30 ml) atau

5 ml dalam 4 tabung reaksi (masing-masing 15 ml).

Tanaman dituangkan dengan agar besi-sulfit panas dalam jumlah yang melebihi volume air sebanyak 2 kali. Tuang media di sepanjang dinding tabung reaksi, hindari pembentukan gelembung udara. Setelah itu, tabung didinginkan secara cepat dengan menempatkannya dalam wadah berisi air dingin untuk menciptakan kondisi anaerobik. Inokulasi diinkubasi pada (44 ± 1) °C selama (16-18) jam.

8.4.4. Akuntansi untuk hasil

Hanya tanaman di mana koloni terisolasi diperoleh yang dikenakan penghitungan kuantitatif. Koloni hitam dihitung, tumbuh baik pada filter dan ketebalan media nutrisi.

Hasil analisis dinyatakan sebagai jumlah unit pembentuk koloni (CFU) spora clostridia pereduksi sulfit dalam 20 ml air.

Jika tidak ada pertumbuhan koloni hitam pada semua filter, jawabannya “tidak ditemukan dalam 20 ml air”.

Jika tidak mungkin untuk menghitung koloni karena pertumbuhan konfluen, hasilnya dinilai kualitatif, catatan protokol "ditemukan dalam 20 ml". Jika perlu, untuk mendapatkan hasil kuantitatif, analisis diulang.

8.5. Definisi Coliphages

8.5.1. Definisi konsep indikator

Coliphages adalah virus bakteri yang mampu melisiskan E. coli dan terbentuk pada suhu (37 ± 1)°C setelah (18 ± 2) jam zona lisis rumput bakteri (plak) pada nutrisi agar.

8.5.2. Metode titrasi untuk penentuan kolifag

8.5.2.1. Prinsip metode

Penentuan kolifag dalam air minum terdiri dari akumulasi awal kolifag dalam media pengayaan pada kultur E. coli dan identifikasi selanjutnya zona lisis (pencerahan) dari rumput E. coli pada agar nutrisi.

8.5.2.2. Area aplikasi

Metode ini dimaksudkan untuk pemantauan kualitas air minum saat ini.

8.5.2.3. Persiapan kultur uji E. coli K12 StrR.

Pada semua tahap penelitian, suspensi bakteri yang dibuat sebagai berikut digunakan: biakan E. coli diinokulasi ke dalam tabung reaksi dengan agar nutrien miring dengan streptomisin (bagian 5.3.5). Setelah (18 ± 2) jam inkubasi pada suhu (37 ± 1) ° C, cuci bakteri dari sendi dengan 5 ml saline steril (larutan NaCl 0,85%) dan, sesuai dengan standar kekeruhan, buat suspensi E. coli pada konsentrasi 109 sel bakteri dalam 1 ml.

Diperbolehkan menggunakan kultur kaldu E. coli selama 4 jam yang diperoleh dengan menumbuhkan dalam termostat pada suhu 37°C. Konsentrasi 109 sel bakteri E. coli terkandung dalam 2 ml.

8.5.2.4. Melakukan analisis kualitatif

10 ml kaldu nutrisi 10 kali lipat (disiapkan sesuai dengan pasal 5.2.2) dan 1 ml cucian siap biakan kultur uji atau 2 ml kultur kaldu 4 jam (klausul 8.5.2.3) ditambahkan ke 100 ml sampel air yang diteliti.

Untuk kontrol kultur, 0,1 ml pencuci E. coli (atau 0,2 ml kultur kaldu 4 jam) ditempatkan dalam cawan Petri dan ditutup dengan agar nutrisi.

Sampel air uji (100 ml) dan cawan Petri dengan kontrol E. coli ditempatkan dalam termostat dan diinkubasi pada suhu (37 ± 1) °C selama (18 ± 2) jam.

Setelah inkubasi, 10 ml sampel air uji dituangkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 1 ml kloroform.

Tabung reaksi ditutup dengan sumbat karet atau silikon steril, dikocok kuat-kuat untuk mendistribusikan kloroform secara merata di atas volume sampel, dan dibiarkan pada suhu kamar selama minimal 15 menit sampai kloroform benar-benar mengendap.

Dalam agar-agar Nutrien yang telah dilelehkan dan didinginkan hingga (45-49) °C, tambahkan pembersih bakteri E. coli yang telah disiapkan (klausul 8.5.2.3) dengan kecepatan 1,0 ml pencucian (atau 2 ml kaldu 4 jam kultur) per 100 ml agar.

Pindahkan 1 ml sampel yang diberi kloroform (tanpa menyentuh kloroform) ke dalam cawan petri steril dengan pipet dari tabung reaksi dan isi dengan campuran agar nutrien yang dilelehkan dan didinginkan hingga (45-49) ° C dengan volume (12-15) ml, serta satu cawan Petrid tambahan untuk mengontrol kultur E. coli dan kocok perlahan agar sampel air dan agar-agar tercampur rata. Untuk pemadatan lengkap, cangkir dibiarkan di atas meja pada suhu kamar selama 10 menit. Setelah mengeras, cawan dibalik dan ditempatkan dalam termostat selama (18 ± 2) jam pada suhu 37 °C.

Saat melakukan serangkaian sampel, kontrol umum ditempatkan untuk seluruh rangkaian.

Akuntansi untuk hasil

Lihat tanaman yang dilakukan dalam cahaya yang ditransmisikan.

Sampel dianggap positif dengan adanya lisis lengkap, pembersihan beberapa plak, satu plak di piring dengan sampel air tanpa adanya zona lisis pada pelat kontrol.

Catatan protokol analisis: ditemukan atau tidaknya kolifag dalam 100 ml air (hasil kualitatif).

Jika ada zona lisis dalam kontrol kultur, hasilnya dianggap tidak valid.

8.5.2.5. Melakukan Analisis Kuantitatif

Tuangkan sampel air yang telah diperiksa sebanyak 100 ml ke dalam 6 volume: 1 botol 50 ml dan 5 tabung reaksi 10 ml. Ke dalam 50 ml sampel, tambahkan 5 ml kaldu nutrisi 10 kali lipat (menurut paragraf 5.2.2) dan 0,5 ml pencucian (atau 1 ml kultur kaldu 4 jam) bakteri E. coli (paragraf 8.5 .2.3). Ke dalam setiap 10 ml sampel, tambahkan 1 ml kaldu nutrisi sepuluh kali lipat dan 0,1 ml pencuci (atau 0,2 ml kultur kaldu 4 jam) bakteri E. coli.

Untuk kontrol kultur, OD ml bakteri pencuci (atau 0,2 ml kultur kaldu 4 jam) E. coli ditempatkan dalam cawan Petri dan diisi dengan agar nutrisi.

Tanaman diinkubasi pada suhu (37 ± 1) °C selama 18 ± 2 jam.

Setelah inkubasi, tuangkan 10 ml dari volume 50 ml ke dalam tabung reaksi. Tambahkan 1 ml kloroform ke semua 6 volume uji. Tutup tabung reaksi dengan sumbat karet atau silikon steril, kocok kuat-kuat untuk mendistribusikan kloroform secara merata di atas volume sampel, dan biarkan pada suhu kamar selama minimal 15 menit untuk mengendapkan kloroform.

Dalam agar nutrisi yang sebelumnya dilelehkan dan didinginkan hingga (45-49) °C, tambahkan bakteri E. coli yang telah dicuci (bagian 8.5.2.3) dengan kecepatan 1,0 ml pencucian (atau 2 ml kaldu 4 jam kultur) per 100 ml agar. Tuang campuran yang sudah disiapkan ke dalam cawan Petri: 1 cangkir untuk mengontrol kultur E. coli untuk lisogenisitas dan satu cangkir untuk setiap sampel air yang diteliti. Dengan analisis simultan dari beberapa sampel air, satu kontrol kultur E. coli ditempatkan.

Setelah agar-agar mengeras, cawan yang dimaksudkan untuk inokulasi sampel dibagi menjadi 6 sektor, diberi label sesuai dengan volume yang dipelajari. Dengan pipet Pasteur (mikropipet atau lingkaran bakteriologis dengan gerakan memanjang), oleskan 1 tetes cairan supernatan (tanpa kloroform) ke setiap sektor dari tabung reaksi yang sesuai.

Setelah tetes mengering, tempatkan cangkir dengan sampel uji dan cangkir kontrol dalam termostat pada (37 ± 1) °C selama (18 ± 2) jam.

Akuntansi untuk hasil

Hasilnya dilihat dalam cahaya yang ditransmisikan.

Akuntansi dilakukan dengan adanya zona pencerahan (lisis) pada sektor rumput E. coli.

Saat menggunakan metode penyemaian tetes dengan pipet, zona lisis terbentuk dalam bentuk bintik bulat atau plak individu. Saat menabur stroke longitudinal dengan loop bakteriologis, lisis dicatat di sepanjang stroke.

Sampel dianggap positif jika terdapat zona lisis pada setidaknya satu sektor tanpa adanya zona lisis pada pelat kontrol.

Penilaian dilakukan sesuai dengan tabel angka yang paling mungkin (MPN) dari unit pembentuk plak (PFU) (Tabel 1.2). Protokol analisis menunjukkan jumlah kolifag yang paling mungkin dalam 100 ml air dan kisaran kemungkinan fluktuasi: LF PFU (batas bawah - batas atas) kolifag dalam 100 ml. Hasilnya semi-kuantitatif.

Jika ada zona lisis di piring kontrol, hasilnya dianggap tidak valid.

8.5.3. Metode langsung untuk menentukan coliphages

.satu. Prinsip metode

Penentuan kolifag dalam air minum terdiri dari studi volume air yang dinormalisasi (100 ml) dengan inokulasi langsung dan selanjutnya pendaftaran zona lisis (plak) pada rumput E. coli di cawan Petri dengan agar nutrisi.

8.5.3.2. Domain

Metode langsung mengisolasi coliphages dari air dilakukan secara paralel dengan metode titrasi dalam penelitian sesuai indikasi epidemi.

8.5.3.3. Melakukan analisis

Dalam nutrien agar dengan konsentrasi ganda (hal. 5.3.2), dicairkan dan didinginkan hingga (45-49) ° C, tambahkan pencucian E. coli (hal. 8.5.2.3) dengan kecepatan 2,0 ml pencucian (atau 4 ml kultur kaldu 4 jam) untuk setiap 100 ml agar, campur. Tuang 100 ml air yang diperiksa ke dalam 20 ml tabung reaksi besar, panaskan sampai (35-44) °C dan segera (tidak lebih dari 5 menit setelah mencapai suhu yang diperlukan) tuangkan ke dalam 5 cawan Petri dan segera tambahkan 20 ml ke setiap cawan campuran agar-agar dengan kultur E. coli.

Untuk mengontrol biakan E. coli, tambahkan 20 ml air keran steril, yang telah dipanaskan hingga (35-44) ° C, ke dalam satu cawan Petri, tuangkan 20 ml agar yang telah disiapkan dengan E. coli dan aduk perlahan.

Aduk isi cangkir dengan lembut dan biarkan pada suhu kamar sampai mengeras. Tempatkan piring dengan agar beku terbalik dalam termostat dan inkubasi pada suhu (37 ± 1) °C selama (18 ± 2) jam.

Akuntansi untuk hasil

Melihat tanaman dilakukan dalam cahaya yang ditransmisikan.

Pencatatan hasil dilakukan dengan cara menghitung dan menjumlahkan plak yang ditanam pada 5 cawan petri. Hasilnya dinyatakan dalam unit pembentuk plak (PFU) per 100 ml sampel air. Seharusnya tidak ada plak di piring kontrol.

Paling sering, zona lisis terlihat seperti bintik-bintik transparan dengan latar belakang halaman kultur uji nutrien agar dalam bentuk plak bulat terisolasi (dari 1 hingga 5-7) mm dengan batas yang jelas atau terhapus.

Pada konsentrasi fag yang tinggi, pola lisis yang berbeda diamati.

Penggabungan koloni-koloni negatif menghasilkan halaman rumput E. coli yang “keren”, pertumbuhan koloni tunggal E. coli dengan latar belakang lisis yang terus-menerus, atau sama sekali tidak ada pertumbuhan pada cawan.

Dengan inokulasi langsung, lisis dimungkinkan, ditutupi oleh agar-agar yang dipadatkan secara tidak homogen, serta ditutup dengan mikroflora yang menyertainya. Tetesan kondensat dan agar yang tidak homogen dari inokulasi langsung dapat menyebabkan pembentukan artefak di halaman E. coli yang secara visual menyerupai lisis.

Perhitungan awal hasil dapat dilakukan setelah (5-6) jam inkubasi. Pada tahap ini, dengan adanya zona bening lisis, jawaban awal tentang keberadaan kolifag dalam air dapat dikeluarkan.

Pencatatan kuantitatif akhir inokulasi langsung dilakukan setelah (18 ± 2) jam, hasilnya dinyatakan sebagai jumlah unit pembentuk plak (PFU) per 100 ml sampel air.

Jika pertumbuhan plak konfluen dicatat dan penghitungan sulit, maka hasil kualitatif dapat dikeluarkan sesuai dengan penyemaian langsung: "ditemukan dalam 100 ml air".

Jika hasil negatif diperoleh saat bekerja dengan metode langsung, jawaban akhir dikeluarkan sesuai dengan hasil metode titradion.

Jika terdapat zona lisis pada cawan kontrol, maka hasil penelitian dianggap tidak valid.

8.5.4. Menyiapkan kontrol

8.5.4.1. Kontrol negatif

Kontrol negatif menegaskan tidak adanya kontaminasi fag media nutrisi, gelas laboratorium, peralatan pada tahap persiapan dan analisis, dan juga memungkinkan Anda untuk mengevaluasi kemampuan kultur uji E . coli untuk memberikan rumput yang seragam.

Kontrol negatif adalah studi tentang air keran steril, yang dilakukan serupa dengan sampel air yang dianalisis. Jadi, ketika menganalisis air dengan metode titrasi, 10 ml air keran steril ditambahkan ke tabung reaksi tambahan. Saat menganalisis air dengan inokulasi langsung, 20 ml air keran steril ditambahkan ke cawan Petri keenam tambahan.

Tanaman tambahan diperiksa untuk kolifag dengan cara yang sama seperti sampel utama.

Saat menganalisis serangkaian sampel, mungkin ada satu kontrol negatif untuk setiap jenis analisis: titrasi dan langsung. Dalam hal ini, kontrol negatif dipentaskan setelah memproses semua sampel dari seri ini.

Jika ditemukan plak kolifag pada pelat kontrol negatif, maka hasil penelitian seluruh rangkaian sampel air menjadi tidak valid.

Perlu dilakukan pengecekan sterilitas alat laboratorium, peralatan, media nutrisi, dan inokulasi kontrol ulang untuk kemurnian strain uji E. coli K12 F + StrR.

Frekuensi kontrol negatif - 1 kali per hari.

8.5.4.2. Metode untuk mengkonfirmasi sifat fag dari lisis

Dalam kasus yang meragukan, ketika bekerja dengan metode titrasi dan langsung, perlu untuk melakukan inokulasi kontrol untuk mengkonfirmasi sifat fag dari lisis.

Untuk tujuan ini, loop bakteriologis digunakan untuk menghilangkan bagian agar-agar yang dicurigai sebagai kolifag, menempatkannya dalam 5 ml kaldu nutrisi, di mana setetes kultur uji E. coli ditambahkan dan diinkubasi pada suhu 37 ° C selama (16 -18) jam Kultur yang dihasilkan diperlakukan dengan kloroform dan diperiksa keberadaan fag. Pembibitan dilakukan dengan loop atau pipet pada sektor agar nutrisi dengan cara yang sama seperti yang dijelaskan dalam paragraf 8.5.2.5. Lisis pada salah satu sektor dianggap sebagai konfirmasi keberadaan fag.

Komentar di atas meja. Untuk memperkirakan jumlah OKB dan TKB dalam 100 cm 3 air, setidaknya tiga volume air (masing-masing 100 cm 3) harus dianalisis. Saat mengevaluasi OKB dan KIA, tidak diperbolehkan melebihi standar pada 95% sampel yang diambil sepanjang tahun. Coliphages ditentukan hanya dalam sistem pasokan air dari sumber permukaan sebelum air disuplai ke jaringan distribusi, hal yang sama berlaku untuk keberadaan kista Giardia. Kandungan spora clostridia pereduksi sulfit ditentukan hanya ketika mengevaluasi efektivitas teknologi pengolahan air. Dalam hal deteksi TKB, OKB, coliphages, atau setidaknya salah satu indikator yang ditunjukkan, studi darurat air yang berulang dilakukan lagi untuk TKB, OKB dan coliphages. Secara paralel, air diuji untuk klorida, amonium nitrogen, nitrat dan nitrit. Jika pada sampel yang diambil kembali ditemukan lebih dari dua TKB per 100 cm3 dan/atau TKB dan/atau kolifag, maka dilakukan penelitian untuk bakteri patogen golongan usus dan/atau enterovirus. Studi yang sama untuk enterobakteri patogen dan enterovirus dilakukan sesuai dengan indikasi epidemiologis dengan keputusan pusat teritorial Rospotrebnadzor.

Bakteri koliform termotoleran (TCB) adalah bagian dari OKB dan memiliki semua karakteristiknya, tetapi, tidak seperti mereka, mereka mampu memfermentasi laktosa menjadi asam, aldehida dan gas pada suhu +44 ° C selama 24 jam.Dengan demikian, TKB berbeda dari OKB dalam kemampuan untuk memfermentasi laktosa menjadi asam dan gas pada suhu yang lebih tinggi.

Indikator yang akan ditentukan, jumlah dan frekuensi studi tergantung pada jenis sumber air bersih, jumlah penduduk yang mendapatkan air dari sistem penyediaan air ini. Data ini diberikan dalam SanPiN 2.1.4.1074–01. Dalam pedoman untuk analisis sanitasi dan mikrobiologi air minum ( MUK 4.2.1018-01 dari Kementerian Kesehatan Federasi Rusia) metode pengendalian sanitasi dan mikrobiologis kualitas air minum diatur.

Jumlah total mikroorganisme- ini adalah jumlah total mikroorganisme mesofilik (memiliki suhu optimum +37 °C) aerobik dan anaerobik fakultatif (MAFAnM) terlihat dengan peningkatan dua kali lipat, yang mampu membentuk koloni pada nutrien agar pada suhu +37 °C selama 24 jam Untuk mengidentifikasi indikator ini dalam 1 ml air ditambahkan ke cawan petri steril dan diisi dengan agar-agar pepton daging yang meleleh (suhu tidak lebih tinggi dari +50 ° C), dan sehari kemudian jumlah koloni yang tumbuh dihitung .

PENENTUAN OKB DAN TKB DENGAN METODE FILTER MEMBRAN

Metode ini didasarkan pada penyaringan volume air tertentu melalui filter membran. Untuk tujuan ini, filter dengan diameter pori 0,45 mikron dan ukuran diameter 35 atau 47 mm digunakan (filter domestik "Vladipor" MFAS-S-1, MFAS-S-2, MFAS-MA (No. 4- 6) atau asing - ISO 9000 atau EN 29000). Filter membran disiapkan untuk analisis sesuai dengan instruksi pabrik.

PENENTUAN OKB DAN TKB DENGAN METODE TITRATING

Metode ini didasarkan pada akumulasi bakteri setelah inokulasi volume air tertentu dalam media nutrisi cair, diikuti dengan inokulasi ulang pada medium padat diferensial dengan laktosa dan identifikasi koloni dengan uji kultur dan biokimia. Dalam studi air minum dengan metode kualitatif (pengawasan sanitasi dan epidemiologis saat ini), tiga volume 100 cm 3 ditaburkan. Dalam studi air untuk mengukur OKB dan TKB (analisis ulang), 100, 10 dan 1 cm 3 diinokulasi, masing-masing - tiga volume setiap seri.

STUDI SANITASI-MIKROBIOLOGI TANAH

Tanah menyediakan tempat berlindung bagi berbagai mikroorganisme. Jadi, jumlah bakteri saja di dalam tanah mencapai 10 miliar sel per 1 g. Mikroorganisme berpartisipasi dalam pembentukan tanah dan pemurnian tanah sendiri, dalam sirkulasi nitrogen, karbon, dan unsur-unsur lain di alam. Selain bakteri, jamur, protozoa, dan lumut kerak yang merupakan simbiosis jamur dengan cyanobacteria, hidup di dalamnya. Ada relatif sedikit mikroorganisme di permukaan tanah karena efek berbahaya dari sinar UV, pengeringan dan faktor lainnya. Lapisan tanah yang subur setebal 10-15 cm mengandung jumlah mikroorganisme terbesar. Semakin dalam, jumlah mikroorganisme semakin berkurang hingga menghilang pada kedalaman 3-4 m Komposisi mikroflora tanah tergantung pada jenis dan kondisinya, komposisi vegetasi, suhu, kelembaban, dll. Sebagian besar mikroorganisme tanah dapat berkembang pada pH netral, kelembaban relatif tinggi, dan suhu dari 25 hingga 45 °C.

Batang pembentuk spora hidup di dalam tanah basil dan Closlridium. Basil non-patogen (Vas. megaterium, Vas. subtilis dan sebagainya.). bersama dengan Pseudomonas, Proteus dan beberapa bakteri lainnya, mereka bersifat amonifikasi, merupakan kelompok bakteri pembusuk yang menmineralisasi zat organik. Batang pembentuk spora patogen (agen penyebab antraks, botulisme, tetanus, gangren gas) dapat bertahan lama, dan beberapa bahkan berkembang biak di tanah ( Klostridiumbotulinum). Tanah juga merupakan habitat bagi bakteri pengikat nitrogen yang mengasimilasi nitrogen molekuler. (Azotobacter, Azomonas, Mycobacterium) dan sebagainya.). Varietas cyanobacteria yang mengikat nitrogen, atau ganggang biru-hijau, digunakan untuk meningkatkan kesuburan sawah.

Anggota keluarga bakteri usus (fam. Enterobacteriaceae) - E. coli, agen penyebab demam tifoid, salmonellosis dan disentri, sekali di tanah dengan kotoran, mati. Di tanah yang bersih, Escherichia coli dan Proteus jarang ditemukan; Deteksi bakteri kelompok Escherichia coli (bakteri coliform) dalam jumlah yang signifikan merupakan indikator kontaminasi tanah dengan kotoran manusia dan hewan dan menunjukkan kerugian sanitasi dan epidemiologisnya karena kemungkinan penularan patogen infeksi usus. Jumlah protozoa di dalam tanah berkisar antara 500 hingga 500.000 per 1 g tanah. Memakan bakteri dan residu organik, protozoa menyebabkan perubahan komposisi bahan organik tanah. Ada juga banyak jamur di tanah, yang racunnya, terakumulasi dalam makanan manusia, menyebabkan keracunan - mikotoksikosis dan aflatoksikosis.

Hasil penelitian tanah diperhitungkan ketika menentukan dan memprediksi tingkat bahayanya terhadap kesehatan dan kondisi kehidupan penduduk di pemukiman (sesuai dengan indikasi epidemiologi), pencegahan penyakit menular dan tidak menular (pengawasan sanitasi preventif) , pengawasan sanitasi saat ini terhadap benda - benda yang secara langsung atau tidak langsung mempengaruhi lingkungan .

Saat melakukan pengawasan sanitasi saat ini terhadap keadaan tanah, mereka terbatas pada analisis sanitasi dan mikrobiologis singkat yang menunjukkan keberadaan dan tingkat kontaminasi tinja. Indikator yang termasuk dalam kelompok ini juga mencirikan proses pemurnian diri tanah dari polutan organik dan enterobakteri. Analisis sanitasi dan mikrobiologis tanah yang lengkap dilakukan dalam bentuk pengawasan sanitasi preventif. Dampak polutan kimia pada biogeocenosis melibatkan studi tindakan bakterisida mereka pada mikrobiota tanah, sebagai akibat: perubahan komunitas mikroorganisme tanah, aktivitas enzimatik tanah. Menurut indikasi epidemi, indikasi mikrobiota patogen dilakukan.

Di laboratorium, sampel rata-rata dibuat dari 5 titik sampel tanah yang diambil dari satu lokasi, dicampur secara menyeluruh dan digosok dalam cangkir porselen steril dengan alu karet selama 5 menit. Kotoran asing (akar tanaman, batu, keripik) dihilangkan dengan menyaring tanah melalui saringan, yang sebelumnya diseka dengan kapas yang dibasahi dengan 96% etil alkohol. Sampel diambil dari sampel rata-rata (dari 1 hingga 50–55 g, tergantung pada daftar indikator yang ditentukan) dan suspensi 1:10 disiapkan dalam air keran steril (10 g tanah per 90 cm 3 air). Untuk desorpsi mikroorganisme dari permukaan partikel tanah, suspensi tanah yang telah disiapkan dikocok selama 3 menit pada pencampur pendispersi mekanis. Setelah mengendapkan suspensi selama 30 detik, pengenceran 10 kali berturut-turut dari tanah disiapkan hingga konsentrasi 10 -4 -10 -5 g/cm 3 .

Evaluasi hasil studi sanitasi dan mikrobiologi tanah dilakukan dengan membandingkan data yang diperoleh pada plot percobaan dan kontrol tanah dengan komposisi yang sama yang terletak di dekat wilayah. Skema untuk menilai keadaan sanitasi tanah berdasarkan kriteria sanitasi dan mikrobiologis individu disajikan dalam MU No. 14446–76(Meja 2).

Meja 2

	Titer (g)			Indeks mikroorganisme termofilik (jumlah sel/g)
	BGKP	bakteri nitrifikasi	Klostridia
			0,01 ke atas
tercemar
Sangat tercemar	0,009 ke bawah	0,0009 ke bawah	0,00009 ke bawah

PADA MU 2.1.7.730–99 "Penilaian higienis kualitas tanah di daerah berpenduduk" skema untuk menilai bahaya epidemi tanah di daerah berpenduduk disajikan. Dalam dokumen ini, untuk menilai intensitas beban biologis di tanah, indikator seperti CGB dan indeks enterococcus digunakan, dan untuk menilai bahaya epidemi tanah, enterobakteri patogen dan enterovirus digunakan.

STUDI PENGOBATAN MIKROBA LINGKUNGAN UDARA

Mikroorganisme memasuki udara dari tanah, air, serta dari permukaan tubuh, dari saluran pernapasan dan dengan tetesan air liur manusia dan hewan. Bakteri kokoid dan berbentuk batang, basil, clostridia, actinomycetes, jamur dan virus ditemukan di sini. Udara dianggap sebagai faktor dalam penularan infeksi saluran pernapasan, di mana patogen ditularkan oleh tetesan udara atau debu di udara. Sinar matahari dan faktor lain berkontribusi pada kematian mikroflora udara. Untuk mengurangi kontaminasi mikroba di udara, pembersihan basah tempat dilakukan dalam kombinasi dengan ventilasi dan pemurnian (penyaringan) udara yang masuk. Disinfeksi aerosol dan perawatan bangunan dengan lampu radiasi ultraviolet juga digunakan (misalnya, di laboratorium mikrobiologi dan unit operasi).

Banyak mikroorganisme terkandung di udara tempat dalam ruangan, kontaminasi mikroba yang tergantung pada kondisi pembersihan tempat, tingkat penerangan, jumlah orang di dalam ruangan, frekuensi ventilasi, dll. Sejumlah besar mikroorganisme hadir di udara kota-kota besar, sejumlah kecil - di udara daerah pedesaan. Ada sangat sedikit mikroorganisme di udara di atas hutan, gunung dan laut.

Pemeriksaan mikrobiologis udara menyediakan penentuan kandungan total mikroorganisme, serta stafilokokus dalam 1 m 3 udara. Dalam beberapa kasus, udara diuji untuk bakteri gram negatif, jamur dan jamur mirip ragi. Menurut indikasi epidemi, spektrum patogen yang terdeteksi di udara dapat diperluas.

Sampel udara diambil dengan cara aspirasi menggunakan alat Krotov.

Penggunaan metode sedimentasi Koch cukup dapat diterima. Tempat fasilitas perawatan kesehatan berikut tunduk pada studi - ruang operasi, ruang ganti dan perawatan, bangsal aseptik (kotak), bangsal departemen anestesi dan resusitasi, bangsal dan koridor departemen medis, tempat apotek, sterilisasi dan kebidanan - departemen ginekologi dan stasiun (departemen) transfusi darah.

Studi udara dengan metode Koch digunakan dalam kasus yang sangat jarang untuk penilaian perkiraan tingkat polusi udara mikroba. Untuk menentukan jumlah total mikroorganisme di udara ruang operasi, sebelum mulai bekerja, buka piring dengan agar nutrisi dan atur kira-kira pada ketinggian meja operasi - satu piring di tengah dan empat di sudut ruangan (“ metode amplop") selama 10 menit, dan untuk mendeteksi Staphylococcus aureus ( cangkir dengan agar kuning telur-garam (YSA) digunakan - selama 40 menit Tanaman diinkubasi dalam termostat pada +37 ° C dan sehari pada suhu kamar, maka jumlahnya koloni dihitung. 2 permukaan media nutrisi, dalam 5 menit pemaparan, sejumlah bakteri disimpan dalam 10 liter udara (1000 liter terkandung dalam 1 m 3). dari 5 koloni mikroorganisme tidak boleh tumbuh di piring agar nutrisi, dan Staphylococcus aureus tidak boleh muncul.

PENGENDALIAN SANITASI DAN MIKROBIOLOGI PADA OBYEK MAKANAN

Produk makanan dapat terkontaminasi dengan berbagai mikroorganisme, yang mengarah pada pembusukannya, perkembangan keracunan dan keracunan makanan, serta infeksi seperti antraks, brucellosis, tuberkulosis, dll. . Penyakit hewan, cedera atau kondisi pemeliharaan yang tidak menguntungkan berkontribusi pada pelanggaran penghalang pelindung tubuh dan translokasi (transfer) mikroorganisme ke dalam jaringan dan organ yang biasanya steril (penyemaian intravital). Akibatnya, jaringan hewan yang disembelih terkontaminasi oleh protozoa, clostridia, dan mikroba lainnya; terkena mastitis dalam susu stafilokokus dan streptokokus. Kontaminasi sekunder produk makanan dengan mikroorganisme juga dimungkinkan. Dalam hal ini, benda-benda lingkungan (tanah, air, transportasi, dll) serta orang sakit dan pembawa bakteri menjadi sumber pencemaran. Pada suhu penyimpanan daging dan produk daging yang rendah, bahkan dalam daging beku, mikroba yang mampu bereproduksi dalam kondisi psikrofilik (pseudomonas, proteus, aspergillus, penicillium, dll.) dapat mendominasi. Mikroba yang hidup dalam daging menyebabkannya menjadi lendir; itu mengembangkan proses fermentasi dan pembusukan yang disebabkan oleh Clostridium, Proteus, Pseudomonas dan jamur.

Tanaman sereal, kacang-kacangan dalam kondisi kelembaban tinggi dapat terkontaminasi jamur (aspergillus, penicillium, fusarium, dll.), Yang menyebabkan perkembangan mikotoksikosis makanan.

Hidangan daging (jeli, salad daging, hidangan daging cincang) dapat menyebabkan penyakit yang berhubungan dengan salmonella, shigella, diaregenik Escherichia coli, Proteus, strain enterotoksigenik staphylococci, enterococci, yang berkembang biak di dalamnya, Closlridium perfringens dan basil cereus.

Susu dan produk susu dapat menjadi faktor penularan brucellosis, tuberculosis, dan shigellosis. Mungkin juga perkembangan keracunan makanan sebagai akibat dari reproduksi dalam produk susu salmonella, shigella dan staphylococci. Telur, tepung telur dan melange pada infeksi Salmonella primer endogen telur, terutama telur bebek, merupakan penyebab salmonellosis.

Ikan dan produk ikan lebih mungkin terkontaminasi bakteri Closlridium botulinum dan Vibrio parahaemolylicus- agen penyebab keracunan makanan dan toksikoinfeksi. Penyakit ini juga diamati ketika makan produk ikan yang terkontaminasi sejumlah besar salmonella, proteus, Bacillus cereus, Closlridium perfringens.

Sayuran dan buah-buahan dapat terkontaminasi dan diunggulkan dengan Escherichia coli, Shigella, Proteus, strain enteropatogenik enteropatogenik dari staphylococci yang menyebabkan diare. Mentimun asin dapat menjadi penyebab toksikoinfeksi yang disebabkan oleh Vibrio parahaemolyticus.

Semua hasil analisis mikrobiologi produk makanan dapat diperoleh tidak lebih awal dari 48-72 jam, yaitu. ketika produk sudah dapat dijual. Oleh karena itu, pengendalian terhadap indikator-indikator ini bersifat retrospektif dan berfungsi untuk tujuan penilaian sanitasi dan higienis dari suatu perusahaan yang memproduksi atau menjual produk makanan.

Deteksi peningkatan kontaminasi mikroba umum, bakteri koliform, menunjukkan pelanggaran rezim suhu selama persiapan dan / atau penyimpanan produk jadi. Deteksi mikroorganisme patogen dianggap sebagai indikator masalah epidemiologis kantin, perusahaan perdagangan.

Penjatahan indikator mikrobiologis keamanan pangan dilakukan untuk sebagian besar kelompok mikroorganisme menurut prinsip alternatif, yaitu. massa produk dinormalisasi, di mana bakteri dari kelompok Escherichia coli, sebagian besar mikroorganisme patogen bersyarat, serta mikroorganisme patogen, termasuk. salmonella dan Listeria monocytogenes. Dalam kasus lain, standar mencerminkan jumlah unit pembentuk koloni dalam 1 g (cm 3) produk (CFU / g, cm 3).

Dalam produk konsumsi massal, yang dalam tabel SanPiN 2.3.2.1078-01. Persyaratan higienis untuk keamanan dan nilai gizi produk makanan tidak ada standar mikrobiologi, mikroorganisme patogen, termasuk. salmonella tidak diperbolehkan dalam 25 g produk.

Kontrol sanitasi dan bakteriologis harus tunduk pada objek persiapan dan penjualan produk makanan.

Data studi sanitasi dan mikrobiologi memungkinkan untuk menilai secara objektif kondisi sanitasi dan higienis dari objek yang diperiksa, mengidentifikasi pelanggaran rezim sanitasi dan segera melakukan tindakan yang ditargetkan untuk menghilangkannya.

Ada beberapa metode pengambilan sampel dari berbagai peralatan dan inventaris untuk penelitian mikrobiologi: metode swab, sidik jari, pengisian agar. Dari jumlah tersebut, metode pencucian tampon paling sering digunakan.

Kontrol sanitasi dan mikrobiologi didasarkan pada deteksi bakteri dalam kelompok Escherichia coli (BGKP) - indikator kontaminasi tinja dari objek yang diteliti. Studi tentang staphylococcus aureus, bakteri patogen dari keluarga usus, penentuan total kontaminasi mikroba dilakukan sesuai indikasi. Misalnya, pengambilan swab untuk mendeteksi stafilokokus diperlukan saat memeriksa toko permen, dapur susu, dan unit makanan di institusi medis.

Objek kontrol sanitasi dan mikrobiologi:

mencuci tangan dan pakaian terusan pekerja makanan (penyediaan air);

peralatan, inventaris, peralatan dan benda-benda lainnya;

makanan siap saji, kuliner dan produk yang mudah rusak;

bahan mentah dan produk setengah jadi selama proses teknologi (sesuai indikasi epidemiologis);

air minum dari sumber pasokan air terpusat dan terutama yang terdesentralisasi.

Cuci tangan dari tangan personel yang terlibat dalam pemrosesan produk mentah dikumpulkan sebelum pekerjaan dimulai. Swab dikirim ke laboratorium bakteriologi dalam waktu 2 jam, dapat disimpan dan diangkut tidak lebih dari 6 jam pada suhu +1-10 °C.

Di laboratorium, swab diinokulasi pada media Kessler dengan laktosa atau KODA, sedangkan swab diturunkan ke dalam tabung reaksi dengan media dan sisa cairan pencuci dipindahkan. Kultur pada media Kessler dan KODA diinkubasi pada suhu 37°C.

Setelah 18–24 jam, semua tabung reaksi dengan media Kessler diinokulasikan ke dalam cangkir dengan media Endo; dari media KODA, inokulasi dilakukan hanya jika warna media berubah (dari ungu asli menjadi kuning atau hijau) atau menjadi keruh . Inokulasi pada media Endo ditumbuhkan pada suhu 37 °C selama 18-24 jam.

Apusan dibuat dari koloni karakteristik BGKP, diwarnai dengan Gram, secara mikroskopis, jika perlu, mereka juga diidentifikasi sesuai dengan tes yang diterima secara umum untuk bakteri dari kelompok Escherichia coli. Saat mengevaluasi hasil pemeriksaan sanitasi dan mikrobiologi, mereka melanjutkan dari standar bahwa dalam swab yang diambil dari fasilitas makanan, BGKP tidak boleh ada. Deteksi BGKP dalam penyeka dari permukaan yang bersih, disiapkan untuk item kerja, inventaris, peralatan, tangan dan pakaian saniter personel menunjukkan pelanggaran rezim sanitasi. Dalam kasus deteksi CGB berulang dalam persentase swab yang signifikan, disarankan untuk menguji swab untuk mengetahui keberadaan enterobakteri patogen. Pada saat yang sama, swab dan cairan pembilas diinokulasi pada media pengayaan - kaldu selenit atau media magnesium (dimungkinkan untuk menggunakan media Muller dan Kaufman). Penelitian lebih lanjut dilakukan sesuai dengan metode yang berlaku umum.

STUDI SUSU DAN PRODUK SUSU

MIKROFLORA PRODUK SUSU

Susu merupakan media nutrisi yang sangat baik untuk perkembangan banyak mikroorganisme. Setelah makan susu dan produk susu yang terinfeksi, infeksi seperti demam tifoid, disentri, kolera, escherichiosis, brucellosis, TBC, demam berdarah, radang amandel, demam Q, penyakit kaki dan mulut, ensefalitis tick-borne, infeksi toksik salmonella, keracunan enterotoksin stafilokokus, dll.

Ada mikroflora susu dan produk susu yang spesifik dan tidak spesifik.

Ke mikroflora spesifik susu dan produk susu termasuk mikroba - patogen fermentasi asam laktat, alkohol dan asam propionat. Proses mikrobiologis karena aktivitas vital mikroorganisme ini mendasari persiapan produk susu fermentasi (keju cottage, kefir, susu kental, acidophilus, dll.).

Bakteri fermentasi asam laktat dianggap mikroflora normal susu dan produk susu . Peran utama dalam pengasaman susu dan produk susu dimainkan oleh streptokokus laktat. S. lactis, S. cremaris dan lain-lain Ras yang kurang aktif dari streptokokus asam laktat ( S. citrovorus, S. lactis subsp. diacetylaktis) menghasilkan asam volatil dan aromatik dan oleh karena itu banyak digunakan dalam produksi keju. Kelompok bakteri asam laktat juga termasuk batang asam laktat: Lactobacterium bulgaricum, Lactobacterium casei, Lactobacterium acidophilus dll.

Agen penyebab utama fermentasi alkohol dalam susu dan produk susu adalah ragi ( Saccharomyces lactis dan sebagainya.).

Mikroflora nonspesifik susu terdiri dari bakteri pembusuk proteus), basil aerob dan anaerob ( B. subtilis, B. megatherium, C. putrificum) dan banyak lagi

Kontaminasi mikroba susu sudah dimulai di ambing. Dalam proses pemerahan, penyemaian tambahannya terjadi dari permukaan kulit ambing, dari tangan, dari bejana, tempat ia masuk dari udara ruangan. Intensitas pembibitan tambahan ini umumnya tergantung pada bagaimana kondisi sanitasi dan higienis dasar diamati saat memperoleh susu. Kondisi penyimpanan susu yang buruk juga dapat berkontribusi pada pertumbuhan mikroflora lebih lanjut di dalamnya.

fase bakterisida. Susu segar, meskipun sudah mengandung ratusan mikroba per 1 cm 3 (terutama stafilokokus dan streptokokus), memiliki sifat bakterisida karena adanya antibodi normal di dalamnya. Oleh karena itu, untuk beberapa periode, perkembangan bakteri dalam susu tertunda. Periode ini disebut fase bakterisida. Durasi fase bakterisida berkisar antara 2–36 jam, tergantung pada karakteristik fisiologis hewan (pada periode awal laktasi, aktivitas bakterisida susu lebih tinggi).

Menyimpan susu pada suhu tinggi (30-37 °C) secara drastis mempersingkat durasi fase bakterisida. Efek yang sama diberikan oleh kontaminasi tambahan intensif susu dengan mikroba.

Setelah fase bakterisida selesai, perkembangan mikroflora dimulai. Komposisi spesiesnya berubah dari waktu ke waktu di bawah pengaruh perubahan sifat biokimia lingkungan dan sebagai akibat dari hubungan antagonis dan simbiosis antara spesies mikroba.

Fase mikroflora campuran. Itu berlangsung sekitar 12 jam Selama periode ini, dominasi kelompok spesies mikroba belum terjadi, karena kelimpahan substrat nutrisi dan kemungkinan spasial memungkinkan banyak jenis mikroorganisme untuk berkembang cukup bebas.

Fase streptokokus asam laktat. Pada fase ini, mikroorganisme dari kelompok yang disebutkan mendominasi ( S. lactis, S. termofilus, S. cremoris dan sebagainya.). Laktosa secara intensif diubah oleh mereka menjadi asam laktat, reaksi berubah menjadi sisi asam. Akumulasi asam laktat menyebabkan, di masa depan, kematian streptokokus asam laktat dan penggantiannya oleh bakteri asam laktat yang lebih tahan asam. Ini terjadi setelah 48 jam, menandai awal dari fase ketiga.

Fase batang asam laktat. Di dalamnya, posisi dominan diperoleh oleh bakteri asam laktat berbentuk batang. ( L. lactis, L. crusei, L. bulgaricum dan sebagainya.). Reaksi asam yang dihasilkan dari lingkungan menyebabkan penghambatan pertumbuhan dan kematian bertahap jenis bakteri lainnya.

Pada akhir fase ketiga, peluang lebih lanjut untuk pengembangan mikroflora asam laktat habis, dan jamur datang untuk menggantikannya, di mana asam laktat berfungsi sebagai substrat nutrisi.

Fase mikroflora jamur. Selama periode ini, jamur dan ragi berkembang, aktivitas vital yang menyebabkan hilangnya nilai gizi produk. Ragi diwakili terutama oleh spesies genus Torula, beberapa spesies Saccharomycetes lebih jarang ditemukan.

Dari cetakan yang ditemukan: cetakan susu ( Oidium laktis), menutupi permukaan dadih susu dan krim asam dalam bentuk bulu, serta Aspergillus, Penicillium dan Mucoraceae.

Tindakan flora jamur mengarah pada netralisasi lingkungan, dan ini membuatnya kembali cocok untuk bakteri. Terjadi perkembangan bakteri pembusuk, menyebabkan proteolisis kasein, dan, akhirnya, sekelompok bakteri butirat pembentuk spora anaerobik.

Aktivitas mikroflora yang berubah berhenti hanya dengan timbulnya mineralisasi lengkap semua zat organik susu.

Dalam kondisi tertentu, proses perubahan biocenosis mikroba dapat menyimpang dari skema di atas. Dengan demikian, bakteri asam laktat dapat dihambat sejak awal oleh mikroba dari kelompok Escherichia coli, jika yang terakhir hadir dalam jumlah besar. Ragi dapat menghasilkan konsentrasi alkohol yang nyata, yang terjadi pada produk seperti kefir (0,2-0,6%) dan terutama koumiss (0,9-2,5%). Kehadiran alkohol menciptakan kondisi untuk perkembangan selanjutnya dari bakteri asam asetat yang memfermentasi alkohol menjadi asam asetat. Kehadiran antibiotik dan zat lain yang menghambat dan menetralkan mikroflora dalam susu juga dapat memperlambat proses asam laktat.

Persyaratan higienis untuk kualitas air minum dan kebutuhan rumah tangga didasarkan pada prinsip yang mengutamakan kualitas air, yang menjadi sandaran kesehatan dan kondisi kehidupan manusia. Sesuai dengan undang-undang sanitasi modern, air minum harus aman dalam hal epidemi dan radiasi, tidak berbahaya dalam komposisi kimia dan memiliki sifat organoleptik yang menguntungkan.

Keamanan air minum dalam hal epidemi ditentukan oleh kepatuhannya terhadap standar indikator mikrobiologi. Komposisi mikrobiologis air minum merupakan indikator utama kualitas dan kelayakannya untuk dikonsumsi. Ini memperhitungkan kontaminasi bakteri dan virus.

Keamanan epidemiologis air minum di SanPiN dinilai dengan beberapa indikator. Peran besar di antara mereka diberikan kepada koliform termotoleran sebagai indikator sebenarnya dari polusi tinja dan koliform total.

Bakteri coliform umum (CBC) adalah batang gram negatif, oksidase-negatif, tidak membentuk spora yang dapat tumbuh pada media laktosa diferensial, memfermentasi laktosa menjadi asam dan gas pada suhu +37 selama 24-48 jam.

Bakteri thermotoleran coliform (TCB) adalah bagian dari OKB dan memiliki semua karakteristiknya, tetapi tidak seperti mereka, mereka mampu memfermentasi laktosa menjadi asam, aldehida dan gas pada suhu +44 selama 24 jam. Dengan demikian, TKB berbeda dari OKB dalam kemampuannya untuk memfermentasi laktosa menjadi asam dan gas pada suhu yang lebih tinggi. Coliform termotoleran dan umum harus tidak ada dalam 100 ml air minum (dalam salah satu sampel dengan pengulangan analisis tiga kali lipat).

Dalam jaringan distribusi sistem pasokan air minum terpusat yang besar (dengan jumlah sampel yang dipelajari setidaknya 100 per tahun), 5% sampel non-standar untuk koliform umum diperbolehkan, tetapi tidak dalam dua sampel berturut-turut yang diambil pada satu titik.

Jumlah total mikroorganisme (total mikroba number - TMC) ditentukan oleh pertumbuhan pada meat-peptone agar pada suhu inkubasi 37. Indikator ini digunakan untuk mencirikan efisiensi penjernihan air minum, hal ini harus diperhatikan saat memantau kualitas air di dinamika. Penyimpangan TMF yang tajam bahkan dalam batas nilai standar (tetapi tidak lebih dari 50 dalam 1 ml) berfungsi sebagai sinyal pelanggaran dalam teknologi pengolahan air. Pertumbuhan TMP di air jaringan distribusi dapat menunjukkan kondisi sanitasi yang tidak menguntungkan, yang berkontribusi pada reproduksi mikroorganisme karena akumulasi zat organik atau kebocoran, yang memerlukan penyedotan air tanah yang terkontaminasi.

Saprofit aerobik hanya merupakan sebagian dari jumlah total mikroba dalam air, tetapi mereka merupakan indikator sanitasi penting kualitas air, karena ada hubungan langsung antara tingkat pencemaran oleh zat organik dan jumlah mikroba. Selain itu, diyakini bahwa semakin tinggi jumlah total mikroba, semakin besar kemungkinan keberadaan mikroorganisme patogen di dalam air. Jumlah mikroba dalam air keran tidak boleh melebihi 100.

Keamanan air minum dalam pengertian epidemi ditentukan oleh kepatuhannya terhadap standar indikator mikrobiologi (Tabel 1).

Tabel 1. Indikator Mikrobiologi Air Minum

Konsep mikroorganisme indikatif sanitasi

Persyaratan utama untuk mikroorganisme indikatif sanitasi: 1. mereka harus memiliki habitat alami yang sama dengan mikroorganisme patogen dan dilepaskan ke lingkungan eksternal dalam jumlah besar; 2. Di lingkungan eksternal, mikroorganisme yang menunjukkan sanitasi harus tersebar merata dan lebih tahan daripada yang patogen. Mereka harus tetap berada di dalam air lebih lama, praktis tidak berkembang biak, lebih tahan terhadap berbagai faktor yang merugikan, mereka harus menunjukkan lebih sedikit variabilitas dalam sifat dan karakteristik; 3. metode untuk menentukan mikroorganisme indikatif sanitasi harus sederhana dan memiliki tingkat keandalan yang memadai.

Dari sudut pandang mikrobiologi sanitasi, penilaian kualitas air dilakukan untuk menentukan bahaya atau keamanan sanitasi dan epidemiologisnya. Untuk kesehatan manusia. Air memainkan peran penting dalam transmisi patogen banyak infeksi, terutama yang usus.

Penentuan kuantitatif langsung dari semua infeksi untuk pengendalian kualitas air tidak layak karena keragaman jenisnya dan kompleksitas analisisnya.

Analisis hanya satu sampel air untuk kemungkinan adanya patogen demam tifoid, paratifoid A, paratifoid B, disentri, penyakit kuning menular, demam air dan tularemia di dalamnya akan sepenuhnya memuat seluruh staf bahkan laboratorium bakteriologis yang besar. Selain itu, jawaban dalam kasus ini hanya akan diberikan setelah 2-3 minggu, yaitu. ketika populasi sudah meminum air yang dipelajari untuk waktu yang lama.

Mengingat ketidakmampuan yang jelas dari definisi rinci tentang keamanan air, pada awal abad ke-19, upaya dilakukan untuk mengganti pencarian semua mikroba patogen air dengan satu mikroba, meskipun non-patogen, tetapi terus-menerus ada. dalam kotoran manusia. Kemudian dapat dianggap bahwa jika air yang diteliti memang terkontaminasi tinja, maka dapat berbahaya untuk diminum, karena pembawa penyakit dan basil dapat ditemukan di antara populasi yang sehat. Pencarian indikator bakteriologis kontaminasi tinja telah berhasil. Ternyata tiga mikroba berikut selalu ada dalam kotoran manusia: 1) Escherichia coli; 2) enterokokus; 3) bakteri pembentuk spora anaerob, terutama Bac. perfingens.

Dengan demikian, E. coli mendominasi dalam air limbah domestik. Tapi ini bukan hanya tentang konten. Nilai utama dari indikator bakteri kontaminasi tinja terletak pada kenyataan bahwa tingkat kematian sebagian besar mikroba patogen. Hanya jika kondisi ini terpenuhi, mikroba yang selalu ada dalam tinja manusia akan menjadi indikator kontaminasi tinja.

Jika kita mendekati penghuni permanen usus yang ditemukan dari sudut pandang ini, kita akan menemukan yang berikut: mikroba dari kelompok Bac. perfingens bertahan dalam air lebih lama daripada mikroba patogen; enterococci, sebaliknya, mati lebih cepat; Sedangkan untuk Escherichia coli, waktu pengawetannya dalam air kira-kira sama dengan waktu kelangsungan hidup mikroba patogen.

Oleh karena itu, indikator sanitasi-bakteriologis air yang utama adalah Escherichia coli. Hanya di Rusia, satu-satunya negara di dunia, kualitas air dikendalikan oleh bakteri kelompok Escherichia coli (indeks BGKP). Kelompok ini mencakup semua perwakilan dari kelompok bakteri usus dan perwakilan oportunistik.

Sesuai dengan GOST 2874-73 dan GOST 18963-73, bakteri dari kelompok Escherichia coli (EKG) termasuk basil gram negatif, tidak membentuk spora yang memfermentasi laktosa atau glukosa menjadi asam dan gas pada suhu 37o dalam 24 jam dan tidak memiliki aktivitas oksidase. CGB mencakup perwakilan dari berbagai genera - Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, tetapi semuanya dilepaskan ke lingkungan dari usus manusia dan hewan. Dalam hal ini, deteksi mereka di lingkungan harus dipertimbangkan sebagai indikator kontaminasi tinja.

Dari genus yang termasuk dalam BGKP, genus Escherichia memiliki nilai sanitasi dan indikatif paling banyak. Kehadiran semua bakteri ini di lingkungan dianggap sebagai kontaminasi tinja segar.

Escherichia - adalah salah satu spesies latar belakang usus manusia dan hewan. Genus Escherichia, termasuk jenis spesies E. coli, merupakan indikator kontaminasi tinja segar, kemungkinan penyebab infeksi toksik. Perwakilan dari genus dalam air diperlakukan sebagai bakteri coliform termotoleran.

Citrobacter - hidup di air limbah, tanah dan benda-benda lingkungan lainnya, serta di kotoran pasien yang sehat dan AII. Mereka termasuk dalam kelompok bakteri oportunistik. (Buku referensi kamus mikrobiologi, 1999)

Kerugian dari citrobacter sebagai SPMO adalah sebagai berikut:

1. banyak analog di lingkungan eksternal.

2. variabilitas dalam lingkungan eksternal.

3. resistensi yang tidak memadai terhadap efek samping.

4. kemampuan untuk berkembang biak di dalam air.

5. indikator fuzzy bahkan untuk keberadaan salmonella.

Studi terbaru telah mengungkapkan tidak adanya korelasi langsung antara keberadaan bakteri patogen dan indikator dalam air. Di daerah dengan tekanan antropogenik yang kuat pada badan air, penurunan kandungan mikroorganisme indikator dicatat dengan perubahan sifat biologis dan budaya mereka dengan latar belakang dominasi kuantitatif bakteri patogen dan patogen potensial.

Enterobacter - hidup di usus manusia dan hewan lain, ditemukan di tanah, air, produk makanan, panggilan untuk penyakit manusia usus, urogenital, pernapasan, radang bernanah.

Klebsiella - hidup di air, tanah, makanan, di usus dan saluran pernapasan manusia, mamalia, burung.

Pada tahun 1910 Enterococci (Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium) telah diusulkan untuk peran SPMO.

Enterococci adalah genus dari bakteri Gram+ kemoorganotrofik asporogenik anaerob fakultatif. Sel bersifat polimorfik. Tersebar luas di alam. Mereka adalah salah satu spesies latar belakang usus manusia, mamalia, burung. Sering ditemukan pada flora kulit perineum dan saluran genital, rongga hidung, faring, hidung. Lama bertahan di tanah, produk makanan.

Manfaat Enterococcus sebagai SPMO:

1. terus-menerus di usus manusia dan terus-menerus dilepaskan ke lingkungan eksternal. Pada saat yang sama, Enterococcus faecalis terutama hidup di usus manusia, sehingga deteksinya menunjukkan kontaminasi dengan kotoran manusia. Pada tingkat lebih rendah, Enterococcus faecium terjadi pada manusia. Yang terakhir ini terutama ditemukan di usus hewan, meskipun Enterococcus faecalis juga relatif jarang.

2. tidak dapat bereproduksi di lingkungan eksternal, Enterococcus faecium terutama bereproduksi, tetapi memiliki signifikansi epidemiologis yang kurang.

3. tidak mengubah sifat-sifatnya di lingkungan luar.

4. tidak memiliki analog di lingkungan eksternal.

5. tahan terhadap pengaruh lingkungan yang merugikan. Enterococcus adalah 4 kali lebih tahan terhadap klorin dari Escherichia coli. Ini adalah kelebihan utamanya. Karena karakteristik ini, enterococcus digunakan untuk memeriksa kualitas klorinasi air, serta indikator kualitas desinfeksi. Tahan suhu 60 ° C, yang memungkinkannya digunakan sebagai indikator kualitas pasteurisasi. tahan terhadap konsentrasi garam biasa 6,5-17%. Tahan terhadap pH di kisaran 3-12.

6. Media yang sangat selektif telah dikembangkan untuk indikasi enterococci. Tingkat kelangsungan hidup Enterococcus dalam air mendekati Enterobacteria patogen. Enterococcus adalah uji indikatif sanitasi kedua setelah E. coli dalam penelitian air minum.

Saat ini, enterokokometri disahkan dalam standar air internasional sebagai indikator kontaminasi tinja segar. Ketika Escherichia coli atipikal ditemukan di dalam air, keberadaan enterococci menjadi indikator utama kontaminasi tinja segar. Sayangnya, dalam SanPiN 2.1.4.1074-01 untuk air minum, definisi enterococcus tidak diberikan.

Kelompok Proteus dianggap sebagai penyebab proses pembusukan di alam, dan oleh karena itu, sebagai indikator keberadaan zat organik di air waduk. Ini berlaku terutama untuk satu spesies - Pr. vulgaris; spesies kedua - Pr.mirabilis - adalah penghuni usus manusia dan hewan. Perbedaan ekologis ini memungkinkan untuk menilai sifat pencemaran air dan tingkat keamanan epideminya. Pr.vulgaris dapat menjadi indikator pencemaran feses, Pr.vulgaris - indikator peningkatan konsentrasi bahan organik secara umum. Kelemahan indikator ini adalah keberadaan Pr.mirabilis yang berselang-seling dalam usus manusia dan kemampuan kedua spesies tersebut untuk bereproduksi cukup intensif di dalam air. Juga tidak ada metode penelitian yang memungkinkan mempertimbangkan kedua spesies secara berbeda ketika mereka hadir secara bersamaan dalam sampel uji. Metode yang diusulkan tidak memenuhi tugas ini.

Sekarang telah ditunjukkan bahwa bakteri dari genus Proteus ditemukan pada 98% kasus dalam sekresi usus manusia dan hewan, dimana 82% kasus adalah Pr.mirabilis. deteksi proteus dalam air menunjukkan kontaminasi objek dengan substrat yang membusuk dan menunjukkan masalah sanitasi yang ekstrem. Proteometry secara resmi diakui di AS.

Identifikasi spora clostridia pereduksi sulfida dilakukan pada pipa air dari sumber permukaan untuk menilai efektivitas teknologi pengolahan air. Spora bakteri pereduksi sulfida tidak boleh ada dalam 20 ml air minum setelah pengolahan air selesai.

Sebagai indikator kontaminasi virus pada air minum, SanPiN termasuk coliphages, yang paling dekat dengan virus usus dalam asal biologis, ukuran, sifat, dan ketahanan terhadap faktor lingkungan. Coliphages tidak boleh terdeteksi dalam 100 ml air minum yang diolah.