განსაკუთრებული გარემო.

ბაქტერიოლოგიაში ფართოდ გამოიყენება სამრეწველო წარმოების მშრალი საკვები ნივთიერებები, ეს არის ჰიგიროსკოპიული ფხვნილები, რომლებიც შეიცავს გარემოს ყველა კომპონენტს, გარდა წყლისა. მათი მომზადებისთვის გამოიყენება იაფფასიანი არასასურსათო პროდუქტების (თევზის ნარჩენები, ხორცისა და ძვლის ფქვილი, ტექნიკური კაზეინი) ტრიპტიური დიჯესტები. ისინი მოსახერხებელია ტრანსპორტირებისთვის, შეიძლება დიდხანს ინახებოდეს, ათავისუფლებს ლაბორატორიებს მედიის მომზადების უზარმაზარი პროცესისგან და აახლოებს მედიის სტანდარტიზაციის საკითხს გადაწყვეტასთან. სამედიცინო ინდუსტრია აწარმოებს ენდოს, ლევინის, პლოსკირევის, ბისმუტის სულფიტ აგარს, მკვებავ აგარს, ნახშირწყლებს BP მაჩვენებლით და სხვა.

თერმოსტატები

თერმოსტატები გამოიყენება მიკროორგანიზმების გასაშენებლად.

თერმოსტატი არის მოწყობილობა, რომელიც ინარჩუნებს მუდმივ ტემპერატურას. მოწყობილობა შედგება გამაცხელებლისგან, კამერისგან, ორმაგი კედლებისგან, რომელთა შორის ჰაერი ან წყალი ცირკულირებს. ტემპერატურა კონტროლდება თერმოსტატით. მიკროორგანიზმების უმეტესობის გამრავლებისთვის ოპტიმალური ტემპერატურაა 37°C.

აქტივობა 7

თემა: სუფთა აერობული კულტურის იზოლაციის მეთოდები. აერობული ბაქტერიების სუფთა კულტურის იზოლაციის ეტაპები მექანიკური გამოყოფის მეთოდით

Გაკვეთილის გეგმა

1. ბაქტერიების „სუფთა კულტურის“ კონცეფცია

2. მექანიკური გამოყოფით სუფთა კულტურების გამოყოფის მეთოდები

3. სუფთა კულტურების გამოყოფის ბიოლოგიური მეთოდები

4. ბაქტერიების იდენტიფიცირების მეთოდები

გაკვეთილის მიზანი:გააცნოს მოსწავლეებს სუფთა კულტურების იზოლირების სხვადასხვა ხერხი, ასწავლოს მოსავლის კეთება მარყუჟით, დარტყმით, ჩხვლეტით.

ინსტრუქციები დემონსტრაციისთვის

მათ ბუნებრივ ჰაბიტატში ბაქტერიები გვხვდება ასოციაციებში. იმისათვის, რომ დადგინდეს მიკრობების თვისებები, მათი როლი პათოლოგიური პროცესის განვითარებაში, აუცილებელია ბაქტერიების არსებობა ერთგვაროვანი პოპულაციების (სუფთა კულტურების) სახით. სუფთა კულტურა არის ერთი და იმავე სახეობის ბაქტერიული ინდივიდების ერთობლიობა, რომლებიც გაიზარდა საკვებ გარემოზე.

აერობული ბაქტერიების სუფთა კულტურების იზოლირების მეთოდები

პასტერის მეთოდი კოხის მეთოდი ბიოლოგიური ფიზიკური

(აქვს ისტორიული (ფირფიტის გაყვანილობა)

მნიშვნელობა)

ქიმიური მეთოდი

შჩუკევიჩი

Თანამედროვე

თესვა მარყუჟით თესვა სპატულით

(დრიგალსკის მეთოდი)

სუფთა კულტურების იზოლირების მეთოდები:

1. მექანიკური გამოყოფის მეთოდები ეფუძნება მიკრობების გამოყოფას საცდელი მასალის თანმიმდევრული გახეხვის გზით აგარის ზედაპირზე.

ა) პასტერის მეთოდი - ისტორიული მნიშვნელობისაა, ითვალისწინებს საცდელი მასალის თანმიმდევრულ განზავებას თხევად საკვებ გარემოში მობრუნვის მეთოდით.

ბ) კოხის მეთოდი - ფირფიტების განლაგების მეთოდი - ეფუძნება საცდელი მასალის თანმიმდევრულ განზავებას ხორც-პეპტონ აგარით, რასაც მოჰყვება განზავებული მასალით საცდელი მილების ჩასხმა პეტრის ჭურჭელში.

გ) დრიგალსკის მეთოდი - მიკროფლორით უხვად დათესილი მასალის დათესვისას გამოიყენეთ 2-3 ჭიქა ზედიზედ თესვისთვის სპატულით.

დ) მარყუჟით თესვა პარალელურად შტრიხებით.

2. ბიოლოგიური მეთოდები ეფუძნება პათოგენების ბიოლოგიურ თვისებებს.

ა) ბიოლოგიური - უაღრესად მგრძნობიარე ცხოველების ინფექცია, სადაც მიკრობები სწრაფად მრავლდებიან და გროვდებიან. ზოგიერთ შემთხვევაში, ეს მეთოდი ერთადერთია, რომელიც საშუალებას გაძლევთ გამოყოთ პათოგენის კულტურა ავადმყოფი ადამიანისგან (მაგალითად, ტულარემიით), სხვა შემთხვევებში უფრო მგრძნობიარეა (მაგალითად, პნევმოკოკის იზოლაცია თეთრ თაგვებში. ან ტუბერკულოზის გამომწვევი აგენტი ზღვის გოჭებში).

ბ) ქიმიური - მიკობაქტერიების მჟავა რეზისტენტობის საფუძველზე. მასალის თანმხლები ფლორისგან გასათავისუფლებლად, ის
დამუშავებული მჟავა ხსნარით. გაიზრდება მხოლოდ ტუბერკულოზის ბაცილები, რადგან მჟავას ამტანი მიკრობები კვდება მჟავით.

გ) ფიზიკური მეთოდი ეფუძნება სპორების გამძლეობას სითბოს მიმართ. სპორების წარმომქმნელი ბაქტერიების კულტურების იზოლირება
ნარევები, მასალა თბება 80°C-ზე და ინოკულირებულია მკვებავ გარემოზე. გაიზრდება მხოლოდ სპორული ბაქტერია, რადგან მათი სპორები ცოცხალი დარჩა და ზრდას იძლეოდა.

დ) შუკევიჩის მეთოდი - დაფუძნებული ვულგარული პროტეუსის მაღალ მობილურობაზე, რომელსაც შეუძლია მცოცავი ზრდა.

აგარის ფირფიტის მომზადების მეთოდი

MPA დნება წყლის აბაზანაში, შემდეგ გაცივდება 50-55°C-მდე. ფლაკონის ყელი იწვება სპირტიანი ნათურის ცეცხლში, პეტრის ჭურჭელი იხსნება ისე, რომ ფლაკონის ყელი შევიდეს, ჭურჭლის კიდეებს შეხების გარეშე, დაასხით 10-15 მლ MPA, დაახურეთ თავსახური. შეანჯღრიეთ კერძი ისე, რომ საშუალო თანაბრად გადანაწილდეს, დატოვეთ ჰორიზონტალურ ზედაპირზე გამაგრებამდე. გაშრობის შემდეგ ფირფიტები თეფშით აგარით ინახება ცივში.

მარყუჟის თესვა

მასალის წვეთს იღებენ სტერილური გაცივებული მარყუჟით, ჭიქის ერთი კიდე ოდნავ იხსნება მარცხენა ხელით, შიგ ათავსებენ მარყუჟს და კეთდება რამდენიმე დარტყმა მოპირდაპირე კიდეზე ერთ ადგილას, შემდეგ მარყუჟი იშლება. ხოლო მასალას პარალელური შტრიხებით ნერგავენ ჭიქის ერთი კიდედან მეორეზე 5-6 მმ ინტერვალით. თესვის დაწყებისას, როდესაც მარყუჟზე ბევრი მიკრობი იქნება, ისინი შერწყმულ ზრდას მოახდენენ, მაგრამ მარყუჟზე მიკრობების ყოველი დარტყმისას სულ უფრო და უფრო ნაკლები იქნება, ისინი დარჩებიან განმარტოებულები და იზოლირებულნი. კოლონიები.

თესვა დრიგალსკის მეთოდით

ეს მეთოდი გამოიყენება მიკროფლორით (ჩირქი, განავალი, ნახველი) უხვად დათესილი მასალის დათესვისას. დრიგალსკის მეთოდით თესვისთვის იღებენ სპატულას და რამდენიმე ჭიქას (3-4). სპატული არის ლითონის მავთულის ან შუშის ისრისგან დამზადებული ხელსაწყო, მოხრილი სამკუთხედის ან L- ფორმის სახით. მასალა შეჰყავთ პირველ ფინჯანში მარყუჟით ან პიპეტით და თანაბრად ნაწილდება სპატულით საშუალების ზედაპირზე, იგივე სპატულით, მისი დაწვის გარეშე, მასალა შეიზილება მეორე ჭიქის მკვებავ გარემოში და შემდეგ. მესამეში. ამ ინოკულაციით, პირველ ფირფიტას ექნება შერწყმული ზრდა, ხოლო იზოლირებული კოლონიები გაიზრდება შემდგომ ფირფიტებში.

თუ მცენარეებზე გარკვეული სიმპტომებისა და მიკროსკოპული გამოკვლევის შედეგებიდან გამომდინარე, არსებობს ეჭვი, რომ დაავადების გამომწვევი აგენტია ბაქტერია, შემდეგი ნაბიჯი უნდა იყოს მისი იზოლირება.

ამ შემთხვევაში, ვარაუდობენ, რომ პათოგენი დაბინძურებულია ასოცირებული ორგანიზმებით, ანუ არის შერეული პოპულაცია. პათოგენის, როგორც ცალკე მზარდი კოლონიის მისაღებად, ქსოვილის მაცერატი უნდა იყოს ზოლიანი გარემოზე.

ინსულტის თესვა. ბაქტერიების შემცველი მცენარეული ქსოვილის მაცერატი მცირე რაოდენობით მიიღება კალცინირებული ინოკულაციის მარყუჟით და მსუბუქი მოძრაობებით, აგარის ზედაპირის დაზიანების გარეშე, 4-6 დარტყმით სვამენ მომზადებულ მკვებავ გარემოს. მარყუჟის ხელახლა აალებით, საშუალების ფინჯანი გადაბრუნდება 90 °-ით მარჯვნივ და შემდეგ 4-6 დარტყმა გამოიყენება მეორე დარტყმიდან, ნემსი ხელახლა აანთებს და ტარდება მესამე ინოკულაცია. ეს მიიღწევა საწყისი მასალის ისეთ განზავებას, რომელშიც ბაქტერიები, თერმოსტატში 48-72 საათის განმავლობაში 28 ° C-ზე ინკუბაციის შემდეგ, ქმნიან სხვადასხვა ფორმისა და ფერის ცალკეულ კოლონიებს. შემდეგ კოლონიები გადადის შემდგომი შესწავლისთვის დახრილ აგარის მილებში. კოლონიას იღებენ კალცინირებული მარყუჟით და ფრთხილი მოძრაობით გველის ან ზიგზაგის სახით, გამოიყენება მკვებავი აგარი.

კოხის ჩამოსხმის მეთოდი. კოხის ჩამოსხმის მეთოდი უზრუნველყოფს თითოეული კოლონიის ჩამოყალიბებას ერთი ბაქტერიული უჯრედისგან. უმჯობესია საწყისი მასალა შეაჩეროთ სტერილურ წყალში და გამოიყენოთ კოხის მეთოდი მხოლოდ ამ განზავებით. სუსპენზიის მცირე რაოდენობა გადადის პირველ სინჯარაში 60 °C-მდე გაცივებული მკვებავი გარემოთი. შემდეგ მილის შიგთავსს ურევენ ინოკულუმს ხელისგულებს შორის მობრუნებით. შემდეგ აიღეთ მეორე საცდელი მილი, ფრთხილად გახსენით სანთურის ცეცხლზე და გადაიტანეთ მასში სუბსტრატის სამი ნაწილი პირველი სინჯარიდან დიდი მარყუჟებით. საცდელი მილის შიგთავსი კისრის და საცობის გასროლის შემდეგ ასხამენ პირველ პეტრის ჭურჭელში, ოდნავ ხსნიან ჭიქის თავსახურს იმდენი, რომ მის ქვეშ საცდელი მილის კისერი ჩასვათ. ჩამოსხმისთანავე ფინჯანი იხურება და მკვებავი საშუალება თანაბრად ნაწილდება ფრთხილად მოძრაობებით.

მეორე სინჯარის შიგთავსის საფუძვლიანად შერევის შემდეგ, აიღეთ მესამე სინჯარა და გადაიტანეთ მასში სუბსტრატის ექვსი ნაწილი მარყუჟით მეორედან. სინჯარის შიგთავსს ასხამენ ჭიქაში, ხოლო სინჯარის შიგთავსს, შერევის შემდეგ, ასხამენ ჭიქაში. ჭიქები გარემოთი ინკუბირებულია თერმოსტატში 28°C ტემპერატურაზე, რამდენიმე დღის შემდეგ საწყის მასალაში შემავალი ბაქტერიები ქმნიან კოლონიებს.

სერიული მოშენება. თუ, მაგალითად, საჭიროა ნიადაგიდან ბაქტერიების იზოლირება, მაშინ გამოიყენება სერიული განზავება. სტერილური მკვებავი საშუალება (თითო ჭურჭელზე 15 მლ) შეედინება ჭურჭელში, სუსპენზიის ბოლო სამი განზავების 0,1 მლ გამოიყენება გამაგრებულ აგარზე და ზედაპირზე ვრცელდება შუშის სპატულით.

ბაქტერიების იზოლირებისთვის 1გრ ნიადაგს აჩერებენ 9მლ წყალში, კარგად შეანჯღრიეთ, აჩერებენ რამდენიმე წამს და სუსპენზიიდან ამზადებენ სერიულ განზავებებს. ამ მეთოდით შეიძლება განისაზღვროს მიკროორგანიზმების რაოდენობა თითოეულ ნიმუშში.

თუ შეცდომას იპოვით, გთხოვთ, მონიშნეთ ტექსტის ნაწილი და დააწკაპუნეთ Ctrl+Enter.

პასტერის მეთოდი კოხის მეთოდი ბიოლოგიური ფიზიკური

(აქვს ისტორიული (ლამელარული

ღირებულება) გაყვანილობა) შჩუკევიჩის ქიმიური მეთოდი

Თანამედროვე

თესვა მარყუჟით თესვა სპატულით

(დრიგალსკის მეთოდი)

სუფთა კულტურების იზოლირების მეთოდები (სქემა 11):

1. მექანიკური გათავისუფლების მეთოდებიეფუძნება მიკრობების გამოყოფას საცდელი მასალის თანმიმდევრული დაფქვით აგარის ზედაპირზე.

ა) პასტერის მეთოდი- აქვს ისტორიული მნიშვნელობა, ითვალისწინებს საცდელი მასალის თანმიმდევრულ განზავებას თხევად საკვებ გარემოში მოძრავი მეთოდით.

ბ) კოხის მეთოდი- ფირფიტების განლაგების მეთოდი - დაფუძნებულია საცდელი მასალის თანმიმდევრულ განზავებაზე ხორც-პეპტონ აგარით, რასაც მოჰყვება საცდელი მილების განზავებული მასალით პეტრის ჭურჭელში ჩასხმა.

in) დრიგალსკის მეთოდი- მიკროფლორით უხვად დათესილი მასალის დათესვისას გამოიყენეთ 2-3 ჭიქა შპატულით თანმიმდევრული თესვისთვის.

გ) მარყუჟის თესვა პარალელური შტრიხებით.

2. ბიოლოგიური მეთოდებიპათოგენების ბიოლოგიურ თვისებებზე დაყრდნობით.

ა) ბიოლოგიური- ძალიან მგრძნობიარე ცხოველების ინფექცია, სადაც მიკრობები სწრაფად მრავლდებიან და გროვდებიან. ზოგიერთ შემთხვევაში, ეს მეთოდი ერთადერთია, რომელიც საშუალებას გაძლევთ გამოყოთ პათოგენის კულტურა ავადმყოფი ადამიანისგან (მაგალითად, ტულარემიით), სხვა შემთხვევებში უფრო მგრძნობიარეა (მაგალითად, პნევმოკოკის იზოლაცია თეთრ თაგვებში. ან ტუბერკულოზის გამომწვევი აგენტი ზღვის გოჭებში).

ბ) ქიმიური– ეფუძნება მიკობაქტერიების მჟავა რეზისტენტობას. მასალის თანმხლები ფლორისგან გასათავისუფლებლად, ის
დამუშავებული მჟავა ხსნარით. გაიზრდება მხოლოდ ტუბერკულოზის ბაცილები, რადგან მჟავას ამტანი მიკრობები კვდება მჟავით.

in) ფიზიკური მეთოდისპორების სითბოსადმი წინააღმდეგობის საფუძველზე. სპორების წარმომქმნელი ბაქტერიების კულტურების იზოლირება
ნარევები, მასალა თბება 80°C-ზე და ინოკულირებულია მკვებავ გარემოზე. გაიზრდება მხოლოდ სპორული ბაქტერია, რადგან მათი სპორები ცოცხალი დარჩა და ზრდას იძლეოდა.

გ) შჩუკევიჩის მეთოდი- ვულგარული პროტეუსის მაღალ მობილურობაზე დაყრდნობით, რომელსაც შეუძლია მცოცავი ზრდა.

კოლონიებიდან დახრილ აგარსა და BCH-ზე გადატანის მეთოდი:

ა) კოლონიებიდან აგარის დახრილობაზე გადატანა

ჭიქის თავსახური ოდნავ გახსნილია, ცალკეული კოლონიის ნაწილი ამოღებულია კალცინირებული გაცივებული მარყუჟით, იხსნება საცდელი მილი სტერილური დახრილი აგარით, რომელსაც მარცხენა ხელში უჭირავს დახრილ მდგომარეობაში, ისე რომ ზედაპირის ზედაპირი. საშუალო შეიძლება შეინიშნოს. კულტივირებული მარყუჟი გადადის სინჯარაში კედლებთან შეხების გარეშე, ასხამენ საკვებ გარემოს, სრიალებს ზედაპირზე სინჯარის ერთი ბოლოდან მეორეზე, აწევენ შტრიხებს საშუალების ზევით - თესვა. ინსულტი. მილი დახურულია და გაშვების გარეშე, ხელს აწერს დათესილი მიკრობის სახელს და დათესვის თარიღს.

ბ) კოლონიიდან გადატანა ხორც-პეპტონის ბულიონში

MPB-ზე ხელახალი დათესვის ტექნიკა ძირითადად იგივეა, რაც მკვრივ გარემოზე თესვისას. BCH-ზე თესვისას მარყუჟი მასზე მასალით იჭრება საშუალოში. თუ მასალა ბლანტია და არ არის ამოღებული მარყუჟიდან, მას ასხამენ ჭურჭლის კედელს და შემდეგ რეცხავენ თხევადი საშუალებით. სტერილური პასტერით ან გრადირებული პიპეტით შეგროვებული თხევადი მასალა შეედინება მკვებავ გარემოში.

დამოუკიდებელი მუშაობის შედეგად მოსწავლემ უნდა იცოდეს:

1. მიკროორგანიზმების სუფთა კულტურის გამოყოფის მეთოდები

2. მიკროორგანიზმების გაშენების მეთოდები

Შეძლებს:

1. ანტიეპიდემიური რეჟიმის წესებისა და უსაფრთხოების ზომების დაცვის უნარები

2. მასალის დეზინფექცია, ხელების დამუშავება

3. მოამზადეთ პრეპარატები ბაქტერიული კოლონიებიდან

4. კოლონიებს მიკროსკოპი

5. გრამის შეღებვის მიკროორგანიზმები

აქტივობა 8

საგანი. სუფთა კულტურების იზოლირების მეთოდები (გაგრძელება).ბაქტერიების ფერმენტული აქტივობა და მისი შესწავლის მეთოდები.

შედარებით ცოტა მეთოდია ცნობილი ბაქტერიების, როგორც სუფთა კულტურების იზოლირებისთვის. ეს ყველაზე ხშირად კეთდება ცალკეული უჯრედების იზოლირებით მყარ ზრდის მედიაზე ზოლებით-ინოკულაციის მეთოდის გამოყენებით ან მცირე რაოდენობით თხევადი კულტურის ფირფიტებში ჩასხმით ( განზავების მეთოდი). თუმცა, ცალკე კოლონიის მოპოვება ყოველთვის არ იძლევა კულტურის სიწმინდის გარანტიას, რადგან კოლონიები შეიძლება გაიზარდოს არა მხოლოდ ცალკეული უჯრედებიდან, არამედ მათი მტევანიდანაც. თუ მიკროორგანიზმები ქმნიან ლორწოს, მაშინ მას ხშირად უერთდება უცხო ფორმები. დასუფთავებისთვის სასურველია გამოვიყენოთ არასელექტიური საშუალება (MPA), რადგან მასზე დამაბინძურებლები უკეთესად იზრდება და უფრო ადვილად ვლინდება.

იზოლირებული კოლონიების მიღება მყარ საკვებ გარემოზე მიიღწევა მიკროორგანიზმების სუსპენზიის სპატულით გაცრის გზით ( კოხის მეთოდი), ან ბაქტერიოლოგიური მარყუჟის დახმარებით ( დამღლელი ინსულტის მეთოდი). მიკრობული უჯრედების მექანიკური გამოყოფის შედეგად თითოეულმა მათგანმა შეიძლება წარმოქმნას ერთი მიკრობული სახეობის იზოლირებული კოლონია.

საცერი სპატულით (კოხის მეთოდი)წარმოებულია შემდეგი თანმიმდევრობით:

1) გამდიდრების კულტურის წვეთი დაიტანება მკვებავი საშუალების ზედაპირზე ჭიქის No1 სტერილური პიპეტით და ნაწილდება სტერილური სპატულით;

2) სპატულა ამოიღება, ფინჯანი სწრაფად იხურება და სტერილიზაციის გარეშე გადააქვთ No2 ჭიქაში. მოახდინეთ კულტურის განაწილების სიმულაცია გარემოს მთელ ზედაპირზე მის ზედაპირზე შეხებით სპატულის იმავე მხარეს, რომელიც ადრე გამოიყენებოდა ნიმუშის გასანაწილებლად;

3) ზუსტად იგივე მოქმედებები ტარდება No3 ჭიქაში, რის შემდეგაც ხდება სპატულის სტერილიზაცია;

4) დათესილი ჭიქები მოთავსებულია თერმოსტატში და ინკუბირებულია ოპტიმალურ ტემპერატურაზე.

გარკვეული დროის შემდეგ თერმოსტატიდან ჭიქებს აშორებენ და მიკროორგანიზმების ზრდას სწავლობენ. ჩვეულებრივ, No1 ჭურჭელში შეინიშნება ბაქტერიების უწყვეტი ზრდა, შემდგომ კერძებში აღინიშნება კოლონიები.

მარყუჟის გაცრა (დამშლელი ინსულტის მეთოდი)გულისხმობს ბაქტერიოლოგიური მარყუჟის დანერგვას გამდიდრების კულტივიდან პეტრის ჭურჭელში აგარის გარემოს ზედაპირზე. პირველ ეტაპზე, კულტურებთან მარყუჟი გამოიყენება პარალელური დარტყმების სერიით აგარის გარემოზე (სურათი 4.2, მაგრამ). მარყუჟი სტერილიზდება, გაცივდება აგარის საშუალების დაუნოკულირებელ ნაწილზე და დახაზულია დარტყმების სერია პირველის პერპენდიკულარული მიმართულებით (სურათი 4.2, ბ). შემდეგ მარყუჟი კვლავ სტერილიზდება, გაცივდება და მიმართულია შტრიხებით AT(სურათი 4.2), ხოლო შემდეგი სტერილიზაციის შემდეგ - მიმართულებით გ(სურათი 4.2). ჭიქები მოთავსებულია თერმოსტატში და გარკვეული დროის შემდეგ მხედველობაში მიიღება შედეგები. ჩვეულებრივ ინსულტებზე მაგრამდა ბიზრდება კოლონიების დიდი რაოდენობა (ზოგჯერ უწყვეტი ზრდა), ხოლო პარალიზებზე ATდა გიქმნება იზოლირებული კოლონიები.

სურათი 4.2 - ბაქტერიების დაცრის სქემა ინსულტით იზოლირებული კოლონიების მისაღებად

სერიული განზავება მყარ გარემოში- ფირფიტის აცრის უმარტივესი მეთოდი, რომელიც მდგომარეობს იმაში, რომ სინჯის სტერილური მდნარი და გაცივებული აგარით სინჯის მილში ჩაყრის შემდეგ გარემოს ურევენ, ასხამენ პეტრის ჭურჭელში და აძლევენ გამაგრებას. კარგად იზოლირებული კოლონიების მისაღებად მზადდება თანმიმდევრული ათჯერადი განზავების სერია და 1 მლ ნიმუშები დაუყოვნებლივ ემატება ჭურჭელს, ემატება 15-20 მლ გამდნარი აგარის გარემო და ურევენ ჭურჭლის შერყევის გზით. ზოგჯერ ცალკეული კოლონიები ჩაეფლო აგარში და მათი ამოღება შესაძლებელია მხოლოდ მექანიკურად. ასევე ცუდია ისიც, რომ ბაქტერიები გარკვეული დროის განმავლობაში დნება აგარის ტემპერატურაზე.

სუფთა კულტურა არის მიკროორგანიზმების ერთობლიობა, რომლებიც მიეკუთვნებიან იმავე სახეობას. ამ მასალის მოპოვება არის კვლევის აუცილებელი მომენტი ლაბორატორიული დიაგნოსტიკური ტექნიკის განხორციელებაში. ბაქტერიების სუფთა კულტურების გამოსაყოფად გამოიყენება სისხლის, ნახველის, განავლის ნაცხი, გამოკვლეულია ჩირქოვანი, ასევე სხვა ბიოლოგიური მასალა. ბუნებრივ პირობებში (ჰაერში, წყალში, ნიადაგში), საკვები პროდუქტები, ცხედრებში (ადამიანი, ცხოველი) შეიცავს სხვადასხვა სახის მიკროორგანიზმების გაერთიანებებს.

სუფთა კულტურის გამოყოფა მნიშვნელოვანია მიკრობების თვისებების დეტალური შესწავლისთვის: მორფოლოგიური, კულტურული, ბიოქიმიური და ასევე ანტიგენური. ამ კვლევის მეთოდების შედეგების საფუძველზე შესაძლებელია დადგინდეს, რომ პათოგენი მიეკუთვნება გარკვეულ ტიპს და ტიპს, სხვა სიტყვებით რომ ვთქვათ, მისი იდენტიფიკაციის განხორციელება.

ბაქტერიების ბიოლოგიური გამოყოფის პრინციპები გულისხმობს მიკრობების სასიცოცხლო აქტივობის მახასიათებლების გათვალისწინებას კვლევის ყველაზე ოპტიმალური მეთოდების არჩევის მიზნით. შერჩეული მეთოდები გარკვეულ პარამეტრებში უნდა შეესაბამებოდეს პათოგენს.

1. სუნთქვის ტიპი. ბაქტერიებს შორის გამოიყოფა აერობული და ანაერობული წარმომადგენლების ჯგუფები. ანაერობული მიკრობების მისაღებად საკვლევ მასალას აცხელებენ. შემდეგი ეტაპი არის მიკრობის გაშენება ანაერობულ პირობებში. აერობული და ანაერობული ბაქტერიების მიღების მეთოდები განსხვავებულია.
2. სპორულაცია. ზოგიერთი ბაქტერიის სპორული უნარი უზრუნველყოფს მიკროორგანიზმების დაცვას და უსაფრთხოებას.
3. ბაქტერიების წინააღმდეგობა ტუტეებისა და მჟავების აგრესიული ეფექტის მიმართ. ზოგიერთი ტიპის ბაქტერიების წინააღმდეგობა ამ ნივთიერებების მიმართ უზრუნველყოფს საცდელი მასალის მაქსიმალურ გაწმენდას სხვა ბაქტერიების შერევისგან ტუტე ან მჟავა ხსნარებით.
4. ბაქტერიული ორგანიზმების მობილურობა. მოძრავი მიკროორგანიზმების სუფთა კულტურის გამოსაყოფად გამოიყენება მიკრობების კულტურების გამოყოფის მეთოდები კონდენსატის წვეთში.
5. მიკროორგანიზმების მგრძნობელობა ანტიბიოტიკების, გარკვეული ქიმიკატების და სხვა ანტიმიკრობული აგენტების მიმართ. ზოგიერთი პათოგენისთვის, კულტურის იზოლაციის მეთოდები შერჩევითი (სპეციფიკური) მკვებავი საშუალებების გამოყენებით ყველაზე სასურველია.
6. ანტიბიოტიკები. გაასუფთავეთ მასალა დამატებითი მიკროორგანიზმებისგან.
7. ბაქტერიების უნარი შეაღწიონ ხელუხლებელ კანში. ეს თვისება თანდაყოლილია ზოგიერთ ჯიშში, რომელსაც აქვს აგრესიის ფაქტორები.
8. ცხოველების მგრძნობელობა ინფექციური წარმოშობის გარკვეული დაავადებების მიმართ.

პათოგენის შეფასების მეთოდები

ბაქტერიული უჯრედების სუფთა კულტურების მისაღებად გამოიყენება მრავალი მეთოდი. თითოეული მათგანი გამოიყენება კონკრეტულ სიტუაციაში და აქვს თანმიმდევრული მკაფიო ნაბიჯები პათოგენის კოლონიების მისაღებად. განვიხილოთ ყველაზე პოპულარული.

პასტერის ტექნიკა

ეს არის სუფთა კულტურების განზავება ბაქტერიების ზრდის გარემოში (თხევადი თანმიმდევრულობა) 1 უჯრედის კონცენტრაციამდე სითხის მოცულობაზე. შერჩევის ამ მეთოდს უდიდესი ისტორიული მნიშვნელობა აქვს.

კოხის ტექნიკა

ასევე ცნობილია, როგორც "ფირფიტის გავრცელების" ტექნიკა. ეს არის მასალის განზავება კვლევისთვის აგარში (მდნარ მდგომარეობაში 48-50 ° C ტემპერატურით). შემდეგ მიღებულ შემადგენლობას ასხამენ პეტრის ჭურჭელში, სადაც უნდა გამაგრდეს.

კულტურები, როგორც წესი, ტარდება ბოლო 3-4 განზავებიდან, რადგან იქ უკვე ცოტა ბაქტერიაა. ამრიგად, მკვებავ გარემოზე მიკრობების ზრდის დროს ჩნდება მიკროორგანიზმების იზოლირებული კოლონიები, რომლებიც იბადებიან მარტოხელა დედის უჯრედიდან. შემდეგ, იზოლირებული კოლონია შეიძლება შეირჩეს აგარის სიღრმიდან და გადავიტანოთ ახალ მკვებავ გარემოში. შემდეგი ნაბიჯი არის პათოგენის იდენტიფიკაცია და იზოლაცია.

შუკევიჩის ტექნიკა

იგი გამოიყენება მაშინ, როდესაც აუცილებელია პროტეუს აერობების ან ნებისმიერი სხვა მიკრობის სუფთა კულტურის იზოლირება, რომელსაც ახასიათებს "მცოცავი" ზრდა. დარგეთ კულტურები აგარის დახრილობის ძირში შედედებულ წყალში.

სუფთა კულტურის გამოყოფის ამ მეთოდით, მობილური ფიჭური ორგანიზმები (Proteus) ამოდიან აგარის დახრილობის ზევით, ხოლო უმოძრაო ფორმები არ ცვლის ადგილს სათესლე გარემოზე. გაღივებული კულტურის ზედა კიდეების სუბკულტურებით, შეიძლება მიღებულ იქნას სუფთა ბაქტერიული კულტურა.

დრიგალსკის ტექნიკა

დრიგალსკის მეთოდი საკმაოდ ფართოდ გამოიყენება ბიოლოგიური მასალის შესწავლისას კულტურების სინჯარაში ბულიონით ან ფიზიოლოგიური ხსნარით განზავებით.

შემდეგი ნაბიჯი: სტერილური მინის სპატულის გამოყენებით, მიღებული ხსნარის ერთი წვეთი თანაბრად ნაწილდება 1-ლი ჭიქაში მკვებავი მასალის ზედაპირზე. შემდეგ ცეცხლზე სპატულის დაწვის გარეშე, იგივე თესვას აკეთებენ მე-2 და მე-3 თასზე. დრიგალსკის მეთოდის არსი მდგომარეობს იმაში, რომ კულტურების ყოველი შემდგომი თესვისას ბაქტერიების (აერობების) კონცენტრაცია სულ უფრო და უფრო ნაკლებია. მე-3 ფირფიტაზე ისინი საკმაოდ დაშორებულია, თითოეული ბაქტერიული უჯრედი წარმოშობს კლონურ უჯრედებს (იზოლირებული კოლონიის სახით). ისინი სუბკულტურირებულია დახრილ აგარზე პათოგენების დაგროვებისთვის.

ვაინბერგის ტექნიკა

გარკვეული სირთულეები გამოწვეულია ანაერობული პათოგენების სუფთა კულტურების იზოლაციით, თუ მიკროორგანიზმები არ იღუპებიან ჟანგბადის მოლეკულებთან შეხებისას. ტექნიკის არსი არის ანაერობული მიკრობების მოცილება (მასალის შემადგენლობაში) ოდნავ გაცივებულ (45-50 ° C) მდნარ მკვებავ გარემოში (აგაროზირებული). გაატარეთ 6-10 განზავება. შემდეგ მოდის შემდეგი ეტაპი: აუცილებელია შემადგენლობის სწრაფად გაცივება სინჯარაში და მისი ზედაპირის შევსება ნავთობის ჟელესა და პარაფინის ზეთის ნარევით, რომელიც ხელს უშლის ჰაერის შეღწევას და ხელს უწყობს ანაერობული პირობების განვითარებას.

ხელსაყრელი თესვისას იზოლირებული კოლონიები აღმოცენდებიან მეორე დღეს, რომელთა ამოღება შესაძლებელია მილიდან სანთურით გახურებით. კულტურები ამოღებულია მოჭრილი აგარის სვეტიდან შემდგომი გამოკვლევისთვის. შედეგად მიღებული კოლონიები მოთავსებულია თხევად საკვებ გარემოში, სადაც შეიძლება დასრულდეს ანაერობული პათოგენების კოლონიის იზოლირების საფეხურები.

ჰუნგატის ტექნიკა

მას ხშირად იყენებენ ჟანგბადის მაღალი მგრძნობელობის მქონე აერობული მიკრობების იზოლირებისთვის. აერობების კულტურის ასეთი იზოლაციის განხორციელებისას გამოიყენება საცდელი მილების ბრუნვის ტექნიკა.

აერობული ბაქტერიების ინოკულაციის მეთოდები მოიცავს მათ გამრავლებას გამდნარ აგარის გარემოზე. საცდელ მილში ინერტული აირის არსებობა შესაძლებელს ხდის აერობული ბაქტერიების იზოლირებული სვეტების გაზრდას ისე, რომ აერობების იზოლირებული კულტურები 2-3 დღის განმავლობაში შეუიარაღებელი თვალითაც კი ნათლად ჩანს.

მიკრომანიპულატორი

ეს არის მიკრომანიპულატორის გამოყენებით ცალკეული ბაქტერიული უჯრედების იზოლირების ტექნიკა. მიკრომანიპულატორი არის სპეციალური მოწყობილობა, რომელიც შეიძლება გამოყენებულ იქნას სუსპენზიიდან ერთი უჯრედის ამოსაღებად და ასევე იძლევა საცდელ მილში კულტურის დათესვის შესაძლებლობას.

გამომწვევის შემდგომი იდენტიფიკაცია ხორციელდება პათოგენის ყველა ჩამოთვლილი თვისების (აერობები და ანაერობები), აგრეთვე სხვადასხვა ნივთიერებებთან მათი ურთიერთქმედების თავისებურებების გათვალისწინებით.