Mga espesyal na kapaligiran.
Sa bacteriology, ang dry nutrient media ng pang-industriyang produksyon ay malawakang ginagamit, na mga hygroscopic powder na naglalaman ng lahat ng mga bahagi ng daluyan, maliban sa tubig. Para sa kanilang paghahanda, ginagamit ang mga tryptic digest ng murang mga produktong hindi pagkain (mga dumi ng isda, karne at pagkain ng buto, teknikal na casein). Ang mga ito ay maginhawa para sa transportasyon, maaaring maimbak ng mahabang panahon, mapawi ang mga laboratoryo mula sa napakalaking proseso ng paghahanda ng media, at dalhin ang isyu ng standardisasyon ng media na mas malapit sa resolusyon. Ang industriya ng medikal ay gumagawa ng dry media ng Endo, Levin, Ploskirev, bismuth sulfite agar, nutrient agar, carbohydrates na may BP indicator at iba pa.
mga thermostat
Ang mga thermostat ay ginagamit para sa paglilinang ng mga mikroorganismo.
Ang thermostat ay isang device na nagpapanatili ng pare-parehong temperatura. Ang aparato ay binubuo ng isang pampainit, isang silid, mga dobleng dingding sa pagitan ng kung saan ang hangin o tubig ay nagpapalipat-lipat. Ang temperatura ay kinokontrol ng isang termostat. Ang pinakamainam na temperatura para sa pagpaparami ng karamihan sa mga microorganism ay 37°C.
GAWAIN 7
PAKSANG-ARALIN: MGA PARAAN PARA SA ISOLATION NG PURE AEROBIC CULTURE. MGA YUGTO NG ISOLATION NG PURE CULTURE NG AEROBIC BACTERIA SA PAMAMARAAN NG MECHANICAL UNCOUPLING
Lesson plan
1. Ang konsepto ng "purong kultura" ng bakterya
2. Mga pamamaraan para sa paghihiwalay ng mga purong kultura sa pamamagitan ng mekanikal na paghihiwalay
3. Biyolohikal na pamamaraan para sa paghihiwalay ng mga purong kultura
4. Mga pamamaraan para sa pagtukoy ng bakterya
Layunin ng aralin: Upang ipaalam sa mga mag-aaral ang iba't ibang mga pamamaraan para sa paghihiwalay ng mga dalisay na kultura, upang turuan kung paano gumawa ng mga pananim na may loop, stroke, prick
Mga patnubay para sa demonstrasyon
Sa kanilang likas na tirahan, ang bakterya ay matatagpuan sa mga asosasyon. Upang matukoy ang mga katangian ng microbes, ang kanilang papel sa pagbuo ng proseso ng pathological, kinakailangan na magkaroon ng bakterya sa anyo ng mga homogenous na populasyon (purong kultura). Ang purong kultura ay isang koleksyon ng mga bacterial na indibidwal ng parehong species na lumaki sa isang nutrient medium.
Mga pamamaraan para sa paghihiwalay ng mga purong kultura ng aerobic bacteria
Pasteur Method Koch Method Biological Physical
(may makasaysayang (plate wiring)
ibig sabihin)
Paraan ng Kemikal
Shchukevich
Moderno
Paghahasik gamit ang isang loop Paghahasik gamit ang isang spatula
(Paraan ng Drigalski)
Mga pamamaraan para sa paghihiwalay ng mga purong kultura:
1. Ang mga paraan ng mekanikal na paghihiwalay ay batay sa paghihiwalay ng mga mikrobyo sa pamamagitan ng sunud-sunod na pagkuskos ng materyal na pansubok sa ibabaw ng agar.
a) Pamamaraan ng Pasteur - ay may kahalagahan sa kasaysayan, nagbibigay para sa pare-parehong pagbabanto ng materyal sa pagsubok sa isang likidong nutrient medium sa pamamagitan ng rolling method
b) Ang pamamaraan ng Koch - ang paraan ng mga layout ng plato - ay batay sa sunud-sunod na pagbabanto ng materyal sa pagsubok na may meat-peptone agar, na sinusundan ng pagbuhos ng mga test tube na may diluted na materyal sa mga Petri dish.
c) Pamamaraan ng Drygalski - kapag naghahasik ng materyal na sagana sa binhi na may microflora, gumamit ng 2-3 tasa para sa sunud-sunod na paghahasik gamit ang isang spatula.
d) Paghahasik gamit ang isang loop sa parallel stroke.
2. Ang mga biological na pamamaraan ay batay sa mga biological na katangian ng mga pathogen.
a) Biyolohikal - impeksiyon ng mga hayop na napakasensitibo, kung saan ang mga mikrobyo ay mabilis na dumami at nag-iipon. Sa ilang mga kaso, ang pamamaraang ito ay ang isa lamang na nagpapahintulot sa iyo na ihiwalay ang kultura ng pathogen mula sa isang taong may sakit (halimbawa, may tularemia), sa ibang mga kaso ito ay mas sensitibo (halimbawa, ang paghihiwalay ng pneumococcus sa mga puting daga. o ang causative agent ng tuberculosis sa guinea pig).
b) Kemikal - batay sa acid resistance ng mycobacteria. Upang palayain ang materyal mula sa kasamang flora, ito
ginagamot sa isang acid solution. Tubercle bacilli lamang ang tutubo, dahil ang acid-tolerant microbes ay pinapatay ng acid.
c) Ang pisikal na pamamaraan ay batay sa paglaban ng mga spores sa init. Upang ihiwalay ang mga kultura ng spore-forming bacteria mula sa
mixtures, ang materyal ay pinainit sa 80°C at inoculated sa isang nutrient medium. Tanging ang spore bacteria ay lalago, dahil ang kanilang mga spore ay nanatiling buhay at nagbigay ng paglaki.
d) Paraan ni Shukevich - batay sa mataas na kadaliang mapakilos ng bulgar na proteus, na may kakayahang gumagapang na paglaki.
Paraan ng Paghahanda ng Agar Plate
Ang MPA ay natutunaw sa isang paliguan ng tubig, pagkatapos ay pinalamig sa 50-55°C. Ang leeg ng vial ay sinunog sa apoy ng isang lampara ng alkohol, ang mga pinggan ng Petri ay binuksan upang ang leeg ng mga vial ay pumasok, nang hindi hinahawakan ang mga gilid ng pinggan, ibuhos ang 10-15 ml ng MPA, isara ang takip, iling ang ulam upang ang daluyan ay pantay na ibinahagi, iwanan ito sa isang pahalang na ibabaw hanggang sa tumigas. Pagkatapos matuyo, ang mga plato na may plate agar ay iniimbak sa malamig.
Paghahasik ng loop
Ang isang patak ng materyal ay kinuha gamit ang isang sterile cooled loop, ang isang gilid ng tasa ay bahagyang binuksan gamit ang kaliwang kamay, isang loop ay ipinasok sa loob at ang ilang mga stroke ay ginawa sa kabaligtaran gilid sa isang lugar, pagkatapos ay ang loop ay napunit off at ang materyal ay inoculated na may parallel stroke mula sa isang gilid ng tasa sa isa pa na may pagitan ng 5-6 mm. Sa simula ng paghahasik, kapag magkakaroon ng maraming microbes sa loop, magbibigay sila ng confluent growth, ngunit sa bawat stroke ng microbes sa loop, magkakaroon ng mas kaunti at mas kaunti, at mananatili silang nag-iisa at nagbibigay ng nakahiwalay. mga kolonya.
Paghahasik ayon sa pamamaraang Drygalski
Ang pamamaraang ito ay ginagamit kapag naghahasik ng materyal na abundantly seeded na may microflora (pus, feces, plema). Para sa paghahasik ayon sa pamamaraan ng Drygalsky, isang spatula at ilang tasa (3-4) ang kinuha. Ang spatula ay isang tool na gawa sa metal wire o glass dart, na nakatungo sa anyo ng isang tatsulok o L-shaped. Ang materyal ay ipinakilala sa unang tasa na may isang loop o pipette at pantay na ibinahagi gamit ang isang spatula sa ibabaw ng daluyan, na may parehong spatula, nang hindi nasusunog ito, ang materyal ay ipinahid sa nutrient medium sa pangalawang tasa, at pagkatapos sa pangatlo. Sa inoculation na ito, ang unang plato ay magkakaroon ng magkakaugnay na paglaki, at ang mga nakahiwalay na kolonya ay lalago sa mga susunod na plato.
Kung, sa batayan ng ilang mga sintomas sa mga halaman at ang mga resulta ng mikroskopikong pagsusuri, pinaghihinalaang ang causative agent ng sakit ay isang bacterium, ang susunod na hakbang ay dapat na ihiwalay ito.
Sa kasong ito, ipinapalagay na ang pathogen ay kontaminado sa mga nauugnay na organismo, ibig sabihin, mayroong isang halo-halong populasyon. Upang makuha ang pathogen bilang isang hiwalay na lumalagong kolonya, ang tissue macerate ay dapat na guhitan papunta sa daluyan.
Paghahasik ng stroke. Ang isang maliit na halaga ng tissue ng halaman na macerate na naglalaman ng bakterya ay kinuha gamit ang isang calcined inoculation loop at may mga magaan na paggalaw, nang hindi napinsala ang ibabaw ng agar, ay inilapat sa inihandang nutrient medium na may 4-6 na stroke. Ang pagkakaroon ng muling pag-apoy sa loop, ang tasa na may daluyan ay nakabukas sa 90 ° sa kanan at pagkatapos ay 4-6 pang mga stroke ay inilapat mula sa pangalawang stroke, ang karayom ay muling sinindihan at ang ikatlong inoculation ay isinasagawa. Nakamit nito ang gayong pagbabanto ng panimulang materyal, kung saan ang bakterya, pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog sa isang termostat para sa 48-72 na oras sa 28 ° C, ay bumubuo ng magkakahiwalay na mga kolonya ng iba't ibang mga hugis at kulay. Ang mga kolonya ay inililipat para sa karagdagang pag-aaral sa mga slant agar tubes. Ang isang kolonya ay kinuha gamit ang isang calcined loop at, na may isang maingat na paggalaw sa anyo ng isang ahas o zigzag, ay inilapat sa nutrient agar.
Paraan ng pagbuhos ng Koch. Tinitiyak ng paraan ng pagbuhos ng Koch na ang bawat kolonya ay nabuo mula sa iisang bacterial cell. Pinakamainam na suspindihin ang panimulang materyal sa sterile na tubig at ilapat ang paraan ng Koch lamang sa pagbabanto na ito. Ang isang maliit na halaga ng suspensyon ay inilipat sa unang test tube na may nutrient medium na pinalamig hanggang 60 °C. Pagkatapos ang mga nilalaman ng tubo ay halo-halong may inoculum sa pamamagitan ng pag-ikot nito sa pagitan ng mga palad. Susunod, kunin ang pangalawang test tube, maingat na buksan ito sa apoy ng burner at ilipat ang tatlong bahagi ng substrate papunta dito mula sa unang test tube na may malalaking loop. Ang mga nilalaman ng test tube pagkatapos ng pagpapaputok sa leeg at stopper ay ibinubuhos sa unang Petri dish, bahagyang binubuksan ang takip ng tasa na sapat lamang upang maipasok ang leeg ng test tube sa ilalim nito. Kaagad pagkatapos ng pagbuhos, ang tasa ay sarado at ang nutrient medium ay pantay na ipinamamahagi sa maingat na paggalaw.
Pagkatapos ng lubusan na paghahalo ng mga nilalaman ng pangalawang test tube, kunin ang pangatlong test tube at ilipat ang anim na bahagi ng substrate dito na may isang loop mula sa pangalawa. Ang mga nilalaman ng test tube ay ibinubuhos sa isang tasa, at ang mga nilalaman ng test tube, pagkatapos ng paghahalo, ay ibinuhos sa isang tasa. Ang mga tasa na may daluyan ay inilubog sa isang termostat sa 28°C, pagkaraan ng ilang araw ang bakterya na nasa panimulang materyal ay bumubuo ng mga kolonya.
Serial breeding. Kung, halimbawa, kinakailangan na ihiwalay ang bakterya mula sa lupa, pagkatapos ay ginagamit ang serial dilution. Ang sterile nutrient medium (15 ml bawat ulam) ay ibinubuhos sa mga pinggan, 0.1 ml ng huling tatlong dilutions ng suspensyon ay inilapat sa hardened agar at kumalat sa ibabaw na may glass spatula.
Upang ihiwalay ang bakterya, 1 g ng lupa ay sinuspinde sa 9 ML ng tubig, inalog ng mabuti, pinapayagan na tumayo ng ilang segundo, at ang mga serial dilution ay inihanda mula sa suspensyon. Sa pamamaraang ito, matutukoy ang bilang ng mga mikroorganismo sa bawat sample.
Kung makakita ka ng error, mangyaring i-highlight ang isang piraso ng teksto at i-click Ctrl+Enter.
Pasteur Method Koch Method Biological Physical
(may makasaysayang (lamellar
halaga) mga kable) Shchukevich Chemical Method
Moderno
Paghahasik gamit ang isang loop Paghahasik gamit ang isang spatula
(Paraan ng Drigalski)
Mga pamamaraan para sa paghihiwalay ng mga purong kultura (Skema 11):
1. Mga paraan ng paglabas ng mekanikal batay sa paghihiwalay ng mga mikrobyo sa pamamagitan ng sunud-sunod na paggiling ng materyal sa pagsubok sa ibabaw ng agar.
a) Paraan ng Pasteur- ay may kahalagahan sa kasaysayan, nagbibigay para sa sunud-sunod na pagbabanto ng materyal sa pagsubok sa isang likidong nutrient medium sa pamamagitan ng rolling method
b) Paraan ng Koch- paraan ng mga layout ng plato - batay sa sequential dilution ng test material na may meat-peptone agar, na sinusundan ng pagbuhos ng mga test tube na may diluted na materyal sa mga Petri dish
sa) Paraan ng Drygalski- kapag naghahasik ng materyal na abundantly seeded na may microflora, gumamit ng 2-3 tasa para sa sunud-sunod na paghahasik na may isang spatula.
G) Loop paghahasik na may parallel stroke.
2. biyolohikal na pamamaraan batay sa mga biological na katangian ng mga pathogen.
a) Biyolohikal- impeksyon ng mga hayop na napakasensitibo, kung saan ang mga mikrobyo ay mabilis na dumami at nag-iipon. Sa ilang mga kaso, ang pamamaraang ito ay ang isa lamang na nagpapahintulot sa iyo na ihiwalay ang kultura ng pathogen mula sa isang taong may sakit (halimbawa, may tularemia), sa ibang mga kaso ito ay mas sensitibo (halimbawa, ang paghihiwalay ng pneumococcus sa mga puting daga. o ang causative agent ng tuberculosis sa guinea pig).
b) Kemikal– batay sa acid resistance ng mycobacteria. Upang palayain ang materyal mula sa kasamang flora, ito
ginagamot sa isang acid solution. Tubercle bacilli lamang ang tutubo, dahil ang acid-tolerant microbes ay pinapatay ng acid.
sa) pisikal na pamamaraan batay sa paglaban ng mga spores sa init. Upang ihiwalay ang mga kultura ng spore-forming bacteria mula sa
mixtures, ang materyal ay pinainit sa 80°C at inoculated sa isang nutrient medium. Tanging ang spore bacteria ay lalago, dahil ang kanilang mga spore ay nanatiling buhay at nagbigay ng paglaki.
G) Pamamaraan ni Shchukevich- batay sa mataas na kadaliang mapakilos ng bulgar na proteus, na may kakayahang gumagapang na paglaki.
Ang paraan ng paglipat mula sa mga kolonya patungo sa slant agar at BCH:
a) Paglipat mula sa mga kolonya sa agar slant
Ang takip ng tasa ay bahagyang nakabukas, ang isang bahagi ng isang indibidwal na kolonya ay tinanggal gamit ang isang calcined cooled loop, isang test tube na may sterile slant agar ay binuksan, hawak ito sa kaliwang kamay sa isang hilig na posisyon, upang ang ibabaw ng maaaring obserbahan ang daluyan. Ang loop na may kultura ay inilipat sa test tube nang hindi hinahawakan ang mga dingding, ipinahid sa nutrient medium, dumudulas sa ibabaw mula sa isang dulo ng test tube patungo sa isa pa, itinaas ang mga stroke sa tuktok ng medium - paghahasik na may isang stroke. Ang tubo ay sarado at, nang hindi binibitawan, ang pangalan ng seeded microbe at ang petsa ng paghahasik ay nilagdaan.
b) Paglilipat mula sa kolonya patungo sa sabaw ng karne-peptone
Ang pamamaraan ng reseeding sa MPB ay karaniwang kapareho ng kapag naghahasik sa isang siksik na daluyan. Kapag naghahasik sa BCH, ang loop na may materyal dito ay nahuhulog sa daluyan. Kung ang materyal ay malapot at hindi inalis mula sa loop, ito ay hadhad sa dingding ng sisidlan, at pagkatapos ay hugasan ng isang likidong daluyan. Ang likidong materyal na nakolekta gamit ang isang sterile Pasteur o graduated pipette ay ibinubuhos sa isang nutrient medium.
Bilang resulta ng malayang gawain, dapat malaman ng mag-aaral:
1. Mga pamamaraan para sa paghihiwalay ng isang purong kultura ng mga mikroorganismo
2. Mga pamamaraan para sa paglinang ng mga mikroorganismo
Magagawang:
1. Mga kasanayan sa pagsunod sa mga tuntunin ng rehimeng anti-epidemya at mga pag-iingat sa kaligtasan
2. Disimpektahin ang materyal, gamutin ang mga kamay
3. Maghanda ng mga paghahanda mula sa bacterial colonies
4. Microscope ang mga kolonya
5. Gram stain microorganisms
GAWAIN 8
PAKSANG-ARALIN. Mga pamamaraan para sa paghihiwalay ng mga dalisay na kultura (ipinagpapatuloy). Enzymatic na aktibidad ng bakterya at mga pamamaraan para sa pag-aaral nito.
Medyo kakaunting pamamaraan ang kilala para sa paghihiwalay ng bakterya bilang mga purong kultura. Ito ay kadalasang ginagawa sa pamamagitan ng paghihiwalay ng mga indibidwal na selula sa solid growth media gamit ang streak-inoculation method o sa pamamagitan ng pagbuhos ng kaunting likidong kultura sa mga plato ( paraan ng pagbabanto). Gayunpaman, ang pagkuha ng isang hiwalay na kolonya ay hindi palaging ginagarantiyahan ang kadalisayan ng kultura, dahil ang mga kolonya ay maaaring lumago hindi lamang mula sa mga indibidwal na selula, kundi pati na rin mula sa kanilang mga kumpol. Kung ang mga mikroorganismo ay bumubuo ng uhog, kung gayon ang mga dayuhang anyo ay madalas na nakakabit dito. Para sa paglilinis, mas mainam na gumamit ng non-selective medium (MPA) dahil mas tumutubo ang mga contaminant dito at mas madaling matukoy.
Ang pagkuha ng mga nakahiwalay na kolonya sa isang solidong nutrient medium ay nakakamit alinman sa pamamagitan ng pagsala ng isang suspensyon ng mga microorganism gamit ang isang spatula ( Paraan ng Koch), o sa tulong ng isang bacteriological loop ( nakakapanghinang paraan ng stroke). Bilang resulta ng mekanikal na paghihiwalay ng mga microbial cell, ang bawat isa sa kanila ay maaaring magbunga ng isang nakahiwalay na kolonya ng isang microbial species.
Pagsala gamit ang isang spatula (paraan ng Koch) ginawa sa sumusunod na pagkakasunud-sunod:
1) ang isang patak ng kultura ng pagpapayaman ay inilapat sa ibabaw ng nutrient medium sa tasa No. 1 na may sterile pipette at ipinamahagi sa isang sterile spatula;
2) ang spatula ay inilabas, ang tasa ay mabilis na isinara at ang spatula ay inilipat sa tasa No. 2 nang hindi ito isterilisado. Gayahin ang distribusyon ng kultura sa buong ibabaw ng medium sa pamamagitan ng pagpindot sa ibabaw nito gamit ang parehong gilid ng spatula na dating ginamit upang ipamahagi ang sample;
3) eksakto ang parehong mga aksyon ay isinasagawa sa tasa No. 3, pagkatapos kung saan ang spatula ay isterilisado;
4) ang mga seeded cup ay inilalagay sa isang termostat at incubated sa pinakamabuting kalagayan na temperatura.
Pagkatapos ng isang tiyak na oras, ang mga tasa ay tinanggal mula sa termostat at ang paglaki ng mga microorganism ay pinag-aralan. Karaniwan, ang patuloy na paglaki ng bakterya ay sinusunod sa ulam No. 1, ang mga kolonya ay nabanggit sa kasunod na mga pinggan.
Loop sieving (depleting stroke method) nagsasangkot ng inoculation ng isang bacteriological loop mula sa isang enrichment culture papunta sa ibabaw ng isang agar medium sa Petri dishes. Sa unang yugto, ang isang loop na may kultura ay inilapat na may isang serye ng mga parallel stroke sa agar medium (Larawan 4.2, PERO). Ang loop ay isterilisado, pinalamig sa uninoculated na bahagi ng agar medium at isang serye ng mga stroke ay iginuhit sa direksyon na patayo sa una (Figure 4.2, B). Pagkatapos ang loop ay isterilisado muli, pinalamig at inilapat ang mga stroke sa direksyon AT(Figure 4.2), at pagkatapos ng susunod na isterilisasyon - sa direksyon G(Larawan 4.2). Ang mga tasa ay inilalagay sa isang termostat at pagkatapos ng isang tiyak na oras ang mga resulta ay isinasaalang-alang. Karaniwan sa mga stroke PERO at B isang malaking bilang ng mga kolonya ang lumalaki (minsan tuloy-tuloy na paglaki), habang nasa mga stroke AT at G nabuo ang mga hiwalay na kolonya.
Figure 4.2 - Scheme ng sieving bacteria na may mga stroke para makakuha ng isolated colonies
Mga serial dilution sa solid media- ang pinakasimpleng paraan ng plate inoculation, na binubuo sa katotohanan na pagkatapos ng inoculating ang sample sa isang test tube na may sterile na natunaw at pinalamig na agar, ang daluyan ay halo-halong, ibinuhos sa isang Petri dish at pinapayagan na patigasin. Upang makakuha ng mahusay na nakahiwalay na mga kolonya, ang isang serye ng sunud-sunod na sampung beses na dilution ay inihanda at 1 ml ng mga sample ay idinagdag kaagad sa ulam, 15-20 ml ng molten agar medium ay idinagdag at halo-halong sa pamamagitan ng pag-alog ng pinggan. Minsan ang mga indibidwal na kolonya ay inilulubog sa agar at maaari lamang alisin sa mekanikal na paraan. Masama rin na ang bakterya ay nasa medium sa temperatura ng molten agar nang ilang panahon.
Ang isang purong kultura ay isang koleksyon ng mga microorganism na kabilang sa parehong species. Ang pagkuha ng materyal na ito ay isang kinakailangang sandali ng pananaliksik sa pagpapatupad ng mga pamamaraan ng diagnostic ng laboratoryo. Upang ihiwalay ang mga purong kultura ng bakterya, ang mga smear mula sa dugo, plema, feces ay ginagamit, purulent, pati na rin ang iba pang biological na materyal ay sinusuri. Sa mga natural na kondisyon (sa hangin, tubig, lupa), mga produktong pagkain, sa mga bangkay (tao, hayop) mga asosasyon ng iba't ibang uri ng mga mikroorganismo ay nakapaloob.
Ang paghihiwalay ng purong kultura ay mahalaga para sa isang detalyadong pag-aaral ng mga katangian ng microbes: morphological, cultural, biochemical, at din antigenic. Batay sa mga resulta ng mga pamamaraan ng pananaliksik na ito, posibleng maitatag na ang pathogen ay kabilang sa isang tiyak na uri at uri, sa madaling salita, upang maisagawa ang pagkakakilanlan nito.
Ang mga prinsipyo ng biological na paghihiwalay ng mga bakterya ay nagpapahiwatig na isinasaalang-alang ang mga katangian ng mahahalagang aktibidad ng mga mikrobyo upang piliin ang pinakamainam na pamamaraan ng pananaliksik. Ang mga napiling pamamaraan ay dapat tumugma sa pathogen sa ilang mga parameter.
- Uri ng hininga. Sa mga bakterya, ang mga grupo ng aerobic at anaerobic na kinatawan ay nakikilala. Upang makakuha ng anaerobic microbes, ang materyal ng pananaliksik ay pinainit. Ang susunod na yugto ay ang paglilinang ng mikrobyo sa ilalim ng anaerobic na kondisyon. Ang mga pamamaraan para sa pagkuha ng aerobic at anaerobic bacteria ay iba.
- Sporulation. Tinitiyak ng kakayahan ng ilang bakterya na mag-sporulate ang proteksyon at kaligtasan ng mga mikroorganismo.
- Ang paglaban ng bakterya sa mga agresibong epekto ng alkalis at acids. Ang paglaban ng ilang uri ng bakterya sa mga sangkap na ito ay nagsisiguro ng pinakamataas na paglilinis ng materyal sa pagsubok mula sa paghahalo ng iba pang bakterya gamit ang mga solusyon sa alkali o acid.
- Ang kadaliang kumilos ng mga bacterial na organismo. Upang paghiwalayin ang isang purong kultura ng mga motile microorganism, ang mga paraan ng paghihiwalay ng mga kultura ng microbes sa isang drop ng condensate ay ginagamit.
- Pagkadarama ng mga mikroorganismo sa mga antibiotic, ilang partikular na kemikal at iba pang antimicrobial agent. Para sa ilang mga pathogen, ang mga pamamaraan ng paghihiwalay ng kultura gamit ang pumipili (tiyak) na nutrient media ay pinaka-ginustong.
- Mga antibiotic. Linisin ang materyal mula sa mga karagdagang mikroorganismo.
- Ang kakayahan ng bakterya na tumagos sa buo na balat. Ang ari-arian na ito ay likas sa ilang mga varieties na may mga kadahilanan ng pagsalakay.
- Ang pagkamaramdamin ng mga hayop sa ilang mga sakit ng nakakahawang pinagmulan.
Mga Paraan ng Pagsusuri ng Pathogen
Ang isang bilang ng mga pamamaraan ay ginagamit upang makakuha ng mga purong kultura ng mga bacterial cell. Ang bawat isa sa kanila ay ginagamit sa isang partikular na sitwasyon at may sunud-sunod na malinaw na mga hakbang upang makakuha ng mga kolonya ng pathogen. Isaalang-alang ang pinakasikat.
Pasteur technique
Ito ay ang pagbabanto ng mga purong kultura sa bacterial growth medium (liquid consistency) sa isang konsentrasyon ng 1 cell bawat volume ng likido. Ang pamamaraang ito ng pagpili ay may malaking kahalagahan sa kasaysayan.
Teknik ni Koch
Kilala rin bilang ang "plate spread" na pamamaraan. Ito ay isang pagbabanto ng materyal para sa pananaliksik sa agar (sa isang tinunaw na estado na may temperatura na 48-50 ° C). Susunod, ang nagresultang komposisyon ay ibinubuhos sa mga pagkaing Petri, kung saan dapat itong patigasin.
Karaniwang isinasagawa ang mga pananim mula sa huling 3-4 na pagbabanto, dahil kakaunti na ang bakterya doon. Kaya, sa panahon ng paglaki ng mga mikrobyo sa isang nutrient medium, lumilitaw ang mga nakahiwalay na kolonya ng mga mikroorganismo, na ipinanganak mula sa isang solong ina na selula. Pagkatapos, ang isang nakahiwalay na kolonya ay maaaring mapili mula sa lalim ng agar at ilipat sa isang sariwang nutrient medium. Ang susunod na hakbang ay ang pagkilala at paghihiwalay ng pathogen.
Ang pamamaraan ni Shukevich
Ginagamit ito kapag kinakailangan upang ihiwalay ang isang purong kultura ng Proteus aerobes o anumang iba pang microbes na nailalarawan sa pamamagitan ng "gumagapang" na paglaki. Itanim ang mga kultura sa tubig na naka-condensed sa base ng agar slant.
Sa ganitong paraan ng paghihiwalay ng isang purong kultura, ang mga mobile cellular organism (Proteus) ay tumataas sa tuktok ng agar slant, at ang mga immobile na anyo ay hindi nagbabago ng kanilang lokasyon sa seed medium. Sa pamamagitan ng subculturing sa itaas na mga gilid ng germinated kultura, isang purong bacterial kultura ay maaaring makuha.
Ang pamamaraan ni Drygalsky
Ang pamamaraan ng Drygalsky ay medyo malawak na ginagamit sa pag-aaral ng biological na materyal sa pamamagitan ng pagtunaw ng mga kultura sa isang test tube na may sabaw o asin.
Ang susunod na hakbang: gamit ang isang sterile glass spatula, ang isang patak ng resultang solusyon ay ibinahagi nang pantay-pantay sa ibabaw ng nutrient medium sa 1st cup. Pagkatapos, nang hindi sinusunog ang spatula sa apoy, ginagawa nila ang parehong paghahasik sa ika-2 at ika-3 mangkok. Ang kakanyahan ng pamamaraan ng Drygalsky ay na sa bawat kasunod na paghahasik ng mga kultura, ang konsentrasyon ng bakterya (aerobes) ay mas kaunti at mas kaunti. Sa 3rd plate, ang mga ito ay ibinahagi nang magkahiwalay, ang bawat bacterial cell ay nagbibigay ng mga clonal cells (sa anyo ng isang nakahiwalay na kolonya). Ang mga ito ay subcultured sa slant agar para sa akumulasyon ng mga pathogens.
Weinberg technique
Ang ilang mga paghihirap ay sanhi ng paghihiwalay ng mga purong kultura ng mga anaerobic pathogens kung ang mga mikroorganismo ay hindi namamatay sa pakikipag-ugnay sa mga molekula ng oxygen. Ang kakanyahan ng pamamaraan ay upang alisin ang anaerobic microbes (sa komposisyon ng materyal) sa isang bahagyang cooled (45-50 ° C) tunaw nutrient medium (agarosed). Gumastos ng 6-10 dilutions. Pagkatapos ay darating ang susunod na yugto: kinakailangan upang mabilis na palamig ang komposisyon sa test tube at punan ang ibabaw nito ng pinaghalong petrolyo jelly at paraffin oil, na pumipigil sa hangin mula sa pagtagos at nagtataguyod ng pagbuo ng mga kondisyon ng anaerobic.
Sa kanais-nais na paghahasik, ang mga nakahiwalay na kolonya ay tumubo sa ikalawang araw, na maaaring alisin mula sa tubo sa pamamagitan ng pagpainit nito sa isang burner. Ang mga kultura ay naka-loop mula sa cut agar column para sa karagdagang pagsusuri. Ang mga resultang kolonya ay inilalagay sa isang likidong nutrient medium, kung saan ang mga hakbang para sa paghihiwalay ng kolonya ng anaerobic pathogens ay maaaring makumpleto.
diskarteng Hungate
Madalas itong ginagamit upang ihiwalay ang aerobic microbes na may mataas na oxygen sensitivity. Sa pagsasagawa ng naturang paghihiwalay ng kultura ng aerobes, ginagamit ang pamamaraan ng umiikot na mga tubo ng pagsubok.
Ang mga pamamaraan para sa inoculation ng aerobic bacteria ay kinabibilangan ng pagpaparami sa kanila sa isang molten agar medium. Ang pagkakaroon ng inert gas sa isang test tube ay ginagawang posible na lumaki ang mga nakahiwalay na column ng aerobic bacteria sa paraang malinaw na makikita ang mga nakahiwalay na kultura ng aerobes kahit sa mata sa loob ng 2-3 araw.
Micromanipulator
Ito ay isang pamamaraan para sa paghihiwalay ng mga indibidwal na bacterial cell gamit ang isang micromanipulator. Ang micromanipulator ay isang espesyal na aparato na maaaring mahuli ang isang cell mula sa isang suspensyon, pati na rin magbigay ng posibilidad ng seeding ng isang kultura sa isang test tube.
Ang karagdagang pagkilala sa pathogen ay isinasagawa na isinasaalang-alang ang lahat ng nakalistang katangian ng pathogen (aerobes at anaerobes), pati na rin ang mga tampok ng kanilang pakikipag-ugnayan sa iba't ibang mga sangkap.
