Besondere Umgebungen.

In der Bakteriologie werden häufig trockene Nährmedien der industriellen Produktion verwendet, bei denen es sich um hygroskopische Pulver handelt, die alle Komponenten des Mediums außer Wasser enthalten. Zu ihrer Herstellung werden tryptische Verdauungsprodukte billiger Non-Food-Produkte (Fischabfälle, Fleisch- und Knochenmehl, technisches Kasein) verwendet. Sie sind bequem zu transportieren, lange lagerfähig, entlasten Labore von der enormen Medienvorbereitung und bringen das Thema Standardisierung von Medien näher an die Lösung. Die medizinische Industrie produziert Trockenmedien aus Endo, Levin, Ploskirev, Bismutsulfit-Agar, Nähragar, Kohlenhydraten mit BP-Indikator und anderen.

Thermostate

Thermostate werden zur Kultivierung von Mikroorganismen verwendet.

Ein Thermostat ist ein Gerät, das eine konstante Temperatur aufrechterhält. Das Gerät besteht aus einer Heizung, einer Kammer, Doppelwänden, zwischen denen Luft oder Wasser zirkuliert. Die Temperatur wird durch einen Thermostat geregelt. Die optimale Temperatur für die Vermehrung der meisten Mikroorganismen liegt bei 37°C.

AKTIVITÄT 7

THEMA: METHODEN ZUR ISOLIERUNG EINER AEROBISCHEN REINKULTUR. STUFEN DER ISOLATION EINER REINKULTUR AEROBERER BAKTERIEN DURCH DIE METHODE DER MECHANISCHEN ENTKOPPLUNG

Unterrichtsplan

1. Das Konzept der "Reinkultur" von Bakterien

2. Methoden zur Isolierung von Reinkulturen durch mechanische Trennung

3. Biologische Methoden zur Isolierung von Reinkulturen

4. Methoden zur Identifizierung von Bakterien

Zweck des Unterrichts: Die Schüler mit verschiedenen Methoden zum Isolieren von Reinkulturen vertraut zu machen, zu lehren, wie man mit Schleifen, Strichen und Stichen erntet

Richtlinien für die Demonstration

In ihrem natürlichen Lebensraum kommen Bakterien in Verbänden vor. Um die Eigenschaften von Mikroben und ihre Rolle bei der Entwicklung des pathologischen Prozesses zu bestimmen, müssen Bakterien in Form homogener Populationen (Reinkulturen) vorhanden sein. Eine Reinkultur ist eine Ansammlung von bakteriellen Individuen derselben Art, die auf einem Nährmedium gezüchtet werden.

Methoden zur Isolierung von Reinkulturen aerober Bakterien

Pasteur-Methode Koch-Methode Biologisch Physikalisch

(hat historische (Plattenverdrahtung)

Bedeutung)

Chemische Methode

Schtschukewitsch

Modern

Aussaat mit Schlaufe Aussaat mit Spachtel

(Drigalski-Methode)

Methoden zur Isolierung von Reinkulturen:

1. Verfahren zur mechanischen Trennung basieren auf der Trennung von Mikroben durch sukzessives Reiben des Testmaterials über die Oberfläche des Agars.

a) Methode nach Pasteur - von historischer Bedeutung, sieht die sequentielle Verdünnung des Untersuchungsmaterials in einem flüssigen Nährmedium nach dem Rollverfahren vor

b) Die Koch-Methode – die Methode der Plattenlayouts – basiert auf der sequentiellen Verdünnung des Testmaterials mit Fleisch-Pepton-Agar, gefolgt vom Gießen von Reagenzgläsern mit verdünntem Material in Petrischalen.

c) Drygalski-Methode - Wenn Sie reichlich mit Mikroflora besätes Material säen, verwenden Sie 2-3 Tassen für die aufeinanderfolgende Aussaat mit einem Spatel.

d) Aussaat mit Schlaufe in parallelen Zügen.

2. Biologische Methoden basieren auf den biologischen Eigenschaften von Krankheitserregern.

a) Biologisch - Infektion hochempfindlicher Tiere, bei der sich Mikroben schnell vermehren und ansammeln. In einigen Fällen ist diese Methode die einzige, mit der Sie die Kultur des Erregers von einer kranken Person isolieren können (z. B. bei Tularämie), in anderen Fällen ist sie empfindlicher (z. B. die Isolierung von Pneumokokken bei weißen Mäusen). oder Erreger der Tuberkulose bei Meerschweinchen).

b) Chemisch – basierend auf der Säureresistenz von Mykobakterien. Um das Material von Begleitflora zu befreien, ist es
mit einer Säurelösung behandelt. Nur Tuberkelbazillen wachsen, da die säuretoleranten Mikroben durch die Säure abgetötet werden.

c) Die physikalische Methode basiert auf der Hitzeresistenz von Sporen. Kulturen von sporenbildenden Bakterien aus zu isolieren
Mischungen wird das Material auf 80°C erhitzt und auf ein Nährmedium geimpft. Nur Sporenbakterien werden wachsen, weil ihre Sporen am Leben blieben und Wachstum gaben.

d) Shukevich-Methode - basierend auf der hohen Mobilität des vulgären Proteus, der zu kriechendem Wachstum fähig ist.

Verfahren zur Herstellung von Agarplatten

MPA wird in einem Wasserbad geschmolzen und dann auf 50–55°C abgekühlt. Der Hals des Fläschchens wird in der Flamme einer Alkohollampe verbrannt, die Petrischalen werden geöffnet, so dass der Hals der Fläschchen eintritt, ohne die Ränder der Schale zu berühren, 10-15 ml MPA ausgießen, den Deckel schließen, Schütteln Sie die Schale, damit sich das Medium gleichmäßig verteilt, lassen Sie es auf einer horizontalen Fläche liegen, bis es fest geworden ist. Platten mit Plattenagar werden nach dem Trocknen in der Kälte gelagert.

Schleifensaat

Mit einer steril gekühlten Schlaufe wird ein Materialtropfen entnommen, ein Rand des Bechers mit der linken Hand leicht geöffnet, eine Schlaufe hineingesteckt und an einer Stelle am gegenüberliegenden Rand ein paar Striche gemacht, dann wird die Schlaufe abgerissen und das Material wird mit parallelen Hüben von einem Rand des Bechers zum anderen mit einem Intervall von 5–6 mm inokuliert. Zu Beginn der Aussaat, wenn sich viele Mikroben auf der Schleife befinden, werden sie ein zusammenfließendes Wachstum ergeben, aber mit jedem Schlag der Mikroben auf der Schleife werden es immer weniger und sie bleiben einzeln und geben isoliert Kolonien.

Aussaat nach der Drygalski-Methode

Diese Methode wird verwendet, wenn Material ausgesät wird, das reichlich mit Mikroflora (Eiter, Kot, Auswurf) besät ist. Zur Aussaat nach der Drygalsky-Methode werden ein Spatel und mehrere Tassen (3-4) genommen. Ein Spachtel ist ein Werkzeug aus Metalldraht oder Glaspfeil, das in Form eines Dreiecks oder L-förmig gebogen ist. Das Material wird mit einer Schlaufe oder Pipette in die erste Tasse eingebracht und mit einem Spatel gleichmäßig auf der Oberfläche des Mediums verteilt, mit demselben Spatel wird das Material ohne Verbrennung in das Nährmedium in der zweiten Tasse gerieben und dann in der dritten. Bei dieser Inokulation wird die erste Platte ein konfluentes Wachstum aufweisen und isolierte Kolonien werden in den nachfolgenden Platten wachsen.

Besteht aufgrund bestimmter Symptome an den Pflanzen und mikroskopischer Untersuchung der Verdacht, dass es sich bei dem Erreger der Krankheit um ein Bakterium handelt, sollte es im nächsten Schritt isoliert werden.

In diesem Fall wird angenommen, dass der Erreger mit assoziierten Organismen kontaminiert ist, also eine Mischpopulation vorliegt. Um den Erreger als separate wachsende Kolonie zu erhalten, sollte das Gewebemazerat auf das Medium ausgestrichen werden.

Schlagsaat. Eine kleine Menge bakterienhaltiges Pflanzengewebemazerat wird mit einer kalzinierten Impföse entnommen und unter leichten Bewegungen, ohne die Oberfläche des Agars zu beschädigen, mit 4-6 Hüben auf das vorbereitete Nährmedium aufgetragen. Nach dem erneuten Zünden der Schleife wird der Becher mit dem Medium um 90 ° nach rechts gedreht und dann werden ab dem zweiten Hub 4-6 weitere Hübe ausgeführt, die Nadel wird erneut gezündet und die dritte Impfung wird durchgeführt. Dadurch wird eine solche Verdünnung des Ausgangsmaterials erreicht, bei der die Bakterien nach einer Inkubation in einem Thermostat für 48-72 Stunden bei 28 ° C getrennte Kolonien verschiedener Formen und Farben bilden. Die Kolonien werden dann zur weiteren Untersuchung in Schrägagarröhrchen überführt. Eine Kolonie wird mit einer kalzinierten Schleife entnommen und mit einer vorsichtigen Bewegung in Form einer Schlange oder eines Zickzacks auf Nähragar aufgetragen.

Gießverfahren nach Koch. Das Koch-Gießverfahren stellt sicher, dass jede Kolonie aus einer einzigen Bakterienzelle gebildet wird. Am besten suspendiert man das Ausgangsmaterial in sterilem Wasser und wendet die Koch-Methode nur mit dieser Verdünnung an. Eine kleine Menge der Suspension wird in das erste Reagenzglas mit auf 60 °C gekühltem Nährmedium überführt. Dann wird der Inhalt des Röhrchens mit dem Inokulum vermischt, indem es zwischen den Handflächen gedreht wird. Nimm als nächstes das zweite Reagenzglas, öffne es vorsichtig über der Flamme des Brenners und gib drei Portionen des Substrats aus dem ersten Reagenzglas mit großen Schleifen hinein. Der Inhalt des Reagenzglases wird nach dem Brennen des Halses und des Stopfens in die erste Petrischale gegossen, wobei der Deckel des Bechers leicht geöffnet wird, gerade weit genug, um den Hals des Reagenzglases darunter einzusetzen. Unmittelbar nach dem Ausgießen wird der Becher verschlossen und das Nährmedium mit vorsichtigen Bewegungen gleichmäßig verteilt.

Nachdem Sie den Inhalt des zweiten Reagenzglases gründlich gemischt haben, nehmen Sie das dritte Reagenzglas und füllen Sie sechs Portionen des Substrats mit einer Schlaufe aus dem zweiten hinein. Der Inhalt des Reagenzglases wird in einen Becher gegossen, und der Inhalt des Reagenzglases wird nach dem Mischen in einen Becher gegossen. Becher mit dem Medium werden in einem Thermostaten bei 28°C inkubiert, nach einigen Tagen bilden die im Ausgangsmaterial enthaltenen Bakterien Kolonien.

Serielle Züchtung. Wenn es beispielsweise notwendig ist, Bakterien aus dem Boden zu isolieren, wird eine Reihenverdünnung verwendet. Steriles Nährmedium (15 ml pro Schale) wird in Schalen gegossen, 0,1 ml der letzten drei Verdünnungen der Suspension werden auf den gehärteten Agar gegeben und mit einem Glasspatel auf der Oberfläche verteilt.

Zur Isolierung von Bakterien werden 1 g Erde in 9 ml Wasser suspendiert, gut geschüttelt, einige Sekunden stehen gelassen und aus der Suspension Verdünnungsreihen hergestellt. Mit dieser Methode kann die Anzahl der Mikroorganismen in jeder Probe bestimmt werden.

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Pasteur-Methode Koch-Methode Biologisch Physikalisch

(hat historische (lamellar

Wert) Verkabelung) Shchukevich Chemical Method

Modern

Aussaat mit Schlaufe Aussaat mit Spachtel

(Drigalski-Methode)

Methoden zur Isolierung von Reinkulturen (Schema 11):

1. Mechanische Freigabeverfahren basierend auf der Trennung von Mikroben durch sukzessives Mahlen des Testmaterials über die Oberfläche des Agars.

a) Pasteur-Methode– ist von historischer Bedeutung, sieht die sequentielle Verdünnung des Untersuchungsmaterials in einem flüssigen Nährmedium nach dem Rollverfahren vor

b) Koch-Methode- Methode der Plattenlayouts - basierend auf der sequentiellen Verdünnung des Testmaterials mit Fleisch-Pepton-Agar, gefolgt vom Gießen von Reagenzgläsern mit verdünntem Material in Petrischalen

in) Drygalski-Methode- Bei der Aussaat von Material, das reichlich mit Mikroflora besät ist, verwenden Sie 2-3 Tassen für die aufeinanderfolgende Aussaat mit einem Spatel.

G) Schlaufensaat mit Parallelschlägen.

2. biologische Methoden basierend auf den biologischen Eigenschaften von Krankheitserregern.

a) Biologisch- Infektion hochempfindlicher Tiere, bei der sich Mikroben schnell vermehren und ansammeln. In einigen Fällen ist diese Methode die einzige, mit der Sie die Kultur des Erregers von einer kranken Person isolieren können (z. B. bei Tularämie), in anderen Fällen ist sie empfindlicher (z. B. die Isolierung von Pneumokokken bei weißen Mäusen). oder Erreger der Tuberkulose bei Meerschweinchen).

b) Chemisch– basierend auf der Säureresistenz von Mykobakterien. Um das Material von Begleitflora zu befreien, ist es
mit einer Säurelösung behandelt. Nur Tuberkelbazillen wachsen, da die säuretoleranten Mikroben durch die Säure abgetötet werden.

in) physikalische Methode basierend auf der Hitzebeständigkeit der Sporen. Kulturen von sporenbildenden Bakterien aus zu isolieren
Mischungen wird das Material auf 80°C erhitzt und auf ein Nährmedium geimpft. Nur Sporenbakterien werden wachsen, weil ihre Sporen am Leben blieben und Wachstum gaben.

G) Die Methode von Schtschukewitsch- basierend auf der hohen Beweglichkeit des vulgären Proteus, der zu kriechendem Wachstum fähig ist.

Das Verfahren zur Übertragung von Kolonien auf Schrägagar und BCH:

a) Übertragung von Kolonien auf Schrägagar

Der Deckel des Bechers wird leicht geöffnet, ein Teil einer einzelnen Kolonie wird mit einer kalzinierten gekühlten Schleife entfernt, ein Reagenzglas mit sterilem Schrägagar wird geöffnet und in der linken Hand schräg gehalten, so dass die Oberfläche der Medium zu beobachten. Die Schleife mit der Kultur wird in das Reagenzglas überführt, ohne die Wände zu berühren, über das Nährmedium gerieben, über die Oberfläche von einem Ende des Reagenzglases zum anderen gleiten lassen, die Striche an die Spitze des Mediums heben - Aussaat mit a Schlaganfall. Das Röhrchen wird verschlossen und, ohne loszulassen, der Name der ausgesäten Mikrobe und das Datum der Aussaat unterschrieben.

b) Übertragung von der Kolonie auf Fleisch-Pepton-Brühe

Die Technik der Nachsaat auf MPB ist im Grunde die gleiche wie bei der Aussaat auf einem dichten Medium. Beim Säen auf dem BCH wird die Schleife mit dem Material darauf in das Medium eingetaucht. Wenn das Material viskos ist und nicht aus der Schleife entfernt wird, wird es an der Gefäßwand gerieben und dann mit einem flüssigen Medium abgewaschen. Mit einem sterilen Pasteur oder einer Messpipette gesammeltes flüssiges Material wird in ein Nährmedium gegossen.

Als Ergebnis der selbstständigen Arbeit sollte der Student wissen:

1. Verfahren zur Isolierung einer Reinkultur von Mikroorganismen

2. Verfahren zur Kultivierung von Mikroorganismen

In der Lage sein:

1. Fähigkeiten zur Einhaltung der Regeln des Anti-Epidemie-Regimes und der Sicherheitsvorkehrungen

2. Material desinfizieren, Hände behandeln

3. Bereiten Sie Präparate aus Bakterienkolonien vor

4. Die Kolonien mikroskopieren

5. Gramfärbung von Mikroorganismen

AKTIVITÄT 8

GEGENSTAND. Methoden zur Isolierung von Reinkulturen (Fortsetzung). Enzymatische Aktivität von Bakterien und Methoden zu ihrer Untersuchung.

Es sind relativ wenige Methoden bekannt, Bakterien als Reinkulturen zu isolieren. Dies geschieht am häufigsten durch Isolieren einzelner Zellen auf festen Wachstumsmedien unter Verwendung der Ausstrich-Inokulationsmethode oder durch Gießen einer kleinen Menge flüssiger Kultur in Platten ( Verdünnungsmethode). Der Erhalt einer separaten Kolonie garantiert jedoch nicht immer die Reinheit der Kultur, da Kolonien nicht nur aus einzelnen Zellen, sondern auch aus ihren Clustern wachsen können. Wenn Mikroorganismen Schleim bilden, heften sich oft Fremdformen daran an. Zur Reinigung sollte vorzugsweise ein nicht-selektives Medium (MPA) verwendet werden, da Verunreinigungen darauf besser anwachsen und leichter zu erkennen sind.

Die Gewinnung isolierter Kolonien auf einem festen Nährmedium erfolgt entweder durch Sieben einer Suspension von Mikroorganismen mit einem Spatel ( Koch-Methode) oder mit Hilfe einer bakteriologischen Schleife ( Schlaganfall-Methode). Als Ergebnis der mechanischen Trennung von Mikroorganismenzellen kann jede von ihnen zu einer isolierten Kolonie einer Mikrobenart führen.

Sieben mit einem Spatel (Koch-Methode) in folgender Reihenfolge hergestellt:

1) ein Tropfen der Anreicherungskultur wird mit einer sterilen Pipette auf die Oberfläche des Nährmediums in Becher Nr. 1 aufgetragen und mit einem sterilen Spatel verteilt;

2) der Spatel wird herausgenommen, der Becher schnell geschlossen und der Spatel in den Becher Nr. 2 überführt, ohne ihn zu sterilisieren. Simulieren Sie die Verteilung der Kultur über die gesamte Oberfläche des Mediums, indem Sie seine Oberfläche mit der gleichen Seite des Spatels berühren, die zuvor zum Verteilen der Probe verwendet wurde;

3) genau die gleichen Aktionen werden in Tasse Nr. 3 durchgeführt, wonach der Spatel sterilisiert wird;

4) Beimpfte Becher werden in einen Thermostat gestellt und bei optimaler Temperatur inkubiert.

Nach einer gewissen Zeit werden die Tassen vom Thermostat entfernt und das Wachstum von Mikroorganismen untersucht. Normalerweise wird in Schale Nr. 1 ein kontinuierliches Bakterienwachstum beobachtet, Kolonien werden in nachfolgenden Schalen festgestellt.

Schlaufensiebung (Depleting-Stroke-Verfahren) beinhaltet das Beimpfen einer bakteriologischen Schleife aus einer Anreicherungskultur auf die Oberfläche eines Agarmediums in Petrischalen. In der ersten Stufe wird eine Schleife mit der Kultur mit einer Reihe paralleler Striche auf das Agarmedium aufgetragen (Abbildung 4.2, SONDERN). Die Schleife wird sterilisiert, auf dem nicht inokulierten Teil des Agarmediums gekühlt und eine Reihe von Strichen in die Richtung senkrecht zur ersten gezogen (Abbildung 4.2, B). Dann wird die Schlaufe wieder sterilisiert, gekühlt und es werden Striche in die Richtung gegeben BEIM(Abbildung 4.2) und nach der nächsten Sterilisation - in Richtung G(Abbildung 4.2). Die Tassen werden in einen Thermostat gestellt und nach einer bestimmten Zeit werden die Ergebnisse berücksichtigt. Normalerweise bei Schlaganfällen SONDERN und B eine große Anzahl von Kolonien wächst (manchmal kontinuierliches Wachstum), während auf den Schlägen BEIM und G Es bilden sich isolierte Kolonien.

Abbildung 4.2 – Schema des Siebens von Bakterien mit Strichen, um isolierte Kolonien zu erhalten

Reihenverdünnungen in festen Medien- die einfachste Methode der Plattenimpfung, die darin besteht, dass nach dem Beimpfen der Probe in ein Reagenzglas mit sterilem geschmolzenem und gekühltem Agar das Medium gemischt, in eine Petrischale gegossen und erstarren gelassen wird. Um gut isolierte Kolonien zu erhalten, wird eine Reihe aufeinanderfolgender zehnfacher Verdünnungen hergestellt und 1 ml Proben werden sofort in die Schale gegeben, 15–20 ml geschmolzenes Agarmedium werden hinzugefügt und durch Schütteln der Schale gemischt. Manchmal werden einzelne Kolonien in Agar eingetaucht und können nur mechanisch entfernt werden. Es ist auch schlecht, dass sich die Bakterien einige Zeit im Medium bei der Temperatur von geschmolzenem Agar befinden.

Eine Reinkultur ist eine Ansammlung von Mikroorganismen derselben Art. Die Beschaffung dieses Materials ist ein notwendiger Moment der Forschung bei der Implementierung von Labordiagnostiktechniken. Zur Isolierung von Reinkulturen von Bakterien werden Abstriche aus Blut, Sputum, Kot verwendet, eitriges sowie anderes biologisches Material wird untersucht. In natürlichen Bedingungen (in Luft, Wasser, Boden), Lebensmitteln, in Leichen (Mensch, Tier) sind Assoziationen verschiedener Arten von Mikroorganismen enthalten.

Die Trennung der Reinkultur ist wichtig für eine detaillierte Untersuchung der Eigenschaften von Mikroben: morphologisch, kulturell, biochemisch und auch antigen. Basierend auf den Ergebnissen dieser Forschungsmethoden ist es möglich, die Zugehörigkeit des Erregers zu einer bestimmten Art und Art festzustellen, mit anderen Worten, seine Identifizierung durchzuführen.

Die Prinzipien der biologischen Trennung von Bakterien implizieren die Berücksichtigung der Eigenschaften der lebenswichtigen Aktivität von Mikroben, um die optimalsten Forschungsmethoden auszuwählen. Die ausgewählten Methoden müssen in bestimmten Parametern zum Erreger passen.

1. Atemtyp. Unter Bakterien werden Gruppen von aeroben und anaeroben Vertretern unterschieden. Um anaerobe Mikroben zu erhalten, wird das Forschungsmaterial erhitzt. Die nächste Stufe ist die Kultivierung der Mikrobe unter anaeroben Bedingungen. Methoden zur Gewinnung von aeroben und anaeroben Bakterien sind unterschiedlich.
2. Sporulation. Die Sporulationsfähigkeit einiger Bakterien gewährleistet den Schutz und die Sicherheit von Mikroorganismen.
3. Die Resistenz von Bakterien gegen die aggressive Wirkung von Laugen und Säuren. Die Resistenz einiger Bakterienarten gegen diese Substanzen gewährleistet eine maximale Reinigung des Untersuchungsmaterials von der Beimischung anderer Bakterien durch alkalische oder saure Lösungen.
4. Mobilität bakterieller Organismen. Um eine Reinkultur beweglicher Mikroorganismen zu trennen, werden die Methoden zum Trennen von Mikrobenkulturen in einem Kondensattropfen verwendet.
5. Empfindlichkeit von Mikroorganismen gegenüber Antibiotika, bestimmten Chemikalien und anderen antimikrobiellen Mitteln. Bei einigen Pathogenen werden Kulturisolationsmethoden unter Verwendung selektiver (spezifischer) Nährmedien am meisten bevorzugt.
6. Antibiotika. Reinigen Sie das Material von zusätzlichen Mikroorganismen.
7. Die Fähigkeit von Bakterien, intakte Haut zu durchdringen. Diese Eigenschaft ist einigen Sorten mit Aggressionsfaktoren eigen.
8. Anfälligkeit von Tieren für bestimmte Krankheiten infektiösen Ursprungs.

Pathogenbewertungsmethoden

Eine Reihe von Verfahren werden verwendet, um Reinkulturen von Bakterienzellen zu erhalten. Jeder von ihnen wird in einer bestimmten Situation verwendet und hat aufeinanderfolgende klare Schritte, um Kolonien des Pathogens zu erhalten. Betrachten Sie die beliebtesten.

Pasteur-Technik

Dies ist die Verdünnung von Reinkulturen in Bakterienwachstumsmedium (flüssige Konsistenz) auf eine Konzentration von 1 Zelle pro Flüssigkeitsvolumen. Diese Selektionsmethode ist von großer historischer Bedeutung.

Kochs Technik

Auch als „Plate-Spread“-Technik bekannt. Es ist eine Verdünnung des Forschungsmaterials in Agar (in geschmolzenem Zustand mit einer Temperatur von 48-50 ° C). Als nächstes wird die resultierende Zusammensetzung in Petrischalen gegossen, wo sie sich verfestigen sollte.

Ernten werden in der Regel aus den letzten 3-4 Verdünnungen durchgeführt, da dort bereits wenig Bakterien vorhanden sind. So entstehen während des Wachstums von Mikroben auf einem Nährmedium isolierte Kolonien von Mikroorganismen, die aus einer einzigen Mutterzelle geboren werden. Dann kann eine isolierte Kolonie aus der Tiefe des Agars ausgewählt und auf ein frisches Nährmedium übertragen werden. Der nächste Schritt ist die Identifizierung und Isolierung des Erregers.

Shukevichs Technik

Es wird verwendet, wenn es notwendig ist, eine Reinkultur von Proteus aerobes oder anderen Mikroben zu isolieren, die durch "kriechendes" Wachstum gekennzeichnet sind. Pflanzen Sie die Kulturen in Wasser, das an der Basis des Schrägagars kondensiert ist.

Bei dieser Methode zur Trennung einer Reinkultur steigen bewegliche zelluläre Organismen (Proteus) an die Spitze der Agarschräge, und unbewegliche Formen ändern ihre Position auf dem Impfmedium nicht. Durch Subkultivieren der oberen Ränder der gekeimten Kultur kann eine reine Bakterienkultur erhalten werden.

Drygalskys Technik

Die Drygalsky-Methode wird bei der Untersuchung von biologischem Material ziemlich häufig verwendet, indem Kulturen in einem Reagenzglas mit Brühe oder Kochsalzlösung verdünnt werden.

Der nächste Schritt: Mit einem sterilen Glasspatel wird ein Tropfen der entstandenen Lösung gleichmäßig auf der Oberfläche des Nährmediums im 1. Becher verteilt. Dann, ohne den Pfannenwender auf dem Feuer zu verbrennen, machen sie die gleiche Aussaat auf der 2. und 3. Schale. Die Essenz der Drygalsky-Methode besteht darin, dass mit jeder weiteren Aussaat von Kulturen die Bakterienkonzentration (Aerobier) immer geringer wird. Auf der 3. Platte sind sie weit auseinander verteilt, aus jeder Bakterienzelle entstehen klonale Zellen (in Form einer isolierten Kolonie). Sie werden zur Anreicherung von Pathogenen auf Schrägagar subkultiviert.

Weinberg-Technik

Gewisse Schwierigkeiten bereitet die Isolierung von Reinkulturen anaerober Krankheitserreger, wenn die Mikroorganismen beim Kontakt mit Sauerstoffmolekülen nicht absterben. Die Essenz der Technik besteht darin, anaerobe Mikroben (in der Zusammensetzung des Materials) in einem leicht gekühlten (45-50 ° C) geschmolzenen Nährmedium (Agarose) zu entfernen. Verbringen Sie 6-10 Verdünnungen. Dann kommt die nächste Stufe: Es ist notwendig, die Zusammensetzung im Reagenzglas schnell abzukühlen und ihre Oberfläche mit einer Mischung aus Vaseline und Paraffinöl zu füllen, die das Eindringen von Luft verhindert und die Entwicklung anaerober Bedingungen fördert.

Bei günstiger Aussaat keimen am zweiten Tag vereinzelte Kolonien, die durch Erhitzen mit einem Brenner aus der Röhre entfernt werden können. Kulturen werden zur weiteren Untersuchung von der geschnittenen Agarsäule geloopt. Die resultierenden Kolonien werden in ein flüssiges Nährmedium gegeben, an dem die Schritte zur Isolierung der Kolonie von anaeroben Krankheitserregern abgeschlossen werden können.

Hungate-Technik

Es wird häufig verwendet, um aerobe Mikroben mit hoher Sauerstoffempfindlichkeit zu isolieren. Bei der Durchführung einer solchen Isolierung der Kultur von Aeroben wird die Technik des Rotierens von Reagenzgläsern verwendet.

Verfahren zur Inokulation aerober Bakterien umfassen deren Züchtung auf einem geschmolzenen Agarmedium. Das Vorhandensein eines Inertgases in einem Reagenzglas ermöglicht es, isolierte Säulen von aeroben Bakterien so zu züchten, dass die isolierten Kulturen von Aerobiern sogar mit bloßem Auge für 2-3 Tage deutlich zu sehen sind.

Mikromanipulator

Dies ist eine Technik zur Isolierung einzelner Bakterienzellen mit einem Mikromanipulator. Der Mikromanipulator ist ein spezielles Gerät, das eine Zelle aus einer Suspension fangen kann, sowie die Möglichkeit bietet, eine Kultur in einem Reagenzglas zu impfen.

Die weitere Identifizierung des Erregers erfolgt unter Berücksichtigung aller aufgeführten Eigenschaften des Erregers (Aerobier und Anaerobier) sowie der Merkmale ihrer Wechselwirkung mit verschiedenen Substanzen.