ბაქტერიოლოგიური კვლევა არის კვლევა, რომელიც შექმნილია მათი თვისებების გამოყოფისა და შესწავლის მიზნით მიკრობიოლოგიური დიაგნოზის დასადგენად.

საცდელი მასალა უნდა იქნას აღებული ასეპტიკურ პირობებში სტერილურ ჭურჭელში და მიწოდებული იქნას ლაბორატორიაში რაც შეიძლება მალე. საჭიროების შემთხვევაში, ნიმუშები უნდა ინახებოდეს მაცივარში. სინჯის აღების ტექნიკა დამოკიდებულია ობიექტზე, დაავადების ბუნებაზე და მიკროორგანიზმის თვისებებზე. ბაქტერიოლოგიური კვლევის ერთ-ერთი ყველაზე გავრცელებული მეთოდია ბაქტერიოსკოპია.

არაფიქსირებული ბაქტერიების შესასწავლად გამოიყენება ორი მეთოდი: დამსხვრეული (სლაიდსა და საფარს შორის) წვეთი და. უნდა გვახსოვდეს, რომ არაფიქსირებული ბაქტერიების პრეპარატები გადამდებია.

ნაცხი გამოიყენება ფიქსირებული პრეპარატების ბაქტერიოსკოპიისთვის. მათ მოსამზადებლად სატესტო სითხის წვეთს აფენენ შუშის სლაიდის ზედაპირზე და შემდეგ აშრობენ. პრეპარატის დამაგრების ყველაზე გავრცელებული მეთოდია მისი გატარება გაზის სანთურის ალი. ზოგიერთ შემთხვევაში გამოიყენება ფიქსაციის ნაერთები. ფიქსირებული პრეპარატები ჩვეულებრივ შეღებილია (იხ. მიკროორგანიზმების შეღებვა). ბაქტერიოლოგიური კვლევის ყველაზე მნიშვნელოვან ელემენტებს შორის არის კულტურები და სუბკულტურები, რომლებიც წარმოიქმნება ბაქტერიული მარყუჟით ან პასტერის პიპეტით. მარყუჟი სტერილიზდება ცეცხლზე გამოწვით, შემდეგ გაცივდება დაუმუშავებელი აგარის უბანს შეხებით ან სტერილურ სითხეში ჩამორეცხვით. პასტერის პიპეტის გამოყენებისას მის წვერს წყვეტენ პინცეტით, პიპეტს რამდენჯერმე ატარებენ საწვავის ალიდან და აძლევენ გაციებას. თესვისას გამოიყენება თხევადი და მყარი საკვები ნივთიერებები. დახრილ აგარზე თესვისას ბაქტერიების კულტურას მარყუჟით ასხამენ აგარის ზედაპირზე. აგარის ან ჟელატინის სვეტის სისქეში დათესვისას მკვებავი გარემო იჭრება საცდელი მილის ძირამდე მარყუჟით ან სპეციალური ნემსით. თხევად გარემოში თესვისას აუცილებელია სითხის დაღვრა და საცდელი მილების და საცობების კიდეები არ დასველდეს. ინოკულაციები და სუბკულტურები უნდა ჩატარდეს გაზის სანთურის ალისთან ახლოს, საცდელი მილები არ უნდა დარჩეს დიდი ხნის განმავლობაში ღია, მარყუჟი ან პასტერის პიპეტა კულტურასთან არ უნდა ეხებოდეს არაფერს; მილის დახურვამდე მისი კიდეები უნდა დაიწვას. ინოკულირებული მილები დაუყოვნებლივ უნდა იყოს მარკირებული.

ბაქტერიოლოგიური კვლევის ყველაზე მნიშვნელოვანი ნაბიჯი არის იდენტიფიკაცია - სუფთა კულტურის სახით მიღებული ბაქტერიების სახეობის ან ტიპის განსაზღვრა. ბაქტერიების იდენტიფიცირებისას შესწავლილია მათი ფიზიოლოგიური და ბიოქიმიური თვისებები, ტოქსინების წარმოქმნა. ფართოდ გამოიყენება ბაქტერიების იდენტიფიცირების სეროლოგიური მეთოდები (რეაქცია და). ხშირ შემთხვევაში, მიკროორგანიზმების იდენტიფიკაციის ბიოლოგიური მეთოდი ეფექტურია, რომელიც ეფუძნება ლაბორატორიული ცხოველების ინფექციას ტესტის მასალით ან ბაქტერიების შედეგად მიღებული კულტურით და ცხოველებში დამახასიათებელი პათოლოგიური ცვლილებების იდენტიფიცირებაზე.

სუფთა კულტურების იზოლირებისთვის გამოიყენება მექანიკური და ბიოლოგიური მეთოდები. მექანიკური მეთოდის მაგალითი: საცდელი მასალის წვეთი შეიზილება იგივე სტერილური სპატულით ან ბაქტერიული მარყუჟით მკვრივი მკვებავი გარემოს ზედაპირზე, თანმიმდევრულად პირველ, მეორე და მესამეში. სუფთა კულტურის გამოყოფა ხდება მოზრდილი ცალკეული კოლონიებისგან და მოიცავს მათ შესწავლას და სკრინინგს ახალ საკვებ გარემოზე. სუფთა კულტურების იზოლირების ბიოლოგიური მეთოდები ეფუძნება იზოლირებული მიკრობის ამა თუ იმ თვისების გათვალისწინებას, რაც განასხვავებს მას შესასწავლ მასალაში არსებული სხვა მიკრობებისგან.

ბიოლოგიურ მეთოდში გამოიყენება ამ სახის მკვებავი საშუალებები, რომლებშიც იქმნება პირობები, რომლებიც ხელსაყრელია გარკვეული ტიპის მიკრობების განვითარებისთვის. ბიოლოგიური მეთოდები ასევე მოიცავს ლაბორატორიული ცხოველების ინფექციას, რომლებიც მგრძნობიარეა იზოლირებული ტიპის ბაქტერიების მიმართ.

ბაქტერიოლოგიური კვლევა არის პათოგენური მიკროორგანიზმების გამოვლენის მეთოდების ერთობლიობა პაციენტში, გადამზიდავში ან გარემო ობიექტებზე. ბაქტერიოლოგიური კვლევები ასევე გამოიყენება პირობითად პათოგენური და სანიტარულ-საჩვენებელი მიკრობების გამოსავლენად, რომლებიც ახასიათებენ გარე გარემოს დაბინძურების ხარისხს, გარკვეული გარემოს (ობიექტის) მიკრობული ლანდშაფტის შესასწავლად. ბაქტერიოლოგიური კვლევა შეიძლება გამოყენებულ იქნას დიაგნოსტიკისთვის, ინფექციური დაავადებების პროფილაქტიკისთვის, პიროვნების მიმდებარე გარემოს სანიტარული და ჰიგიენური მახასიათებლებისთვის, სამეცნიერო კვლევისთვის.

ბაქტერიოლოგიური კვლევის მასალა და მეთოდი დამოკიდებულია ანალიზის მიზანზე, გარემო პირობებზე, პათოგენეზსა და დაავადების მიმდინარეობაზე. ბაქტერიემიის არსებობისას მიკრობი ვლინდება სისხლის კულტურით. მძიმე ლოკალური დაზიანებების შემთხვევაში გამომწვევი უნდა ვეძებოთ დაზიანებული ორგანოს გამონადენში ან სეკრეციაში (დიფტერია, დიზენტერია, გონორეა და ა.შ.). დაბოლოს, რთული კურსის მქონე დაავადებებში, როდესაც (მაგალითად, ტიფური ცხელების დროს) ბაქტერიემია იცვლება წვრილი ნაწლავის დაზიანებით, ყოველ ეტაპზე გამოიყენება კვლევის შესაბამისი მეთოდი: სისხლის კულტურები ტარდება ჩვილობის პირველ კვირას. დაავადება, ხოლო სეროლოგიური ტესტირება ყველაზე საიმედოა მეორეში, მესამე კვირიდან დაწყებული დადებითი შედეგი მიიღება განავლის თესვისას; ეს უკანასკნელი მეთოდი ასევე გამოიყენება როგორც საკონტროლო კვლევა გამოჯანმრთელების პერიოდში ბაქტერიების მატარებლების გამოსავლენად და მათი მონიტორინგისთვის.

რომელიმე ამ ამოცანის შესრულება ხორციელდება მიკროორგანიზმების იზოლირებისა და იდენტიფიკაციისთვის შექმნილი მეთოდების გამოყენებით. მიკრობის მახასიათებლებიდან გამომდინარე, გამოიყენება მეთოდების მთელი კომპლექსი ან მისი ნაწილები.

ბაქტერიოსკოპია არის ყველაზე ხელმისაწვდომი ტექნიკა, რომელიც ეფუძნება მასალის მიკროსკოპულ გამოკვლევას. ახალი პრეპარატების მიკროსკოპიის დროს შეიძლება გამოყენებულ იქნას ზოგიერთი მიკროქიმიური რეაქცია (მაგალითად, იოდოფილური ბაქტერიების შეღებვა ლუგოლის ხსნარით) ან ბაქტერიების სხვადასხვა სტრუქტურული ნაწილების შერჩევითი შეღებვა.

ბაქტერიების უფრო მკაფიოდ იდენტიფიცირება შესაძლებელია შეღებილ პრეპარატში. ტესტის მასალა გამოიყენება მინის სლაიდზე თხელ და რაც შეიძლება თანაბარ ფენად. მიეცით საშუალება გაშრეს ჰაერში და გაასწორეთ იგი ერთ-ერთი საყოველთაოდ მიღებული მეთოდით, მაგრამ ყველაზე ხშირად აალებით, ანუ ორჯერ ან სამჯერ სწრაფად დაჭერით საწვავის ცეცხლზე ისე, რომ ჭიქა იყოს თბილი, მაგრამ არა ცხელი. ფიქსაციის შემდეგ გაციებული პრეპარატი იღებება მარტივი ან დიფერენციალური ლაქით (იხ. მიკროორგანიზმების შეღებვა). ფლუორესცენტური მიკროსკოპის დროს გამოიყენება როგორც ბუნებრივი, ასევე მშრალი პრეპარატები. ამ შემთხვევაში, გარკვეული საღებავებით დამუშავება იწვევს მიკრობული სხეულის სტრუქტურების ან მთელი მიკრობის ნათებას ულტრაიისფერი ან მოკლე ლურჯი სხივებით. სხვა მოდიფიკაციაში მიკრობებს მკურნალობენ ფლუორესცენტებით (საღებავებით) ეტიკეტირებული სპეციფიკური შრატებით. შრატის შესაბამისი ბაქტერიები ანათებენ, როდესაც მათზე ეტიკეტირებული შრატი დეპონირდება. ჰეტეროლოგიური ბაქტერიები არ ანათებენ.

ბაქტერიოსკოპიის მეთოდი ფართოდ გამოიყენება გარკვეული ინფექციური დაავადებების ბაქტერიოლოგიური დიაგნოსტიკისთვის (გონორეა, ტუბერკულოზი, მორეციდივე ცხელება), ასევე ორგანოს (ტონზილები, საშოს), პროდუქტის ან სხვა საგნის მიკროფლორის მთელი კომპლექსის შესასწავლად.

დათესვის მეთოდი, ანუ სასურველი მიკროორგანიზმის სუფთა კულტურის გამოყოფა, ბაქტერიოლოგიური დიაგნოსტიკის უფრო ზუსტი და საიმედო მეთოდია, ვიდრე ბაქტერიოსკოპია. პეტრის ჭურჭელში ჩასხმული მკვრივი მკვებავი გარემოს ზედაპირზე იყრება ახალი მასალა. პირველადი ინოკულაცია ტარდება მოცემული მიკრობისთვის ხელსაყრელ ჩვეულებრივ გარემოზე, დიფერენციალურ ან შერჩევით მედიაზე. მკვებავი გარემოს არჩევანი (იხ.), ისევე როგორც თესვისთვის ახალი მასალის წინასწარი დამუშავების მეთოდი, დამოკიდებულია მისი დაბინძურების ხარისხზე თანმხლები გარე მიკროფლორით. 24-48 საათის შემდეგ. შიგთავსი თერმოსტატში მოცემული მიკრობისთვის ოპტიმალურ ტემპერატურაზე, კერძების გამოკვლევა და საეჭვო კოლონიების სუბკულტურა ხდება მედიაზე, რომელიც ხელს უწყობს ამ პათოგენის რეპროდუქციას. ამრიგად, მიიღება ერთგვაროვანი ბაქტერიების კულტურა, რომელიც უნდა იყოს იდენტიფიცირებული.

მიკრობის იდენტიფიკაცია იწყება მისი მორფოლოგიის შესწავლით შეღებილ პრეპარატში და დაქუცმაცებულ წვეთში (იხ.) მიკრობების ფორმისა და მათი მობილობის განსაზღვრისთვის. შემდეგი ნაბიჯი არის ბაქტერიების ფერმენტული უნარის შესწავლა ნახშირწყლების, ამინომჟავების და შარდოვანას დაშლისას თითოეული სახეობისთვის სპეციფიკურ კომბინაციებში. ბაქტერიებს აქვთ ყველაზე შესწავლილი შაქარი და პროტეოლიზური ფერმენტები.

მიკრობის იდენტიფიკაციას უნდა დაემატოს მიკროორგანიზმების თითოეული გვარისა და სახეობისთვის დამახასიათებელი სხვა თვისებების შესწავლა. ეს თვისებები მოიცავს სხვადასხვა ცხოველის ერითროციტების შერჩევით დაშლის უნარს (ჰემოლიზი), სისხლის პლაზმის კოაგულაციას (პლაზმის კოაგულაცია), ფიბრინის შედედების დაშლას (ფიბრინოლიზი) და ა.შ. ბაქტერიების ყველა ეს თვისება შეიძლება გამოყენებულ იქნას მათ იდენტიფიკაციაში, როგორც დიფერენციალური ნიშნები.

ზოგიერთი სახეობის მიკრობების, ძირითადად ნაწლავის ოჯახის პათოგენური ბაქტერიების საბოლოო იდენტიფიკაცია მოიცავს სეროლოგიურ იდენტიფიკაციას (იხ. მიკრობული იდენტიფიკაცია). ჩვეულებრივ, ამისათვის გამოიყენება აგლუტინაციის რეაქცია, ანუ ბაქტერიების დაგროვება გამოვლენილია ამავე სახელწოდების იმუნური შრატის გავლენის ქვეშ. შრატში მიკრობების აგლუტინაცია კონკრეტული სახეობის მიმართ მიუთითებს ამ სახეობის კუთვნილებაზე. ჩვეულებრივ, აგლუტინაციის რეაქცია მოთავსებულია დაახლოებით მინაზე და საბოლოო დასადგენად საცდელ მილებში შრატის განზავებით.

მიკრობების რაოდენობა სრულად არ შეიძლება განისაზღვროს აღწერილი გზით. შემდეგ იდენტიფიკაციას უნდა დაემატოს ლაბორატორიული ცხოველების ინფექცია, ვინაიდან ზოგიერთ ბაქტერიას ახასიათებს პათოგენურობა ან ტოქსიკურობა, რაც ვლინდება ცხოველების ინფიცირებისას. ზოგიერთ შემთხვევაში, ცხოველების ინფექცია ასევე ემსახურება პათოგენური მიკრობების დაგროვების მეთოდს.

იდენტიფიკაციის საფუძველს მხოლოდ კულტურის ყველა მახასიათებლის შედარება, რომელიც შეგროვებულია მორფოლოგიის, ბიოქიმიური, სეროლოგიური და, საჭიროების შემთხვევაში, მისი ბიოლოგიური თვისებების შესწავლისას. კვლევის დადებითი შედეგით პასუხი არ არის რთული, თუ იზოლირებული მიკრობი ტიპიურია. ამ შემთხვევაში მითითებულია ბაქტერიის გვარი, სახეობა და, თუ დადგინდა, ტიპი. მიკრობის იზოლირებისას, რომელიც ზოგიერთ თვისებაში გადახრილია ტიპიური მახასიათებლიდან, მოცემულია პასუხი გადახრის მახასიათებლის მითითებით. ამ შემთხვევაში სასარგებლოა კვლევის განმეორება, თუ დაავადების მიმდინარეობა ან მასალის შეგროვების პირობები იძლევა საშუალებას. ასევე სასარგებლოა ატიპიური მიკრობების კულტურის დამატებითი შესწავლა სხვა, უფრო რთული მეთოდებით.

ბაქტერიოლოგიური კვლევის ნეგატიურ შედეგებს შედარებითი მნიშვნელობა აქვს და მხოლოდ აჩვენებს, რომ მასალის შესწავლილი ნაწილი არ შეიცავდა სასურველ მიკრობებს ან არ იყო სიცოცხლისუნარიანი. თუმცა, ისინი შეიძლება იყოს სხვადასხვა ნაწილში. ამიტომ, მაგალითად, ბაცილის მატარებლების (ტიფოიდური ცხელება, დიზენტერია, დიფტერია) გამოკვლევისას საჭიროა განმეორებითი კვლევები.

ეს არის ინფექციური დაავადებების ლაბორატორიული დიაგნოსტიკის ძირითადი მეთოდი. ბაქტერიოლოგიური კვლევის მეთოდის არსი არის პაციენტებისგან პათოლოგიური მასალის დათესვა და პათოგენის სუფთა კულტურის გამოყოფა, რასაც მოჰყვება მისი იდენტიფიკაცია მორფოლოგიური, კულტურული, ტინქტური, ბიოქიმიური და ანტიგენური მახასიათებლებით.

სუფთა კულტურების იზოლირების მეთოდი, რომელიც შესაძლებელს ხდის გარკვეული ტიპის მიკრობების იზოლირებას ამა თუ იმ ბუნებრივი ჰაბიტატიდან, არის მიკრობიოლოგიური კვლევის ყველაზე მნიშვნელოვანი მეთოდი. პირველი, ვინც შემოგვთავაზა სუფთა კულტურის გამოყოფის მეთოდი იყო ლ. პასტერი.

პასტერის მეთოდი, რომელიც დაფუძნებულია თხევადი საკვები ნივთიერებების გამოყენებაზე, უზრუნველყოფდა სუფთა კულტურის იზოლირებას ძირითადად ერთი ტიპის მიკრობის შემცველი მასალისგან (მაგალითად, სეპტიცემიის სისხლიდან და ა.შ.). ნაკლებად ეფექტური იყო იმ შემთხვევებში, როდესაც საჭირო იყო გარკვეული ტიპის მიკროორგანიზმების გამოყოფა მათი ნარევიდან. იმავდროულად, ბუნებრივ პირობებში ბაქტერიოლოგიური გამოკვლევის მასალა (ნახველი, ჩირქი, ნიადაგი, წყალი და ა.შ.) ყველაზე ხშირად შეიცავს სხვადასხვა მიკროორგანიზმების ნარევს.

ბაქტერიული ნარევების წარმატებული იზოლაცია და ცალკეული სახეობების იზოლირებული შესწავლა შესაძლებელი გახდა რობერტ კოხის (R. Koch) მიერ სუფთა კულტურების იზოლირების მეთოდის გაუმჯობესების შედეგად, რომელმაც ამ მიზნით გამოიყენა 1881 წ. მყარი მკვებავი მედიარომელზედაც თესვის დროს შესაძლებელია მასალის ისე განაწილება, რომ ცალკეული მიკრობული უჯრედები ერთმანეთისგან იზოლირებული იყოს. შესაბამის პირობებში (კვებითი გარემო, ოპტიმალური ტემპერატურა) იზოლირებული უჯრედების გამრავლება იძლევა ერთიდაიგივე სახეობის შთამომავლობას, ე.ი. მოცემული მიკრობული სახეობის სუფთა კულტურა.

გარკვეული პერიოდის შემდეგ (ყველაზე ხშირად დღეში), მკვრივი საკვები გარემოს იმ ადგილებში, რომელზედაც განლაგებულია იზოლირებული უჯრედები, წარმოიქმნება გამრავლებული მიკრობების პოპულაციები - ე.წ. კოლონია,ხილული შეუიარაღებელი თვალით. ისინი არ წარმოადგენენ მიკრობების ქაოტურ დაგროვებას, რაც უკვე შეიძლება იმით ვიმსჯელოთ, რომ მრავალი ტიპის მიკრობისთვის კოლონიებს აქვთ დამახასიათებელი სტრუქტურა, რის გამოც შესაძლებელია შესწავლილი მასალის ფლორის უხეშად დადგენა და მათი შერჩევა. კოლონიები, რომლებიც ექვემდებარება შემდგომ შესწავლას. ასეთი კოლონიების ხელახალი დათესვა შესაბამის საკვებ გარემოზე არის სუფთა კულტურის იზოლაცია.

სუფთა კულტურების იზოლაციას მათი შემდგომი იდენტიფიკაცია უაღრესად მნიშვნელოვანია ინფექციური დაავადებების დიაგნოსტიკაში, რაც უზრუნველყოფს მათ სწრაფ აღიარებას, დროულ მკურნალობას და პრევენციას. არანაკლებ მნიშვნელოვანია მიკროფლორის განსაზღვრისას გარემოს ობიექტების (ჰაერი, წყალი, ნიადაგი და სხვ.) სანიტარიული და ჰიგიენური მდგომარეობის შესწავლისას, აგრეთვე სამეცნიერო კვლევებში.

სუფთა კულტურების იზოლირების მრავალი მეთოდი ახლა ხელმისაწვდომია. ზოგიერთი მათგანი გამოიყენება შეზღუდული რაოდენობით, ზოგი კი ფართოდ გამოიყენება. ყველაზე უნივერსალურია ქვემოთ აღწერილი მეთოდები სუფთა ბაქტერიული კულტურების იზოლირებისთვის (დრიგალსკის მეთოდი). მაშინ როცა სხვა მიკროორგანიზმები - სპიროქეტები, პროტოზოები - საჭიროებენ იზოლაციის სპეციალური მეთოდების გამოყენებას ან საერთოდ ვერ იზოლირდებიან ხელოვნურ საკვებ გარემოზე (ზოგიერთი პროტოზოა, რიკეტზია, ვირუსები).

მიკრობული ნარევებისგან სუფთა კულტურების გამოყოფის მეთოდები ჩვეულებრივ იყოფა ორ ძირითად ჯგუფად: მეთოდები, რომლებიც დაფუძნებულია მკვებავ გარემოში მიკრობების მექანიკური გამოყოფის პრინციპზე და მიკრობების ბიოლოგიური თვისებების გამოყენებაზე დაფუძნებული მეთოდები. პირველ ჯგუფში შედის ცალკეული უჯრედების გამოყოფის მეთოდები: 1) მკვებავი გარემოს სიღრმეში; 2) საშუალების ზედაპირზე და 3) თვალის კონტროლის ქვეშ. მეორე ჯგუფი იყენებს მიკრობების ისეთ თვისებებს, როგორიცაა მათი მობილურობა, ტემპერატურაზე დამოკიდებულება, ჟანგბადი და მათი პათოგენური თვისებები.

დათესვისა და ხელახალი დათესვის ტექნიკა

თესვითმიკრობიოლოგიურ პრაქტიკაში მას უწოდებენ ზოგიერთი ტესტის მასალის შეყვანას სტერილურ საკვებ გარემოში მიკროორგანიზმების გამოსავლენად.

ხელახალი დათესვაარის კულტივირებული მიკროორგანიზმების გადატანა სტერილურ გარემოში. მიკრობების კულტურები და სუბკულტურები მიკრობიოლოგიურ პრაქტიკაში ერთ-ერთი ყველაზე გავრცელებული მეთოდია.

ხელახალი დათესვა ხორციელდება ისე, რომ უცხო მიკროორგანიზმები არ მოხვდნენ საკვებ გარემოში ჰაერიდან ან მიმდებარე ობიექტების ზედაპირიდან. ამისათვის მკაცრად უნდა დაიცვან შემდეგი ნაბიჯები:

1) ნათესები მზადდება უშუალოდ ანთებულ სანთურთან, რომლის ცეცხლში სტერილიზდება მარყუჟები, პინცეტები, ბამბის საცობები, საცდელი მილების კიდეები;

2) ერთი სინჯარა გადაკვეთილი კულტურით აღებულია მარცხენა ხელში, მეორე (სტერილური მკვებავი გარემოთი) დახრილ მდგომარეობაშია ცერსა და საჩვენებელ თითს შორის;

3) მარყუჟი იმართება ვერტიკალურ მდგომარეობაში სანთურის ცეცხლზე და მისი ლითონის ნაწილი წითლად კალცინდება, შემდეგ იხრება ჰორიზონტალურად და მარყუჟის დამჭერი სტერილიზდება;

4) ამოიღეთ ბამბის საცობები და დაიჭირეთ მარჯვენა ხელის ბეჭედი და პატარა თითი; არ არის რეკომენდებული საცობების დადება მაგიდაზე ან ნებისმიერ საგანზე;

5) დაწვა ორივე მილის კიდეები;

6) საცდელ მილში შეიტანეთ მარყუჟი დასამუშავებელი კულტურით ფრთხილად, კედლებთან შეხების გარეშე, დაიჭირეთ სითხის წვეთი ან მცირე რაოდენობით დაფა მყარ გარემოზე და გადაიტანეთ, ცდილობთ არ შეეხოთ კედლებს, მეორეში. საცდელი მილი დაცლილი საკვები გარემოთი;

7) მარყუჟი ამოღებულია, საცდელი მილების კიდეები და საცობების შიდა ბოლოები იწვება. თუ ბამბის საცობი ცეცხლი წაუკიდა, მაშინ დახურეთ სინჯარა, ხოლო გარე ბოლო ჩააქრეთ ხელით ან პინცეტით;

8) მარყუჟი ისევ იწვება ცეცხლში, სინჯარაზე კეთდება შესაბამისი წარწერა: კულტურის დასახელება და დათესვის თარიღი.

თესვა თხევად გარემოშიშეიძლება დამზადდეს პასტერის ან გრადუირებული პიპეტით. პასტერის პიპეტის გამოყენებისას გამოიყენეთ დამწვარი პინცეტი, რათა გატეხოთ დალუქული ბოლო და მსუბუქად დაწვათ მთელი პიპეტი. შესასწავლი კულტურის მქონე სინჯარა მოთავსებულია მარცხენა ხელში, ხოლო პიპეტა მოთავსებულია მარჯვენა ხელში ცერსა და შუა თითებს შორის, საჩვენებელი თითით უჭირავს მის ზედა ხვრელს.

საცდელი მილიდან ბამბის საცობის ამოღების შემდეგ დაწვით ამ უკანასკნელის კიდეები. ფრთხილად ჩაუშვით პიპეტი სინჯარაში და ამოიღეთ საჩვენებელი თითი. შემდეგ საჩვენებელი თითით დახურეთ პიპეტის ზედა ხვრელი, ამოიღეთ სინჯარიდან. ბამბის შტეფსელი და საცდელი მილის კიდეები დახურვამდე იწვება. ტესტის მასალა გადადის თხევად გარემოში. ინოკულაციის შემდეგ პიპეტები მოთავსებულია სადეზინფექციო ხსნარში.

დათესვა მყარ მედიაზე.ირიბ აგარზე თესვისას აწებებენ სწორ ან ზიგზაგის შტრიხს. ამისთვის ჩანერგილი მასალით მარყუჟი შეჰყავთ საცდელ მილში, სანამ ძირში არ დაგროვდება კონდენსაციის წყალი და ფრთხილად, აგარის გაფხვიერების გარეშე, ხდება ინსულტი. მყარი ინოკულაცია მიიღება დახრილი აგარის მთელ ზედაპირზე ინოკულუმის დაფენით.

პეტრის ჭურჭელში მკვრივ გარემოზე ინოკულაცია ხდება შემდეგნაირად. საცდელ მილებში მკვებავი საშუალება დნება მდუღარე წყლის აბაზანაში, გაცივდება 48-50°C-მდე და ასხამს სტერილურ ჭიქებში თანაბარ ფენაში 3-5 მმ სიმაღლით. გამაგრებულ გარემოს აშრობენ თერმოსტატში დახურულ ჭიქებში 20-30 წუთის განმავლობაში. ღია ჭიქები მოთავსებულია თავდაყირა თერმოსტატის თაროებზე, რომლებიც დაფარულია სტერილური ქაღალდით. ჭიქების გვერდით თავსახურები ათავსებენ. გაშრობისას, კონდენსაციის წყალი ორთქლდება მკვებავი მასალის ზედაპირიდან და ჭიქების შიდა ზედაპირიდან. თესვა კეთდება მარყუჟით პარალელური შტრიხების სახით ან შუშის ნაჭუჭით.

მიკრობის ტიპის განსაზღვრისას და ანაერობების გასაზრდელად ისინი აწარმოებენ თესვა ინექციითაგარის ან ჟელატინის სვეტში. ამისათვის საცდელ მილს აბრუნებენ თავდაყირა და საშუალების სვეტს ჭრიან ზემოდან ქვემოდან ძირამდე გრძელი სწორი ნემსით ინოკულუმით. შემდეგ ნემსი ფრთხილად ამოიღება და სინჯარა იხურება დამწვარი ბამბის საცობით. თუ საჭიროა სპეციალური სიფრთხილის ზომები ინფექციის საწინააღმდეგოდ, ნათესები ტარდება სპეციალურ კაბინეტში სუფთა კულტურების ხელახალი დათესვისთვის. ინოკულირებული მილები და პეტრის ჭურჭელი მოთავსებულია ზრდის ინკუბატორში.

მიკროორგანიზმები და სპორები, რომლებიც მდებარეობს მკვებავი მედიის შიგნით ან მათ ზედაპირზე, არ შეუძლიათ გადაადგილება, მაგრამ რჩებიან იმ ადგილას, სადაც იყვნენ გამაგრების დროს. თითოეული უჯრედი ან სპორა იწყებს გამრავლებას და 2-3 დღის შემდეგ ყალიბდება კოლონია -იგივე ტიპის უჯრედების დიდი რაოდენობა. თუ კოლონია ჩამოყალიბდა ერთი უჯრედიდან, მაშინ ეს იქნება მიკროორგანიზმის სუფთა კულტურა, რომლის უჯრედიდანაც ის გაიზარდა.

მზარდი კოლონიები უყურებენ ჯერ შეუიარაღებელი თვალით, შემდეგ კი გამადიდებელი შუშით ან მიკროსკოპის ქვეშ. ამავდროულად, შეუძლებელია არ შეამჩნიოთ, რომ კოლონიები განსხვავდებიან გარეგნულად, ფერით, აგებულებით და ა.შ.

კულტურული (ბაქტერიოლოგიური) კვლევის მეთოდი - მეთოდების ერთობლიობა, რომელიც მიზნად ისახავს მიკროორგანიზმების (ბაქტერიების) სუფთა კულტურების გამოყოფას და იდენტიფიცირებას მკვებავ გარემოზე კულტივირებით.

სუფთა კულტურა არის იმავე სახეობის მიკროორგანიზმების ერთობლიობა. ყველაზე ხშირად, სუფთა კულტურა მიიღება იზოლირებული კოლონიის (ერთი მიკრობული უჯრედის შთამომავლობის) შერჩევით და გაშენებით.

მეთოდის ნაბიჯები:

1. მასალის შეგროვება კვლევისთვის.

2. სუფთა კულტურის გამოყოფა და მისი იდენტიფიცირება.

3. დასკვნა.

მასალის შეგროვება კვლევისთვის.შესწავლილი მასალის ტიპი დამოკიდებულია კვლევის მიზანზე (დიაგნოსტიკა - პაციენტისგან; ეპიდემიოლოგიური ანალიზი - გარემოდან, საკვებიდან, პაციენტიდან და (ან) ბაქტერიის გადამტანიდან).

სუფთა კულტურის იზოლაცია. მოიცავს 3 ან 4 ეტაპს:

1. მასალის დათესვა (წინასწარი მიკროსკოპის შემდეგ) ჭიქაზე მკვრივი საკვები გარემოთი (სასურველია დიფერენციალური დიაგნოსტიკური ან სელექციური) იზოლირებული კოლონიების მისაღებად. იგი ყველაზე ხშირად იწარმოება მექანიკური გამოყოფის მეთოდით. ზოგიერთ შემთხვევაში (მაგალითად, სისხლი), მასალა წინასწარ ითესება თხევადი გამდიდრების გარემოში, რასაც მოჰყვება სუბკულტურა თეფშზე აგარის საშუალებით. ზოგჯერ მასალის შერჩევითი დამუშავება ტარდება ინოკულაციამდე (იზოლირებული მიკროორგანიზმის თვისებების გათვალისწინებით; მაგალითად, მჟავით ან ტუტეებით მკურნალობა რეზისტენტული ბაქტერიების იზოლირებისთვის). კულტივირებულია 37°C ტემპერატურაზე 18-24 საათის განმავლობაში. სხვადასხვა ტიპის ბაქტერიების გაშენების დრო შეიძლება განსხვავდებოდეს.

2(3): ა) კოლონიების შესწავლა აგარის ფირფიტაზე (კულტურული თვისებები), ყველაზე ტიპიურის შერჩევა; ბ) ამ კოლონიებიდან ნაცხის მომზადება შეღებვით (გრამის ან სხვა მეთოდების მიხედვით); ა) დანარჩენი შესწავლილი კოლონიის სკრინინგი დაგროვების გარემოზე და იზრდება თერმოსტატში ოპტიმალურ ტემპერატურაზე.

3 (4). დაგროვების ნიადაგზე მიღებული კულტურის სისუფთავის შესწავლა. ამით

დანიშნულებაა ნაცხის მომზადება, ლაქა (ჩვეულებრივ გრამის მიხედვით), მიკროსკოპული შესწავლა

მორფოლოგიური და ტინქტური ჰომოგენურობა (სხვადასხვა ხედვის სფეროში).

4 (5). სუფთა კულტურის იდენტიფიკაცია.

დასკვნა.მახასიათებლების მთლიანობის მიხედვით, საცნობარო (ტიპიური) შტამების თვისებებთან შედარებით, მითითებულია მასალისგან გამოყოფილი მიკროორგანიზმის ტიპი.

მეთოდის შეფასება:

უპირატესობები:შედარებით მაღალი მგრძნობელობა და სიზუსტე, ტესტის მასალაში მიკრობების რაოდენობის განსაზღვრის უნარი, ასევე ანტიბიოტიკების მიმართ მგრძნობელობა; შეზღუდვები:შედარებითი ხანგრძლივობა, მეთოდი ძვირია.

21. აერობებისა და ანაერობების მკვებავი საშუალებები. მოთხოვნები საკვები ნივთიერებების მიმართ, კლასიფიკაცია.

მოთხოვნები:

1. მედია უნდა იყოს მკვებავი

2. უნდა ჰქონდეს გარკვეული ph

3. უნდა იყოს იზოტონური, ე.ი. ოსმოსური წნევა გარემოში უნდა იყოს იგივე, რაც უჯრედში.

4. უნდა იყოს ტენიანი და არა ძალიან თხევადი

5. უნდა ჰქონდეს გარკვეული რედოქს პოტენციალი

6. უნდა იყოს სტერილური

7. უნდა იყოს ერთიანი, ე.ი. შეიცავს ინდივიდუალური ინგრედიენტების მუდმივ რაოდენობას.

საკვები ნივთიერებები შეიძლება დაიყოს:

ა) წარმოშობა

1) ნატურალური - ნატურალური საკვები (ხორცი, რძე, კარტოფილი);

2) ხელოვნური - სპეციალურად მომზადებული მიკრობების გასაზრდელად: - ნატურალური პროდუქტებისგან დამზადებული საშუალებები (ხორცის წყალი, ხორც-პეპტონის ბულიონი (MPB), ხორც-პეპტონური აგარი (MPA), - მუდმივი შემადგენლობის არმქონე; - სინთეზური საკვები ნივთიერებები - მკაცრად ხსნარები. განსაზღვრული რაოდენობით მარილები, ამინომჟავები, აზოტოვანი ფუძეები, ვიტამინები გამოხდილ წყალში - აქვთ მუდმივი შემადგენლობა, გამოიყენება მიკროორგანიზმების და უჯრედული კულტურების გასაშენებლად ვაქცინების, იმუნური შრატებისა და ანტიბიოტიკების წარმოებაში;

ბ) დანიშვნით:

1) ზოგადი დანიშნულება (MPB, MPA) - მიკრობების უმეტესობა იზრდება მათზე;

2) არჩევითი - შერჩევით ხელს უწყობს ერთი ტიპის მიკრობების ზრდას ნარევიდან (მაგალითად, იოლ-მარილის აგარი სტაფილოკოკებისთვის);

თემა: სტერილიზაცია, ასეპსისი, ანტისეპსისი, დეზინფექცია.

მიკროორგანიზმების გაშენების პრინციპები, მეთოდები და სუფთა კულტურების იზოლაცია.

ბაქტერიოლოგიური კვლევის მეთოდი. ეტაპი 1.

1. გაეცანით მიკრობიოლოგიასა და მედიცინაში გამოყენებული დეზინფექციისა და სტერილიზაციის ძირითად მეთოდებს.

2. იცოდე მიკროორგანიზმების ცვლის თავისებურებები, ლაბორატორიაში მათი გაშენების პრინციპები.

3. ინფექციური დაავადებების დიაგნოსტიკის ბაქტერიოლოგიური მეთოდის ოსტატი 1 ეტაპი.

1. მკვებავი საშუალებების, ლაბორატორიული მინის, სამედიცინო ინსტრუმენტების სტერილიზაციის მეთოდები, მოწყობილობები და რეჟიმები.

2. სადეზინფექციო საშუალებების ძირითადი ჯგუფები, მათი მოქმედების მექანიზმი, ფართობი და გამოყენების მეთოდი.

3. მკვებავი მედიის დანიშვნა მიკრობიოლოგიურ პრაქტიკაში.

4. მიკროორგანიზმების სუფთა კულტურების მიღების პრინციპი და ბაქტერიოლოგიური მეთოდის, როგორც „ოქროს სტანდარტის“ არსი ინფექციური დაავადებების დიაგნოსტიკაში.

5. მიკროორგანიზმების სუფთა კულტურების გამოყოფის ბაქტერიოლოგიური მეთოდის 1-ლი ეტაპის შესრულების მიზანი და თანმიმდევრობა.

1. აირჩიეთ სტერილიზაციისა და დეზინფექციის საშუალება, რეჟიმი კონკრეტული ამოცანების შესაბამისად.

2. აღწერეთ შემოთავაზებული საკვები ნივთიერებები, რომლებიც გამოიყენება მიკრობიოლოგიურ პრაქტიკაში.

3. აერობული მიკროორგანიზმების სუფთა კულტურების გამოყოფის ბაქტერიოლოგიური მეთოდის 1-ლი ეტაპის განხორციელება.

ტესტის კითხვები:

1. დაბალი და მაღალი ტემპერატურის ბაქტერიოსტატიკური და ბაქტერიციდული მოქმედება მიკროორგანიზმებზე.

2. სხვადასხვა კლასის ქიმიკატების გავლენა მიკროორგანიზმებზე. ანტისეპტიკები და სადეზინფექციო საშუალებები.

3. ცნებები: სტერილიზაცია, დეზინფექცია, ასეპსისი, ანტისეპსისი.

4. სტერილიზაციის მეთოდები, აღჭურვილობა და რეჟიმები, მათი არჩევანი სტერილიზაციის საგნის თვისებებიდან გამომდინარე.

5. სადეზინფექციო საშუალებების ძირითადი ჯგუფები და მათი გამოყენების ტაქტიკა ჯანდაცვის დაწესებულებებში.

6. მიკროორგანიზმების გაშენების პრინციპები და მეთოდები.

7. მკვებავი საშუალებები: კონცეფცია; მოთხოვნები მათთვის; კლასიფიკაცია.

8. მიკროორგანიზმების სახეობის, შტამის, კოლონიის, სუფთა კულტურის ცნება.

9. ბაქტერიოლოგიური მეთოდის არსი და მისი გამოყენების ფარგლები.

10. აერობების გამოყოფის ბაქტერიოლოგიური მეთოდის 1-ლი ეტაპის დანიშნულება და თანმიმდევრობა.

გაკვეთილზე შესრულებული დავალებები (UIRS):

1. გაეცანით სამედიცინო და მიკრობიოლოგიურ პრაქტიკაში სტერილიზაციისთვის გამოყენებულ მოწყობილობებს: ორთქლის სტერილიზატორი (ავტოკლავი), პასტერის ღუმელი.

2. შეარჩიეთ მკვებავი საშუალებების, ლაბორატორიული მინის, სამედიცინო ინსტრუმენტების სტერილიზაციის მოწყობილობები და რეჟიმები.

3. გაეცანით სამედიცინო და მიკრობიოლოგიურ პრაქტიკაში გამოყენებულ სადეზინფექციო საშუალებებს. შეარჩიეთ სადეზინფექციო საშუალებები და სადეზინფექციო რეჟიმი შემოთავაზებული ობიექტებისთვის.

4. გაეცანით მიკრობიოლოგიურ პრაქტიკაში გამოყენებულ სხვადასხვა საკვებ ნივთიერებებს, დაახასიათეთ ისინი შემადგენლობის, თანმიმდევრულობისა და დანიშნულების მიხედვით.

5. განახორციელოს აერობების სუფთა კულტურების გამოყოფის ბაქტერიოლოგიური მეთოდის 1 ეტაპი:

5.1. საცდელი მასალისგან მოამზადეთ ფიქსირებული პრეპარატი, შეღებეთ იგი გრამის მიხედვით, მიკროსკოპულად და გამოვლენილი მიკროორგანიზმების იდენტიფიცირება მორფოლოგიური და ტინქტური თვისებებით.

5.2. საცდელი მასალის დათესვა „პლატფორმაზე ინსულტის“ მეთოდით.

5.3. დათესეთ საცდელი მასალა დრიგალსკის მეთოდით (დემონსტრირება).

6. გაეცანით პათოლოგიური მასალების შეგროვებისა და ტრანსპორტირების ხელსაწყოების კომპლექტს.

კვლევითი დავალების განხორციელების სახელმძღვანელო მითითებები:

1. სტერილიზაციისთვის გამოყენებული მოწყობილობების გაცნობა: ორთქლის სტერილიზატორი (ავტოკლავი), პასტერის ღუმელი.

1.1. ორთქლის სტერილიზატორი (ავტოკლავი) - ორთქლის სტერილიზაცია წნევის ქვეშ.

სამედიცინო და მიკრობიოლოგიურ პრაქტიკაში სტერილიზაციის ყველაზე საიმედო და უნივერსალური მეთოდია ორთქლით სტერილიზაცია წნევის ქვეშ. იგი იწარმოება ავტოკლავში, რომელშიც სტერილიზებული საგნები თბება გაჯერებული ორთქლით ატმოსფერულზე მაღალი წნევით. მანომეტრის ჩვენებებსა და გაჯერებული ორთქლის ტემპერატურას შორის არის შემდეგი კავშირი:

ნულოვანი წნევა ითვლება ნორმალურ ატმოსფერულ წნევად (760 მმ Hg).

სტერილიზაცია შესაძლებელია მხოლოდ იმ შემთხვევაში, თუ ავტოკლავი სრულად მუშაობს და სათანადოდ მუშაობს სპეციალურად მომზადებული პერსონალის მიერ. ამიტომ აუცილებელია სტერილიზაციის რეჟიმის მუდმივი მონიტორინგი, რომელიც ტარდება ფიზიკური (მაქსიმალური თერმომეტრი და ა.შ.), ბიოლოგიური (ბიოტესტი მიკროორგანიზმების საცდელი კულტურების სპორებით) და ქიმიური (ქიმიური ტესტები, ინდიკატორები, როგორიცაა IS) მეთოდებით.

ავტოკლავების სტერილიზაციის რეჟიმის კონტროლი ხორციელდება ქიმიური მეთოდით ავტოკლავის ყოველი ჩატვირთვისას. ქიმიური ტესტი - მინის მილაკი ქიმიური ნივთიერებით, რომელსაც აქვს გარკვეული დნობის წერტილი: ანტიპირინი, რეზორცინოლი - 110 ± 1 °, ბენზოის მჟავა - 120 ± 2 °, ბენზამიდი - 126 ± 1 °, შარდოვანა, ნიკოტინამიდი, D (+)-მანოზა. - 132 ±2°. ქიმიური ტესტების შემადგენლობაში შეჰყავთ ანილინის საღებავი (მაჯენტა, ჟენტიანი იისფერი და ა.შ.), რომელიც თანაბრად აფერადებს ნივთიერებას მისი დნობისას. ამჟამად, IS ტიპის ინდიკატორები (Vinar, რუსეთი) უფრო ხშირად გამოიყენება, რაც წარმოადგენს ქაღალდის ზოლს მასზე გამოყენებული ინდიკატორის ნარევის ფენით და განკუთვნილია არა მხოლოდ ტემპერატურის, არამედ სტერილიზაციის დროის ოპერატიული ვიზუალური კონტროლისთვის (IS-). 120, IS-132). სტერილიზაციის რეჟიმის მონიტორინგი კვარტალურად ტარდება ბიოანალიზის გამოყენებით საცდელი კულტურის სპორებით Bacillus stearotermophilus BKM B-718.

1.2. პასტერის ღუმელი - მშრალი სითბოს სტერილიზაცია.

პასტერის ღუმელში ხდება სილიკონის რეზინის საფუძველზე დამზადებული მინის, ლითონისა და რეზინის პროდუქტების სტერილიზაცია. სტერილიზაციის რეჟიმი: 160°C - 150 წთ; 180°С - 60 წთ. სტერილიზაციის რეჟიმის კონტროლი თითოეულ ციკლზე ხორციელდება სტერილიზაციის ინდიკატორების IS-160, IS-180 დახმარებით; კვარტალური - ბიოტესტის გამოყენებით საცდელი კულტურის სპორებით ბაცილუს ლიქენიფორმისი PCS. G BKM B-1711 დ.

2. შეავსეთ სახლებიცხრილი ნომერი 1.

ცხრილი 1.

სტერილიზაცია

3. გაეცანით სადეზინფექციო საშუალებებს და შეავსეთ კლასშიცხრილი No2, აპლიკაციების გამოყენებით No1, 2.

ცხრილი 2.

დეზინფექცია

4. გაეცანით საკვებ ნივთიერებებს და შეავსეთ კლასშიცხრილი No3 "კვებითი მედია".

ცხრილი 3

5. კლინიკური მიკრობიოლოგია, როგორც სამედიცინო მიკრობიოლოგიის ფილიალი, წყვეტს ორ ძირითად ამოცანას: ინფექციური დაავადების ეტიოლოგიურ დიაგნოზს და ეტიოტროპული თერაპიის რაციონალურ არჩევანს.

მიკრობიოლოგიური დიაგნოსტიკის ძირითადი მეთოდიამ პრობლემების გადაჭრა არის ბაქტერიოლოგიური მეთოდი. ბაქტერიოლოგიური მეთოდის არსი არის პათოგენის სუფთა კულტურის იზოლირება, მისი ტიპისა და მგრძნობელობის დადგენა ანტიმიკრობული პრეპარატების მიმართ.

შესასწავლი მასალის შერჩევადამოკიდებულია დაავადების ტიპზე და გამომწვევის უპირატეს ლოკალიზაციაზე მისი განვითარების გარკვეულ ეტაპზე (პათოგენეზი). მასალა შეიძლება იყოს სისხლი, ცერებროსპინალური სითხე, ჭრილობის გამონადენი, ნახველი, განავალი, შარდი და ა.შ. სანდო შედეგის მისაღებად დიდი მნიშვნელობა აქვს მასალის აღების ტექნიკას.

სუფთა კულტურის იზოლირების წარმატება განისაზღვრება სისწორით მკვებავი გარემოს არჩევანი და გაშენების პირობები. არ არსებობს უნივერსალური მკვებავი საშუალება, რომლის გამოყენება შესაძლებელს გახდის ნებისმიერი მიკროორგანიზმების იზოლირებას ნებისმიერი საცდელი მასალისგან. ამიტომ, შესაძლო პათოგენების ფიზიოლოგიური მახასიათებლების გათვალისწინებით, მასალა ითესება კონკრეტულ საკვებ გარემოზე ან მკვებავი საშუალებების კომპლექსზე (სპეციალური, არჩევითი, დიფერენციალური დიაგნოსტიკა). ზოგიერთ მიკროორგანიზმს ასევე სჭირდება გაშენების განსაკუთრებული პირობები (ანაერობული, მიკროაეროფილური, ნახშირორჟანგის მაღალი შემცველობით).

პაციენტის პათოლოგიური მასალა ხშირად არის მიკროორგანიზმების ნარევი. ამასთან დაკავშირებით ამოცანაა მათი გამოყოფა და იზოლირებული კოლონიების მიღება. იზოლირებული კოლონია, ერთი მიკრობული უჯრედის რეპროდუქციის შედეგად და შედგება ერთი ტიპის უჯრედისაგან, არის სუფთა კულტურის მიღების საფუძველი. მიკრობიოლოგიურ პრაქტიკაში იზოლირებული კოლონიების მისაღებად გამოიყენება სხვადასხვა მეთოდი. ყველაზე ხშირად გამოიყენება შემდეგი:

1. საცდელი მასალის დათესვა "ინსულტის ბალიშით" მეთოდი- საცდელი მასალა გამოიყენება მკვრივი საკვები გარემოს ზედაპირზე შეზღუდულ ფართობზე და შემდეგ ნაწილდება თესვით ხშირი პარალელური დარტყმებით.

2. დრიგალსკის მეთოდი- პირველ ფინჯანზე დატანილი მკვებავი გარემოთი და დათესილი მასალა თანმიმდევრულად ირთვება იმავე სპატულით, სტერილიზაციის გარეშე, კიდევ 1-2 ჭიქა.

3. სექტორული მოსავლის მეთოდი– შესწავლილი მასალა ითესება თანმიმდევრულად ერთი მარყუჟით რამდენიმე სექტორზე. ამავდროულად, თესვის გარკვეული ტექნიკა (მეთოდი გოლდი) საშუალებას იძლევა არა მხოლოდ იზოლირებული კოლონიების მიღება, არამედ მიკროორგანიზმების რაოდენობის დადგენა საცდელი მასალის 1 მლ (გ)-ში, რაც მნიშვნელოვანია ოპორტუნისტული მიკროორგანიზმების (OPM) ეტიოლოგიური როლის შესაფასებლად.

5.1.აერობების გამოყოფის ბაქტერიოლოგიური მეთოდის 1-ლი ეტაპის ჩატარება:

საცდელი მასალისგან ფიქსირებული პრეპარატის მომზადება, გრამის მეთოდის მიხედვით შეღებვა, მიკროსკოპულად, აღმოჩენილი მიკროორგანიზმების იდენტიფიცირება მორფო-ტინქტორული თვისებებით; ყურადღება მიაქციეთ მიკროორგანიზმების რაოდენობას. შედეგები ჩაიწერეთ ოქმში და გამოიტანეთ დასკვნა;

დათესეთ საცდელი მასალა ნახევარ ჭიქაზე მკვრივი მკვებავი გარემოთი „ინსულტის პლატფორმით“ მეთოდით;

· დათესეთ საცდელი მასალა სამ თეფშზე მკვებავი საშუალებებით დრიგალსკის მეთოდით (დემონსტრირება);

ჭურჭელს მიანიშნეთ ინოკულაციის თარიღი და თავდაყირა მოათავსეთ თერმოსტატში 37°C ტემპერატურაზე 18-24 საათის განმავლობაში.

6. პათოლოგიური მასალის შეგროვებისა და მიწოდების საშუალებები

შენიშვნა: * - გამოიყენება, თუ მასალის მიტანის დრო ლაბორატორიაში მისი მიღების შემდეგ აღემატება 1,5-2 საათს.

კითხვები თვითკონტროლისთვის:

1. დაასახელეთ და დაასაბუთეთ მიკროორგანიზმების გაშენების პრინციპები.

2. რატომ გამოიყენება პათოლოგიური მასალის დასათესად არჩევითი, დიფერენციალური დიაგნოსტიკური და დაგროვების საშუალებები?

3. დაასაბუთეთ მიკროორგანიზმების სუფთა კულტურების მიღების პრინციპი.

4. რატომ არის ბაქტერიოლოგიური მეთოდი „ოქროს სტანდარტი“ ინფექციური დაავადებების მიკრობიოლოგიურ დიაგნოსტიკაში?

5. რაზეა დაფუძნებული მიკროორგანიზმების სუფთა კულტურების მიღების ქიმიური და ბიოლოგიური მეთოდები?

6. რა განსხვავებაა სტერილიზაციასა და დეზინფექციას შორის?

7. დაასაბუთეთ სტერილიზაციისა და დეზინფექციის მიზანი მიკრობიოლოგიურ და სამედიცინო პრაქტიკაში.

8. დაასაბუთეთ სტერილიზაციის რეჟიმის მონიტორინგისთვის თერმული ინდიკატორის სისტემების გამოყენების უპირატესობა (IS ინდიკატორის მაგალითზე, რუსეთი, ვინარი).

ლიტერატურა:

გაკვეთილები:

1. ბორისოვი L.B. სამედიცინო მიკრობიოლოგია, ვირუსოლოგია, იმუნოლოგია. - მ.: შპს შსს, 2002. - ს. 26-29, 63-66, 150-159.

2. პოზდეევი O.K. სამედიცინო მიკრობიოლოგია / ედ. აკად. RAMS V.I. Pokrovsky. - M.: GEOTAR Medicine, 2001. - S. 76-77, 126-130, 253-265.

დამატებითი ლიტერატურა:

1. პათოგენურობის III - IV ჯგუფის მიკროორგანიზმებთან და ჰელმინთებთან მუშაობის უსაფრთხოება: სანიტარული წესები. - მ.: რუსეთის ჯანდაცვის სამინისტროს სახელმწიფო სანიტარული და ეპიდემიოლოგიური ზედამხედველობის ფედერალური ცენტრი, 1999. - 107გვ.

ლექციები მიკრობიოლოგიაში.

ტესტები.

ჯანდაცვის მსოფლიო ორგანიზაციის თანამედროვე პროგრამების შესაბამისად, საზღვარგარეთ ტუბერკულოზის გამოვლენის საფუძველია ნახველის ნაცხის მიკროსკოპია, რომელიც მიღებულია ხველებით დაავადებული პაციენტებისგან, რომლებიც მიმართეს ზოგად პრაქტიკოსებს; ნაცხი შეღებილია Ziehl-Neelsen-ის მიხედვით. ეს ტექნიკა შედის ნახველის გამომწვევი პაციენტის შიდა პოლიკლინიკაში და კლინიკურ მინიმალურ გამოკვლევაში. 1995 წელს რუსეთის ჯანდაცვისა და სამედიცინო მრეწველობის სამინისტრომ №8 ბრძანებით „სამედიცინო დაწესებულებების ლაბორატორიული კლინიკური მიკრობიოლოგიის (ბაქტერიოლოგიის) საქმიანობის განვითარებისა და გაუმჯობესების შესახებ“ დაადასტურა კლინიკური დიაგნოსტიკური ლაბორატორიების ეს ვალდებულება. ტუბერკულოზის ნახველის სავალდებულო ბაქტერიოლოგიური გამოკვლევა უნდა მოეწყოს არატრანსპორტირებულ პაციენტებს, სასუნთქი ორგანოებისა და შარდსასქესო სისტემის ქრონიკული დაავადებების მქონე პაციენტებს, აგრეთვე ტუბერკულოზისთვის არახელსაყრელი მეცხოველეობის ფერმების მუშაკებს. ეს უძველესი მეთოდი სრულად ინარჩუნებს თავის მნიშვნელობას პრაქტიკული კლინიკური დიაგნოსტიკური ლაბორატორიებისთვის ხელმისაწვდომობის, დაბალი ღირებულებისა და განხორციელების სიჩქარის გამო.

Ziehl-Neelsen-ის მიხედვით შეღებილი ნაცხის ბაქტერიოსკოპიით, Mycobacterium tuberculosis შეიძლება გამოვლინდეს მინიმუმ 100 000 - 1 000 000 ბაქტერიული უჯრედის თანდასწრებით 1 მლ პათოლოგიურ მასალაში (ნახველი). მიკობაქტერიების ასეთი დიდი რაოდენობა გვხვდება დაავადების პროგრესირებადი ფორმების მქონე პაციენტებში (დისემინირებული და ფიბროზულ-კავერნოზული). პაციენტების გაცილებით დიდ რაოდენობაში მათ მიერ იზოლირებული მიკობაქტერიების რაოდენობა ბაქტერიოსკოპიის მეთოდის ლიმიტს ქვემოთაა, რაც ამ მეთოდის დიდი მინუსია. მხოლოდ რუსეთის ფედერაციის ჯანდაცვის სამინისტროს №109 ბრძანებაში მითითებული ყველა საჭირო პირობის სრულყოფილი დაკმაყოფილებით - დიაგნოსტიკური მასალის მინიმუმ სამი ნიმუშის შესწავლა, ნახველის სწორი შეგროვება, თანამედროვე ბინოკულარული მიკროსკოპის არსებობა. და მაღალი ხარისხის რეაგენტები, 300-მდე ხედვის ველის დათვალიერებით - შესაძლებელია მგრძნობელობის გაზრდა 10000 მიკრობული უჯრედის მიმართ.

ტუბერკულოზის მიკობაქტერიებს აქვთ სხვადასხვა სიგრძის თხელი, ოდნავ მოხრილი ღეროების გარეგნობა ბოლოებში ან შუაში, ჯგუფურად და ცალკე განლაგებული (სურათი 1, ა).

ფლუორესცენტური მიკროსკოპია

მეთოდი ეფუძნება ფლუორესცენტური საღებავის (აურამინი, როდამინი) კარბოლური წარმოებულის შეღწევას მიკრობულ უჯრედში. ფლუორესცენტური საღებავით აურამინ-როდამინით შეღებვისას, მიკობაქტერიების ნახვა შესაძლებელია 100-ჯერ არაიმერსიული გადიდებით. შედეგი უფრო ზუსტია, როდესაც Ziehl-Neelsen-ის მიერ შეღებილია კარბოლის ფუქსინით და ჩაძირვის მიკროსკოპით 1000x გადიდებით. DOTS ტექნოლოგიების გამოყენებისას რეკომენდებულია Ziehl-Nielsen-ის ნაცხის შეღებვა. მიკობაქტერიები ამ შემთხვევაში ჰგავს მანათობელ ყვითელ ღეროებს (სურათი 1, ბ). მეთოდს აქვს უდაო უპირატესობები, რადგან ის საშუალებას იძლევა ვიხილოთ პრაქტიკულად მთელი ნაცხი უფრო დაბალი მიკროსკოპის გადიდებით და ეს მეთოდი ასევე უფრო ეკონომიურია, რადგან ნაცხის ნახვის დროს დახარჯული დრო მცირდება.

LM მეთოდის ნაკლოვანებები მოიცავს ლუმინესცენტური მიკროსკოპის საგრძნობლად მაღალ ღირებულებას, შეღებვის პროცედურის დროს, ნაცხის pH-ის შესაბამისობასა და კორექტირებას, აგრეთვე სადიაგნოსტიკო მასალაში (განსაკუთრებით ნახველში) მიკობაქტერიების გამოყოფას. მიმდებარე ლორწოს, რომელიც ხელს უშლის ფლუორესცენტური საღებავის შეღწევას მიკრობულ უჯრედში. ამიტომ, მიზანშეწონილი არ არის LM-ის გამოყენება მშობლიური ნახველისთვის, მაგრამ რეკომენდებულია ამ მეთოდის გამოყენება კულტურისთვის დამუშავებული და დეკონტამინაციის შემდეგ განეიტრალებული მასალის ცენტრიფუგაციის შემდეგ მომზადებული ნაცხის გამოკვლევისას. ამიტომ LM მეთოდი უნდა იქნას გამოყენებული ბაქტერიოლოგიურ ლაბორატორიებში, სადაც კულტურული და მიკროსკოპული გამოკვლევა შეიძლება ჩატარდეს სადიაგნოსტიკო მასალის ერთი და იგივე ნაწილიდან.

ჰისტოლოგიური ან ციტოლოგიური გამოკვლევის დროს ზოგჯერ შესაძლებელია გამოვლინდეს ტუბერკულოზისთვის დამახასიათებელი უჯრედები, რომლებიც ორგანიზმის დამცავი რეაქციის შედეგია ტუბერკულოზის ბაცილის შეყვანაზე. ლანგანსის გიგანტური უჯრედების არსებობა ციტოგრამაში უდავოდ წყვეტს ტუბერკულოზის დიაგნოზს. ეს უჯრედები ძალიან დიდია (დიამეტრის 80-90 მიკრონი ან მეტი). ციტოპლაზმა შეღებილია ნაცრისფერ-ლურჯად. მის პერიფერიაზე დიდი რაოდენობით ბირთვები (20-მდე) განლაგებულია რგოლის სახით განლაგებული (სურათი 1, გ).

ტუბერკულოზის კიდევ ერთი ნიშანი არის ეგრეთ წოდებული ეპითელიოიდური უჯრედების არსებობა, საიდანაც ვითარდება ლანგანსის უჯრედები. ეს ხდება ბირთვების რაოდენობის ზრდით ციტოპლაზმის გაყოფის გარეშე, რომელიც მხოლოდ ზომით იზრდება (სურათი 1, დ).

მიკროსკოპია საშუალებას გაძლევთ სწრაფად მიიღოთ შედეგი, მაგრამ აქვს დაბალი მგრძნობელობა და სპეციფიკა, მჟავა-სწრაფი მიკობაქტერიების დიფერენცირების შეუძლებლობა.

სურათი 1 - Mycobacterium tuberculosis
a - Ziehl-Nelsen შეღებვის მეთოდი
ბ - ლუმინესცენციური მიკროსკოპის მეთოდი
გ - ლანღასის უჯრედები
d - ეპითელიოიდური უჯრედები

კულტურული მეთოდი

ჩვენს ქვეყანაში Mycobacterium tuberculosis-ის გამოვლენის ყველაზე გავრცელებული მეთოდი კულტურული მეთოდია. ეს არის ტუბერკულოზის ბაქტერიოლოგიური დიაგნოზის "ოქროს სტანდარტი", რადგან მეთოდის მგრძნობელობა მნიშვნელოვნად აღემატება მიკროსკოპულს და შესაძლებელს ხდის მიკობაქტერიების სუფთა კულტურის მიღებას მისი შემდგომი იდენტიფიკაციისა და წამლის წინააღმდეგობის შესწავლისთვის. ეს მეთოდი იძლევა დადებით შედეგებს 20-დან 100 სიცოცხლისუნარიანი მიკრობული უჯრედის არსებობით 1 მლ-ზე ტესტის მასალაში. თუმცა, ეს შრომატევადი და ხანგრძლივია იმის გამო, რომ Mycobacterium tuberculosis ძალიან ნელა იზრდება და მათი გამოვლენა შეიძლება დარეგისტრირდეს მხოლოდ 3 კვირის გაშენებიდან.

ისტორიულად, კვერცხზე დაფუძნებული საკვები ნივთიერებები (Levenshtein-Jensen, Finn-2, Ogawa, Anikin, Novaya, Popescu) არის ყველაზე ფართოდ გამოყენებული მყარი საკვები ნივთიერებები, რომლებიც გამოიყენება MBT იზოლაციისთვის. მასალის ინოკულაცია ლევენშტეინ-იენსენის გარემოზე ტარდება ბაქტერიოლოგიურ ლაბორატორიაში. პირველი კოლონიების ზრდა კლასიკურ მედიაზე აღინიშნება 4-დან 8 კვირამდე. თუმცა, Middlebrook agar media (7H10, 7H11), რომელიც გამოჩნდა ბოლო წლებში, იძლევა მიკობაქტერიების ზრდის უფრო სწრაფად გამოვლენას (ორიდან ოთხ კვირამდე) და იძლევა უკეთეს შესაძლებლობებს კოლონიის მორფოლოგიის შესასწავლად, ვიდრე კვერცხუჯრედის მედიაზე. აგარის მკვებავი მედიის მინუსი არის თესლის ინკუბაციის აუცილებლობა თერმოსტატში ნახშირორჟანგით, ამიტომ აგარის მედია პრაქტიკულად არ გამოიყენება რუსეთში.

უნდა აღინიშნოს, რომ მიკობაქტერიების სხვადასხვა შტამების მაღალი სელექციურობის და სრული ცილების საჭიროების გამო, ჯერ კიდევ არ არსებობს უნივერსალური მკვებავი საშუალება, რომელსაც შეუძლია შეცვალოს ყველა დანარჩენი. რუსეთის ფედერაციის ჯანდაცვის სამინისტროს №109 ბრძანებაში რეკომენდებულია MBT-ზე სადიაგნოსტიკო მასალის დასათესად გამოიყენოს ერთი სინჯი საერთაშორისო მკვებავი გარემო Levenshtein-Jensen და Finn-2. თუმცა, პრაქტიკა გვიჩვენებს, რომ ამ მედიის გარდა, მიზანშეწონილია გამოიყენოთ რომელიმე დამატებითი და მკვებავი გარემოს სამ სინჯარაში ინოკულაცია ასევე ზრდის კულტურული დიაგნოსტიკის ეფექტურობას.

ტუბერკულოზის სრულფასოვანი კულტურული დიაგნოსტიკისთვის აუცილებელია შესაბამისი საშუალებები და აღჭურვილობა. განსაკუთრებით მნიშვნელოვანია ცენტრიფუგის და აეროზოლის საწინააღმდეგო დაცვის არსებობა და 3000 გ აჩქარების უზრუნველყოფის შესაძლებლობა. ასევე ბიოლოგიური უსაფრთხოების კაბინეტები ინტრალაბორატორიული ინფექციის თავიდან ასაცილებლად.

ტუბერკულოზის კულტურული დიაგნოზის მთავარი მინუსი არის კვლევის ხანგრძლივობა - სამი კვირიდან სამ თვემდე. ამიტომ, მიკობაქტერიების ზრდის დაჩქარების მეთოდების შემუშავების შემდგომი კვლევა კვლავ აქტუალური რჩება.

BACTEC სისტემები

ტუბერკულოზის კულტურული დიაგნოსტიკა ამჟამად განიცდის ფუნდამენტურ ცვლილებებს, რომლებიც დაკავშირებულია სრულად ავტომატიზირებული MBT კულტივირების სისტემების პრაქტიკაში დანერგვასთან. ამ მეთოდებს შორის მთავარი განსხვავებაა თხევადი მკვებავი საშუალებების გამოყენება კულტივირებისთვის, რასაც მოჰყვება რადიომეტრიული (BACTEC 460), კოლორიმეტრიული (Mb-Bact, BactALERT) და ლუმინესცენტური ზრდის გამოვლენა (BACTEC MGIT 960). ამ სისტემებში თხევად მკვებავ გარემოზე MBT-ის ზრდა შეიძლება გამოვლინდეს 1-2 კვირის შემდეგ, რაც დამოკიდებულია სადიაგნოსტიკო მასალაში მათი საწყისი ოდენობის მიხედვით. მიკობაქტერიების გამოვლენის სიხშირე ასევე გარკვეულწილად უფრო მაღალია, ვიდრე მკვრივი საკვები ნივთიერებებით. ავტომატური BACTEC სისტემებმა შესაბამისი ფლაკონების გამოყენებით, რომლებიც შეიცავს სხვადასხვა ტუბერკულოზის საწინააღმდეგო პრეპარატებს, შეუძლიათ შეამცირონ მიკობაქტერიების წამლის წინააღმდეგობის ტესტირების დრო 10-14 დღემდე.

ჩამოთვლილი ავტომატური სისტემებიდან, BACTEC MGIT 960BD სისტემა ამჟამად ყველაზე ეფექტურია. MGIT ფლაკონები თხევადი 7H9 კულტივირების საშუალებით შეიცავს ფლუორესცენტულ ინდიკატორს ქვედა ნაწილში სილიკონის ქვეშ, "ჩაქრება" ჟანგბადის მაღალი კონცენტრაციით. ჟანგბადის შეწოვის პროცესში მიკობაქტერიების ზრდის არსებობისას ინდიკატორი იწყებს ნათებას, ფლუორესცენციის რეგისტრაცია BACTEC MGIT სისტემაში ხდება ავტომატურად. MGIT ფლაკონების გამოყენება ასევე შესაძლებელია "ხელით", შემდეგ ლუმინესცენციის რეგისტრაცია ხდება ტრანსილუმინატორის გამოყენებით MGIT ფლაკონებზე 11 დღის განმავლობაში.